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hDaxx与乙型肝炎病毒X蛋白的相互作用被引量：1: 2008年; 目的采用酵母双杂交法研究HBVX蛋白与hDaxx蛋白的相互作用，为探讨HBVX蛋白的致癌机制奠定实验基础。方法构建pGBKT7-hDaxx和pGADT7-HBX重组质粒，分四组转化酵母AHl09，A组为pGADT7和pGBKT7，B组为pGBKT7-hDaxx和pGADT7-HBX，C组为pGADT7-T和pG-BKT7-Lam，D组为pGADT7-T和pGBKT7-p53。将转化菌落接种于SD／-Tip-ku（二缺）固体平板，长出克隆后再接种于SD／-Tip-Leu-His（三缺）和SD／-Tip-Leu-His-Ade（四缺）平板，30℃培养36～72h。裂解酵母菌，提取蛋白，经SDS-PAGE、Western blot检测hDaxx和X蛋白在酵母中的表达。结果仅有共转化pGBKT7-hDaxx和pGADT7-HBx的AHl09可以在三缺及四缺平板上生长。Western blot检测到hDaxx和X蛋白均能在酵母中表达。结论HBV X蛋白与hDaxx能在酵母细胞内发生相互作用。; 周艺李金丽万艳平; 关键词：HDAXX 乙型肝炎病毒X蛋白酵母双杂交

GFP-HPV18 E2删除突变体融合蛋白真核表达载体的构建与鉴定被引量：1: 2007年; 目的构建人乳头瘤病毒18型早期蛋白2(HPV18 E2)删除突变体N端(TAD)、C端(DBD)与增强型绿色荧光蛋白(GFP)融合蛋白的真核表达载体,为研究HPV18 E2基因与宫颈癌发生的关系提供实验基础。方法用PCR扩增HPV18 E2 TAD、DBD基因序列,用EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切pEGFP-C1载体与TAD、DBD基因PCR产物,纯化回收后,用连接酶连接并转化大肠杆菌JM109,筛选阳性克隆,并对其进行双酶切和测序鉴定。结果阳性克隆质粒经双酶切后,琼脂糖凝胶电泳可见4.7 kb6、18 bp和243 bp附近的片段。DNA测序结果经与GenBank登录的序列做BLAST分析,显示重组质粒分别含有618 bp与243 bp的目的基因片段,无碱基错配和移码突变,读码框完全正确。结论成功地构建了GFP-HPV18 E2删除突变体融合蛋白真核表达载体pEGFP-C1/TAD与pEGFP-C1/DBD。; 陈春莲彭俊余敏君尹卫国朱翠明万艳平; 关键词：E2基因绿色荧光蛋白真核表达

Daxx亚细胞定位研究进展被引量：5: 2009年; 死亡域相关蛋白(death domain-associated protein,Daxx)是一种高度保守的核蛋白,在转录调控、致癌、抵抗病毒感染等方面有重要作用。Daxx可定位于早幼粒细胞白血病蛋白核体、核质、核仁、胞浆和异染色质。Daxx通过修饰或与其他蛋白相互作用后能在亚细胞区室之间发生转位。应激条件下,Daxx与多种分子相互作用并发生转位,进而影响下游信号通路。本文综述了Daxx在不同条件下的亚细胞定位及在各亚细胞区室之间的转位。; 陈苏芳朱翠明万艳平; 关键词：DAXX 亚细胞定位转位应激

HBV X蛋白即时高表达上调巨噬细胞分泌TNF-α和IL-1β被引量：2: 2007年; 目的:将乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白真核表达载体pcDNA3.1(+)-HBx转染巨噬细胞,观察X蛋白即时高表达对巨噬细胞分泌细胞因子TNF-α、IL-1β的影响,为进一步研究HBVX蛋白的致病机制奠定实验基础。方法:将真核表达载体pcDNA3.1(+)-HBx通过SuperFectTM脂转染试剂转染巨噬细胞24小时后,用LPS刺激巨噬细胞,利用Westernblot鉴定X蛋白在巨噬细胞中的表达,并用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测pcDNA3.1(+)-HBx转染的巨噬细胞不同时间(12、24、48小时)培养上清液中细胞因子TNF-α、IL-1β的含量,统计软件SPSS13.0分析所得数据。结果:将真核表达载体pcDNA3.1(+)-HBx转染巨噬细胞,Westernblot结果显示pcDNA3.1(+)-HBx能在巨噬细胞中表达约17kD的目的蛋白,即X蛋白;ELISA法测定细胞上清液中TNF-α、IL-1β的含量,LPS刺激组及pcDNA3.1(+)组与空白对照组有显著性差异(P<0.01),pcDNA3.1(+)-HBx组与LPS刺激组及pcDNA3.1(+)组有显著性差异(P<0.01),而LPS刺激组与pcDNA3.1(+)组无显著性差异(P>0.05),即LPS可活化巨噬细胞分泌细胞因子,且X蛋白即时高表达可引起LPS诱导的巨噬细胞分泌TNF-α和IL-1β明显增加。结论:乙型肝炎病毒X蛋白即时高表达上调LPS刺激的巨噬细胞分泌TNF-α和IL-1β。; 王静蒋永林余敏君蔡恒玲李金丽万艳平; 关键词：X蛋白巨噬细胞 TNF-Α IL-1Β

hDaxx即时高表达增强HBVX蛋白对HepG2凋亡的抑制作用被引量：1: 2008年; [目的]研究乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)与hDaxx的相互作用及对HepG2细胞凋亡的影响。[方法]构建pGBKT7-hDaxx和pGADT7-HBx酵母表达载体,利用酵母双杂交系统检测HBx与hDaxx的相互作用。将HBV X基因转染HepG2细胞,建立稳定表达HBx的HepG2X细胞株;pcDNA3.1-hDaxx转染HepG2X,5-Fu诱导凋亡,流式细胞术检测凋亡。[结果]共转pG-BKT7-hDaxx和pGADT7-HBx酵母质粒的酵母菌能在SD/-Trp-Leu-His(三缺)和SD/-Trp-Leu-His-Ade(四缺)的平板上生长,且Western blot检测到hDaxx和HBx在同一株酵母菌中的表达;稳定转染HBV X基因的HepG2细胞组凋亡率明显低于HepG2细胞组(P<0.01);且转染pcD-NA3.1-hDaxx后,细胞凋亡率进一步降低,与pcDNA3.1-hDaxx没有剂量依赖关系。[结论]HBx与hDaxx在酵母细胞内存在相互作用;hDaxx的即时高表达可增强HBx对5-Fu诱导的HepG2凋亡作用,HBx可能通过与hDaxx相互作用而抑制HepG2凋亡。; 李金丽万艳平朱翠明王鑫尹卫国蔡恒玲; 关键词：乙型肝炎病毒 X蛋白 HDAXX 凋亡

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湖南省自然科学基金(06JJ4108)