北京市自然科学基金(7092097)
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 醛糖还原酶抑制剂细胞筛选模型的建立被引量：1
- 2009年
- 目的:将糖尿病慢性并发症相关基因醛糖还原酶(aldose reductase,AR)基因与腺相关病毒(adeno associated virus,AAV)表达载体pSNAV2.0重组,使其在HEK293细胞中表达,以基因工程表达的AR为靶向,建立醛糖还原酶抑制剂(aldose reductase inhibitor,ARI)细胞筛选模型。方法:首先采用酶切、连接等方法构建含有人AR基因序列的AAV表达载体pSNAV-hAR,将重组质粒转染HEK293细胞,通过活性测定、Western blot和免疫荧光检测目的基因转染及表达的情况。结果:PCR、酶切、DNA测序均证实表达质粒pSNAV-hAR构建正确。转染HEK293细胞后,一系列分析结果显示,腺相关病毒表达载体介导的AR真核细胞表达产物是具有功能活性的目的蛋白。应用经典醛糖还原酶抑制剂Sobinil和Zopolrestat对此模型进行了验证。结论:AR高表达细胞模型的建立,为进一步筛选ARI、探讨多元醇通路学说在糖尿病慢性并发症发病机制中的作用奠定了基础。
- 刘静刘建伟杜明梅杨立娜叶玲
- 关键词：醛糖还原酶腺相关病毒细胞模型
- 优化的多重扩增阻滞突变系统-PCR对载脂蛋白E基因的简易分型
- 2011年
- 目的通过改进和优化多重扩增阻滞突变系统-PCR(multi-ARMS-PCR)条件,建立载脂蛋白E(ApoE)基因的简易分型方法。方法基于multi-ARMS-PCR的原理和特点,针对文献报道方法中存在的缺陷和错误,重新设计或改进引物。以外周血白细胞基因组DNA为模板,应用4个等位基因特异性寡核酸上游引物、1个通用下游引物和一对内参引物,分A,B两个管同步进行多重PCR反应。PCR扩增产物经过琼脂糖凝胶电泳分离-EB染色,根据电泳带型的差异,实现对ApoE 6种基因型的判定。结果新引物显著提高了扩增效率和反应特异性,排除了非特异条带的干扰,减少了ApoE基因分型的错判。结论采用优化后的multi-ARMS-PCR方法对ApoE基因型进行鉴定,具有操作简便、时间短、效率高、成本低的优点,值得推广。
- 刘静刘建伟叶玲
- 关键词：载脂蛋白E基因分型
- 载脂蛋白E基因多态性与老年外周动脉硬化闭塞病的相关性
- 2010年
- 目的探讨北京万寿路社区老年人群载脂蛋白E(apoE)基因多态性与老年外周动脉硬化闭塞病(peripheralarterial occlusive disease,PAOD)的相关性。方法用多重四引物扩增受阻突变体系PCR技术,检测了153例老年PAOD患者(PAOD组)及246例健康老年人(NC组)的apoE基因多态性。结果 apoE等位基因呈多态性。apoE6种基因型频率(ε4/4,ε4/3,ε4/2,ε3/3,ε3/2,ε2/2)及3种等位基因频率(ε4,ε3,ε2)的分布在老年PAOD组与NC组间无显著差异(P>0.05)。结论 apoE基因多态性不是老年PAOD的独立危险因素。
- 刘建伟刘静李小鹰叶玲
- 关键词：载脂蛋白E类动脉闭塞性疾病外周血管疾病聚合酶链反应
