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甘蓝eSRK重组体的构建及其与SCR的相互作用: 2012年; SRK与SCR是甘蓝自交不亲和雌雄性决定因子,两者间相互作具有单倍型特异性。为了探讨HVI/II区域在SRK单倍型特异性及其与SCR互作中的作用,采用重组技术构建甘蓝不同单倍型eSRK(SRKE与SRKF)间的重组体eSRKE-1、eSRKE-2和eSRKE-3,用酵母双杂交系统3检测各eSRK重组体与SCR之间的相互作用。结果表明:SCRE能与eSRKE作用,而不能与eSRKF作用,说明eSRKE、eSRKF属于不同单倍型;SCRE与重组体eSRKE-1、eSRKE-2、eSRKE-3均不发生作用,HVI和HVII区域内差异的氨基酸位点共同参与了与SCR的作用;SCRF不能与eSRKE-1、eSRKE-2、eSRKE-3作用,替换HVI/II区域后并不能改变SRK的单倍型。; 韦静宜高启国任雪松王小佳李成琼宋明; 关键词：SRK SCR 酵母双杂交

甘蓝自交不亲和决定因子的体外表达和相互作用的检测被引量：9: 2009年; S位点受体激酶(SRK)和S位点富含半胱氨酸蛋白/S位点蛋白11(SCR/SP11)分别为甘蓝自交不亲和(self-incom patibility,SI)信号传导的雌雄决定因子。为了深入研究两者的作用机理和进行人工调控,本研究以结球甘蓝ZQ为材料,利用pET.NusA融合蛋白表达系统,将包含SRK胞外域和跨膜域的mSRK蛋白和SCR蛋白在大肠杆菌BL21中融合表达,经SDS-PAGE电泳检测表达出融合蛋白大小分别约为116kD和74kD。进一步将两融合蛋白进行体外相互作用的检测,结果表明mSRK与SCR蛋白能够相互结合形成稳定的复合体,这为下一步实现SRK-SCR复合体聚合与解离的人为调控提供了技术平台。; 杨洋高启国宋明牛义汤青林朱利泉王小佳; 关键词：结球甘蓝自交不亲和

甘蓝BYPASS1编码基因的克隆与表达分析被引量：2: 2013年; 通过双向电泳结合MALDI-TOF-TOF/MS质谱技术在甘蓝柱头内鉴定出1个受自花授粉诱导上调表达的BYPASS1蛋白(BPS1)。利用PCR技术扩增甘蓝BPS1基因的编码序列,序列分析结果表明:该基因没有内含子,开放阅读框为1059bp,编码352个氨基酸,蛋白质分子量为38.7kD。氨基酸同源性和系统发生树分析结果表明:甘蓝BPS1与拟南芥BPS1亲缘最近,氨基酸同源相似性达85%;与烟草BPS2关系较远。RT-PCR检测结果表明:甘蓝BPS1基因在开花前1～2d的花瓣、萼片、花药、柱头和叶片中均有表达,柱头中的表达量最高。实时荧光定量PCR分析结果表明:甘蓝柱头内BPS1表达水平在自花授粉后逐渐升高,异花授粉后柱头内BPS1表达水平先升高后降低再升高。; 刘豫东高启国曾静张林成朱利泉任雪松王小佳; 关键词：甘蓝自花授粉异花授粉

甘蓝两种SRK短截蛋白的体外表达及其与THL1作用检测被引量：1: 2011年; 为探明S–位点受体激酶(SRK)上与类硫氧还蛋白1(THL1)作用的氨基酸区域以及两者间作用方式,依据SRKE1上功能域分布构建了两种SRKE1短截体原核表达质粒pGEX-SRKE1A和pGEX-SRKE1B,分别在大肠杆菌BL21中获得了可溶性表达。通过体外孵育检测蛋白质相互作用的方法对SRKE1A、SRKE1B与THL1相互作用进行了检测,结果表明SRKE1A和SRKE1B均可与THL1结合,明确了THL1与SRK相互作用并不依赖于SRK激酶活性。两类SRK等位序列间比对结果表明Cys在两类SRK间的保守性存在明显差异,推测两类SRK材料亲和性的差异可能与Cys保守性不同有关。; 高启国孙梓健韦静宜朱利泉王小佳; 关键词：甘蓝

甘蓝柱头蛋白质双向电泳体系的建立被引量：1: 2012年; 蛋白质提取方法和电泳条件是蛋白质组学研究中双向电泳的关键。为建立适合甘蓝柱头总蛋白质的双向电泳体系,本试验以甘蓝柱头为材料,采用改良TCA/丙酮沉淀法提取柱头总蛋白质,通过对IPG胶条、上样量、聚焦程序、SDS-PAGE胶浓度等的优化,建立了甘蓝柱头总蛋白质双向电泳体系,即选用长17cm、pH3～10NL的IPG胶条,上样量150μg,按照聚焦程序Ⅰ进行等电聚焦,第二向SDS-PAGE胶浓度选用12%,得到了分辨率高、重复性好的双向电泳图片。; 曾静陈松朱利泉高启国王小佳杨晓红; 关键词：自交不亲和蛋白质双向电泳

甘蓝自交不亲和相关转录因子BosiP_(A1)蛋白基因的克隆与表达分析: 2013年; 通过自交不亲和甘蓝‘A1’自花授粉1 h和未授粉柱头蛋白质表达谱的对比,鉴定出1个受自花授粉诱导上调表达的蛋白,通过PCR技术获取了其编码序列,命名为BosiPA1蛋白,其基因全长为3 730 bp,具有1个1 092 bp的完整编码框(KF314579)。BosiPA1由6个外显子、5个内含子组成,编码363个氨基酸。序列分析表明BosiPA1蛋白具有典型的basic helix-loop-helix(bHLH)功能域,在SCR、SRK、Exo70A1基因的ATG上游启动子序列中存在可以被bHLH功能区识别并结合的E-box(CANNTG)序列。在分子进化上甘蓝BosiPA1与AtbHLH128距离最近,与AtHEC1/2/3和TgGBOF-1处在同一个分支。RT-PCR检测表明甘蓝BosiPA1基因在花瓣、萼片、花粉、柱头和叶片中均有表达;荧光定量PCR分析表明BosiPA1基因在自花授粉10 min、30 min、1 h的柱头中呈逐渐上升趋势。上述结果说明BosiPA1与bHLH的进化分支较早,可能是一个参与甘蓝多器官发育的自交不亲和相关的转录因子。; 刘豫东朱利泉高启国曾静张林成任雪松王小佳; 关键词：甘蓝基因克隆

自交不亲和甘蓝亲和花粉授粉早期差异蛋白质分析被引量：6: 2013年; 为从蛋白质的角度揭示自交不亲和甘蓝亲和授粉早期花粉与柱头相互作用,将蛋白质组学方法应用于自交不亲和性甘蓝柱头与亲和花粉互作早期差异蛋白质的研究。结果表明,亲和授粉后 3 ～ 5min 与 1 h 对比,有 116 个差异蛋白质点,而授粉后 1 h 与 2 h 差异不显著。按照特异表达与变化量大的蛋白质点优先原则,初步选取差异点中 71 个点做质谱分析,鉴定出 31 个可信差异蛋白质。与亲和授粉后 3 ～ 5 min 组相比,1 h 组中特异表达蛋白质有 19 个,上调表达 9 个,下调表达 3 个。31 种蛋白质的生物信息学分析表明,有两种蛋白与前人发现的与花粉管在柱头中生长发育相关蛋白相同,其他 29 种参与包括胁迫与防御应答在内多种生理过程。对早期差异蛋白中这种"既有促进花粉管发育的蛋白,也有与防御相关蛋白"现象分析表明,花粉管生长性侵入柱头的过程有可能伴随着柱头抗性的提高。; 陈松曾静高启国朱利泉刘豫东任雪松王小佳; 关键词：甘蓝授粉双向电泳

基于SRK和SCR序列的甘蓝自交不亲和系单倍型分析被引量：2: 2011年; 采用RT-PCR和其他分子生物学方法,以甘蓝自交不亲和系E1和F1柱头cDNA为模板扩增SRKE1和SRKF1基因,以花药cDNA为模板扩增SCRE1和SCRF1基因.经序列比对首次证明E1和F1材料分别为S28和S7单倍型.经三维结构分析,预测SCRE1上C5-C6和C7-C8之间氨基酸序列决定SCRE1的单倍型特异性,SRKE1上TNNSFYSRLKVS序列决定了SRKE1的单倍型特异性,并对两者相对作用的关键氨基酸位点进行了分析.; 高启国韦静宜朱利泉王小佳; 关键词：甘蓝自交不亲和性单倍型

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博士科研启动基金(SWUB2008042)