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国家高技术研究发展计划(2013AA020107): 作品数：11 被引量：25H指数：3; 相关作者：岳文裴雪涛范增陈琳谢小燕更多>>; 相关机构：军事医学科学院广西医科大学华南生物医药研究院更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

SIRT1对肝癌细胞耐药敏感性的影响被引量：1: 2017年; 目的构建沉默信息调节因子(silent information regulaor,Sir)样蛋白1(Sirtuin 1,SIRT1)的特异性短发夹RNA(shRNA)慢病毒载体,获得敲低SIRT1的肝癌细胞系,以探讨其对肝癌细胞的增殖和耐药敏感性的作用。方法设计针对SIRT1靶点特异性的干涉序列,连接到经HpaⅠ和XhoⅠ双酶切的pSicoR-GFP载体,慢病毒包装293T产生病毒,感染肝癌细胞,建立肝癌细胞SIRT1低表达的稳定株。利用实时定量PCR检测SIRT1的干涉效果;通过平板克隆形成实验、CCK8细胞增殖实验检测SIRT1被干涉后对肝癌细胞增殖能力的影响;通过细胞耐药敏感性实验及实时定量PCR检测耐药基因的表达,考察SIRT1干涉对肝癌细胞耐药敏感性的影响。结果实时定量PCR实验证明该慢病毒干涉载体能显著抑制肝癌细胞中SIRT1的表达,SIRT1干涉可抑制肝癌细胞的增殖能力,下调耐药基因的表达,增强肝癌细胞的药物敏感性。结论 SIRT1抑制肝癌细胞耐药性。; 纪光红阎新龙王海洋张彪曾泉周军年范增黄映辉岳文裴雪涛; 关键词：RNA干扰基因敲除肝癌耐药

泊洛沙姆188对体外三维培养脐血单个核细胞向巨核细胞分化的影响被引量：1: 2018年; 目的观察泊洛沙姆188（P188）对体外三维（3D）培养诱导脐血单个核细胞向巨核细胞分化的影响。方法将分离的脐血单个核细胞分别接种于细胞瓶和细胞培养袋中，后者采用WIGGENS摇床模拟生物反应器进行3D培养。在巨核细胞诱导培养基中加入P188体外培养14d，观察细胞形态、计数细胞数并计算细胞存活率，采用流式细胞术观察巨核细胞表面标志表达情况。结果与采用传统的细胞培养瓶二维（2D）培养诱导巨核细胞相比，2D＋P188培养组巨核系CD41＋、CD41＋／CD61＋、CD61＋细胞数明显增加（P值均〈0．01）；在3D培养中加入P188，细胞体积变大，核形状不规则，胞质含紫红色颗粒，细胞分化更接近成熟。2D培养、3D培养及3D＋P188培养组组间巨核细胞表面标志CD41、CD41／CD61、CD61表达水平差异有统计学意义（P值均〈0．01）。LSD—t检验两两比较显示，与2D培养相比，3D培养诱导巨核细胞存活率及细胞数均降低（P值分别为0．018、0．027），3D＋P188培养组细胞数、细胞存活率与2D和3D培养组比较差异均无统计学意义（P值均〉0．05）。而3D培养组巨核细胞CD41／CD61表达水平为（36．30±1．27）％，高于2D培养组的（23．95±1．34）％（P=0．002），3D＋P188培养组CD41／CD61表达水平更高[（59．45±1．20）％]。结论3D培养有利于巨核系祖细胞诱导分化，但细胞存活率低，加入P188，细胞生存状态好，且诱导效率更高。; 陈琳岳文谢小燕张秀媛吕洋刘大庆习佳飞曲洺逸范增房芳裴雪涛; 关键词：巨核细胞泊洛沙姆诱导分化

小分子化合物Me6TREN促进小鼠骨髓中造血干/祖细胞的增殖被引量：1: 2015年; 目的:探讨小分子化合物Me6TREN对小鼠骨髓中造血干/祖细胞的增殖作用。方法:采用细胞计数、细胞集落形成能力检测、流式细胞术检测细胞表面标志等实验技术,观察Me6TREN对小鼠骨髓细胞的影响。结果:皮下注射Me6TREN 12 h后,Me6TREN组的集落形成能力、造血干/祖细胞表面标志lin-Sca-1+c-Kit+的比例均明显高于对照组;在体外分离培养的小鼠骨髓单个核细胞,4 d后Me6TREN组细胞的集落形成能力及造血干/祖细胞的增殖能力均高于对照组。结论:Me6TREN对小鼠骨髓造血干/祖细胞有一定的促增殖作用。; 杨舒张静张静王思涵范增王静雪韩毅田宇何丽娟陈琳岳文李艳华; 关键词：扩增

骨髓间充质干细胞对冈田酸致神经细胞损伤的修复作用被引量：7: 2017年; 目的观察人骨髓间充质干细胞对冈田酸(OA)损伤的神经细胞是否具有修复作用。方法应用冈田酸损伤神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞,建立阿尔茨海默病体外模型。将细胞分成正常组、损伤组和治疗组,损伤组用20nmol/L冈田酸损伤24h,治疗组在损伤24h后加入骨髓间充质干细胞的条件培养基治疗24h。采用CCK-8法检测各组细胞活力,免疫荧光染色微管微丝测定细胞树突长度和荧光面积,Western blotting检测磷酸化Tau蛋白和总Tau蛋白含量。结果冈田酸能损伤SH-SY5Y细胞,使其胞体皱缩、塌陷,出现空泡,树突缩短、断裂,微管微丝排列紊乱,而骨髓间充质干细胞条件培养基可使SH-SY5Y细胞胞体变得圆润,树突重新恢复变长,微管、微丝致密规则,荧光变强;并且能有效降低冈田酸诱导的Tau蛋白过度磷酸化水平。结论骨髓间充质干细胞对冈田酸损伤的神经细胞具有明显的修复作用。; 刘嘉婧曹宁翟晶磊廖土玲岳文贾雅丽裴雪涛; 关键词：骨髓间充质干细胞冈田酸 TAU蛋白质类阿尔茨海默病

脐血单个核细胞体外诱导分化为粒系细胞的研究被引量：1: 2017年; 目的探索脐血来源单个核细胞体外诱导分化为粒系细胞的方法。方法采用羟乙基淀粉沉降红细胞，淋巴细胞分离液分离单个核细胞。选择不同的培养基、添加剂以及培养模式诱导粒系细胞分化，显微镜观察细胞形态，流式细胞术检测细胞表型，免疫荧光测定粒系细胞CD18表达，并检测细胞吞噬功能。结果采用X-VIVOTM15中添加细胞因子TPO、SCF、G-CSF诱导粒系细胞，细胞存活率、细胞数、粒系细胞分化效率均优于添加胎牛血清组。与SCGM培养基诱导粒系细胞相比，X-VIVOTM15培养基效果更佳，且成本低。采用造血干细胞扩增和在基础培养基X-VIVOTM15中添加细胞因子TPO、SCF、G-CSF诱导粒系细胞的两阶段扩增、诱导模式，21 d细胞扩增倍数近132倍；流式细胞术检测表明，粒系细胞分化效率滞后于直接诱导模式，粒系标志CD15表达分别为（69.60±1.06）%和（97.73±0.39）%；瑞氏-吉姆萨染色可见成熟的分叶核粒细胞；免疫荧光方法检测显示溶酶体蛋白CD18的表达；成熟的粒细胞具有较强吞噬墨汁的功能，吞噬效率为（51.43±0.05）%。且在细胞趋化因子IL-8作用下，粒细胞具有趋化作用。结论优化了诱导粒系细胞培养体系和培养模式，获得了具有一定功能的粒系细胞。; 陈琳谢小燕聂纪芹陈东丽黄安平房芳曲沼逸南雪何丽娟范增岳文裴雪涛; 关键词：胎血单个核细胞

人脐带间充质干细胞通过分泌IL-6介导冈田酸对SH-SY5Y细胞毒性的保护作用被引量：3: 2016年; 阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一种国际公认的难治性神经退行性疾病,是引起痴呆的最常见的病因.其主要的病理学变化是由Aβ过度沉积引起的老年斑(SP),以及Tau蛋白过度磷酸化引起的神经纤维缠结(NFTs).从人脐带华通胶中分离出的间充质干细胞(hUC-MSCs)由于其强大的旁分泌作用,已经被证实对神经系统疾病有治疗效果,其中包括AD,这种治疗机制尚不明确.本研究用冈田酸对SH-SY5Y细胞系进行损伤,建立AD体外模型,然后用种有hUC-MSCs的transwell小室或其条件培养基对模型进行治疗,并发现其分泌的IL-6可能是介导这种修复作用的关键因子.; 翟晶磊曹宁岳文贾雅丽裴雪涛; 关键词：TAU蛋白过度磷酸化 IL-6

From stem cells to red blood cells:how far away from the clinical application?被引量：5: 2014年; The generation of red blood cells(RBCs)from stem cells provides a solution for deficiencies in blood transfusion.Currently,primary hematopoietic stem cells,embryonic stem cells and induced pluripotent stem cells have shown the potential to produce fully mature RBCs.Here,we discuss the advantages,induction protocols,progress and possible clinical applications of stem cells in RBC production.; XIE XiaoYanLI YanHuaPEI XueTao; 关键词：造血干细胞胚胎干细胞红血细胞多能性

林蛙皮胶原蛋白的提取及其生物学特征分析被引量：1: 2015年; 目的：建立林蛙皮胶原蛋白低温提取及纯化方法,保证胶原蛋白的活性,并对其生物学特性进行初步探讨。方法：采用低温酸酶提取结合的方法提取林蛙皮中的胶原蛋白,并对提取过程中过氧化氢的加入量进行考察;对纯化的胶原蛋白进行含量、相对分子质量分布等定性及定量检测,同时观察其对间充质干细胞增殖情况的影响。结果：在4℃经脱色脱脂处理（过氧化氢浓度为0.025%）后,用0.5 mol/L的醋酸提取48 h,沉淀再分别用0.67%、1.34%、2%的胃蛋白酶提取,在此工艺条件下,酸溶性胶原蛋白（ASC）的提取率为8.77%±0.44%,纯度为75.83%±3.78%;酶溶性胶原蛋白（PSC）的提取率为30.69%±0.83%,纯度为66.39%±1.79%。紫外扫描图谱表明提取物具有胶原蛋白的特征吸收。SDS-PAGE分析表明所得ASC与PSC均由2条α1链与1条α2链组成,为保持了三股螺旋结构特征的Ⅰ型胶原蛋白。对细胞生长影响的实验表明,ASC与PSC在0.05~20 mg/m L浓度范围对间充质干细胞的生长无抑制作用,并且在某些浓度下具有促进干细胞增殖的作用。结论：低温酸酶法可高效提取林蛙皮粉中的胶原蛋白,提取的胶原蛋白具有良好的生物学活性,本方法及提取的胶原蛋白在组织工程等领域具有良好的应用前景。; 南雪单紫筠张迦南贾茜媛龙冬莹岳文裴雪涛; 关键词：胶原蛋白生物学特性

微小RNA-223-3p通过调节MYH10基因促进巨核细胞多倍体化被引量：1: 2017年; 目的探讨微小RNA-223-3p(miR-223-3p)对巨核细胞分化和成熟的影响,并初步探索其中可能的机制。方法通过实时定量PCR检测巨核细胞分化过程中miR-223-3p的内源性表达变化趋势,而后外源调节miR-223-3p在细胞系中的表达量,并通过流式细胞术检测其对于巨核细胞分化和成熟的影响,运用生物信息学分析,找到其发挥相关生物学作用的靶基因MYH10,并通过实时定量PCR、荧光素酶、流式细胞术验证MYH10是miR-223-3p的靶基因。结果内源性miR-223-3p随着巨核细胞的分化成熟表达量增加,在K562和Meg-01细胞系中转染miR-223-3p mimics后可升高巨核细胞相关表面标志CD41和CD61的阳性率,同时显著促进多倍体的形成,MYH10的基因表达随miR-223-3p表达升高而下降,通过双荧光素酶报告基因技术验证MYH10基因是miR-223-3p的靶基因,进一步抑制MYH10基因表达后,可促进巨核细胞多倍体化。结论 miR-223-3p可通过调控MYH10的表达调节巨核细胞的成熟。; 邹晓静曲洺逸房芳房芳陈琳范增谢小燕陈琳; 关键词：巨核细胞聚合酶链反应流式细胞术

脐血单个核细胞来源红系祖细胞的诱导扩增及保存的研究被引量：2: 2016年; 目的探索含多种细胞因子无血清培养基诱导脐血单个核细胞体外分化为红系祖细胞效率及红系祖细胞的保存方法。方法利用羟乙基淀粉沉降脐血中红细胞，人淋巴细胞分离液（Ficoll）分离单个核细胞，采用含FMS样酪氨酸激酶3配体、干细胞生长因子、胰岛素样生长因子1、重组人红细胞生成素的无血清培养基进行体外诱导脐血单个核细胞向红系祖细胞分化，并将诱导的红系祖细胞用不同的冻存液进行冷冻保存，观察红系祖细胞诱导、分化能力和红系祖细胞冷冻保存效果。结果随着诱导时间延长，细胞总数明显增多，培养14d红系祖细胞扩增约110倍，存活率为（88．92±0．95）％，红系祖细胞特异性标志CD71＋细胞占（86．77±9．11）％，CD71／CD235a细胞占（64．47±16．67）％。诱导10d多为中幼红细胞，可见血红蛋白表达的阳性细胞；诱导14d开始出现晚幼红细胞，细胞沉淀呈红色。诱导7d红系集落数为326．00±97．96，高于诱导前（61．60±20．03）。10％二甲基亚砜（DMSO）＋2％人血清白蛋白保存细胞复苏后红系祖细胞存活率、回收率分别为（90．32±1．80）％、（93．66±1．87）％，将50％自体脐血浆与10％DMSO、2％人血清白蛋白联用可获得更好的保护效果。结论该无血清培养基可高效诱导、扩增红系祖细胞，10％DMSO＋2％人血清白蛋白＋50％自体脐血血浆可很好保存红系祖细胞。; 陈琳谢小燕习佳飞吕洋田宇刘大庆岳文李艳华南雪李思婷范增裴雪涛; 关键词：胎血红系祖细胞冷冻保存单个核细胞

国家高技术研究发展计划(2013AA020107)

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