博士科研启动基金(S2011040004639)
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- 采用慢病毒载体干扰ALDH-1表达的宫颈癌Hela细胞稳转株的构建及意义
- 2013年
- 目的:采用干扰乙醛脱氢酶1(ALDH-1)表达的慢病毒载体转染宫颈癌Hela细胞,构建干扰ALDH-1表达的稳转株,以利进一步探讨干扰ALDH-1表达的宫颈癌Hela细胞株的生物学特性。方法:体外培养宫颈癌Hela细胞,加入梯度浓度的嘌呤霉素溶液进行筛选,确定最佳筛选浓度;取24孔板中对数生长的宫颈癌Hela细胞,吸弃旧培养液,加入400μL新培养基,分别加入4种干扰慢病毒液(ALDH-1、ALDH1-1719、ALDH1-740、ALDH1-921,其中有一种具最佳干扰效果)及1种阴性对照慢病毒液(LV3-NC),同时均加入Polybrene液。其中5种慢病毒液的加入量均为50μL(滴度均为1×108TU/mL),Polybrene的加入量为0.5μL(浓度为5 mg/L);24 h后换新鲜培养液,72 h后荧光显微镜下观察荧光表达情况。然后采用最佳筛选浓度的嘌呤霉素溶液进行筛选,以获得稳定转染的干扰ALDH-1表达的宫颈癌Hela细胞株。结果:确定嘌呤霉素的最佳筛选浓度为0.9 mg/L;5种慢病毒载体均成功转染入宫颈癌Hela细胞中,经嘌呤霉素筛选2周后成功获得稳定转染细胞株。结论:干扰ALDH-1表达的宫颈癌Hela细胞稳转株成功构建。
- 刘龙阳张帝开易娟娟陈勍张丙忠陈志辽梁金晓林仲秋
- 关键词：氧化还原酶类乙醛慢病毒属HELA细胞
