国家重点基础研究发展计划(2006CB708202)
- 作品数：2 被引量：10H指数：2
- 相关作者：陶能国邓秀新张建成徐娟潘志勇更多>>
- 相关机构：华中农业大学更多>>
- 发文基金：长江学者和创新团队发展计划国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- ‘红肉脐橙’八氢番茄红素合成酶基因的克隆与原核表达被引量：5
- 2008年
- 【目的】克隆、分析‘红肉脐橙’(Citrus sinensis Osbeckcv.Cara Cara)八氢番茄红素合成酶(phytoenesynthase,PSY)基因,并进行原核表达。【方法】以‘红肉脐橙’果实中分离的mRNA为模板,通过RT-PCR扩增到PSY cDNA片段,并分析其序列;利用PCR技术获得‘红肉脐橙’PSY cDNA的编码区全长,并将其克隆到原核表达载体pET28a(+),获得重组质粒pET-CitPSY转化大肠杆菌BL21(DE3)并诱导表达。【结果】‘红肉脐橙’PSY cDNA长1520bp,最大开放读码框为1308bp,可编码436个氨基酸,核酸序列及其推导的氨基酸序列与已知其它植物PSY核酸、氨基酸序列之间的相似性分别在75%和70%以上,并且发现‘红肉脐橙’PSY的N末端存在转运肽信号序列,成熟的PSY包含1个跨膜结构域。原核表达获得了具有较高表达水平的融合蛋白6×His-PSY,Western-blot试验证实表达的融合蛋白能与抗6×His的单抗发生特异性反应,分子量约为52kD。【结论】该研究为进一步开展柑橘果实色泽分子改良奠定了基础。
- 张建成陶能国仝铸邓秀新
- 关键词：红肉脐橙八氢番茄红素合成酶原核表达
- 红肉脐橙番茄红素β-环化酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的功能表达被引量：5
- 2008年
- 以‘红肉脐橙’(Citrussinensis Osbeck ‘Cara Cara’)果实中分离的mRNA为模板,经RT-PCR扩增到约1.6kb的番茄红素β-环化酶(lycopene β-cyclase,Lcyb)cDNA片段。序列分析表明,该cDNA长1654bp,包含两个转录本Lcyb1和Lcyb2,最大开放读码框均为1512bp,可编码504个氨基酸。通过PCR方法获得红肉脐橙Lcyb1和Lcyb2cDNA编码区全长,构建了Lcyb1和Lcyb2的原核表达载体pET-CitL-cyb1和pET-CitLcyb2,并通过颜色互补试验证实表达的融合蛋白6×His-Lcyb1和6×His-Lcyb2均可将番茄红素转化为β-胡萝卜素。
- 张建成陶能国周文静徐娟潘志勇邓秀新
- 关键词：柑橘番茄红素Β-环化酶基因克隆
