国家自然科学基金(30471823)
- 作品数：7 被引量：25H指数：4
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- 相关机构：复旦大学复旦大学上海医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 转化生长因子β_2在小鼠心脏近端流出道隔心肌化过程中的作用被引量：6
- 2006年
- 目的利用Cx43基因剔除（KO）小鼠模型,观察TGFβ2在心脏流出道隔的表达,探讨Cx43基因剔除小鼠心脏流出道隔心肌化异常与TGFβ2的关系;采用胚心脏体外培养技术,研究外源性TGFβ2是否促进流出道隔心肌化过程.方法选用胚E12.5～E15.5 d的Cx43基因剔除纯合型（Cx43-/-）、杂合型（Cx43＋/-）及野生型（Cx43＋/＋）C57/BL6小鼠作为研究对象,采用PCR方法鉴定基因型,免疫组织化学法测定TGFβ2;选用野生型E12.5进行胚心脏体外培养至E15.5,同时加用TGβ2不同剂量干预处理,免疫组织化学法测定肌节肌动蛋白α-SCA的表达.结果 Cx43 KO小鼠胚期心脏近端流出道隔心肌细胞明显减少,尤其以E13.5和E14.5的Cx43-/-小鼠为著.与Cx43＋/＋小鼠对照,Cx43-/-小鼠心脏近端流出道隔TGFβ2的表达明显降低,以E14.5较为显著;E14.5的Cx43＋/-小鼠表达也有降低.然而TGFβ2不同剂量干预组均没有见到明显的促进离体心脏心肌化的作用.结论 Cx43 KO小鼠心脏近端流出道隔存在明显的心肌化延迟.TGFβ2表达减少可能参与了Cx43-/-小鼠心肌化异常的发病机制.体外应用TGFβ2可能难以模拟在体的时空表达模式,或者心肌化的进行需要精确的TGFβ2的剂量和严格的培养条件.
- 赵晓晴黄国英谢利剑彭涛周国民
- 关键词：转化生长因子Β2间隙连接蛋白基因剔除
- Cx43基因对近端流出道隔心肌化过程的调控机制被引量：6
- 2006年
- 目的:探讨connexin43(Cx43)基因在小鼠近端流出道隔心肌化的作用及其机制。方法:选用胚胎(ED)11.5 d至出生后1 d的Cx43基因剔除(KO)纯合型(Cx43-/-)、杂合型(Cx43+/-)及野生型(Cx43+/+)C57/BL6小鼠作为研究对象;采用PCR方法鉴定基因型;HE染色观察心脏结构,免疫组化法测定横纹肌肌动蛋白α-SCA、凋亡相关分子active caspase-3及神经嵴细胞的标志物AP-2的表达。结果:①Cx43-/-小鼠大多出生后24 h内即死亡。大体解剖见明显的右室流出道圆锥部异常膨隆,右心房扩张;组织切片HE染色示右室流出道壁大量异常小梁状组织增生突起,形成多个囊状结构,右室流出道腔明显狭窄,右室腔扩张。Cx43+/-和Cx43+/+心脏无明显异常。②Cx43-/-小鼠近端流出道隔中央区域α-SCA的表达明显滞后。③Active caspase-3组化显示Cx43+/+凋亡细胞主要出现在近端流出道隔,ED12.5至ED15.5均可见到;Cx43+/-凋亡减少,Cx43-/-则仅见很少凋亡细胞。④Cx43-/-流出道AP-2的表达增多,且表达位置异常。结论:Cx43 KO小鼠以右室流出道异常增生引起的梗阻性畸形为主要特征,该病变过程可能与胚胎期近端流出道隔心肌化迟滞有关,其近端流出道隔细胞凋亡减少和神经嵴细胞表达异常很可能参与了流出道心肌化异常的形成,表明Cx43在近端流出道隔心肌化过程中具有重要作用。
- 赵晓晴黄国英谢利剑彭涛陈萍周国民
- 关键词：基因CX43基因敲除神经嵴
- Cx43基因剔除小鼠心脏锥干部的异常发育被引量：19
- 2005年
- 目的探讨Cx43基因缺陷小鼠心脏锥干部发育异常。方法选用胚胎(embryon icday,E)11.5 d至出生后1 d C57/BL6小鼠作为研究对象,根据基因型分为Cx43基因剔除纯合子(Cx43-/-)、杂合子(Cx43+/-)及野生型(Cx43+/+),采用聚合酶链反应方法鉴定基因型。免疫组化法测定横纹肌肌动蛋白α-SCA、平滑肌肌动蛋白α-SMA、神经嵴细胞的标志物AP-2α的表达;原位杂交方法检测AP-2αmRNA的表达。结果Cx43-/-出生后24 h内即死亡。大体解剖见明显的右室流出道圆锥部异常膨隆。HE染色示右心室流出道壁大量异常小梁状组织增生突起,右室流出道腔明显狭窄。Cx43+/-无明显异常。Cx43-/-近端流出道隔中央区域α-SCA的表达明显滞后。Cx43+/-与Cx43-/-小鼠右室流出道与Cx43+/+比较可见比较强的α-SMA的表达,主要位于右侧锥干部的异常增生部位。Cx43-/-小鼠在E13.5流出道隔AP-2α蛋白及其mRNA水平表达均增多,且表达位置异常。结论Cx43 KO小鼠以右室流出道异常增生引起的梗阻性畸形为主要特征。Cx43 KO小鼠胚胎期近端流出道隔心肌化迟滞。Cx43 KO小鼠锥干部α-SMA的表达不能正常消退,心肌细胞发育不成熟。神经嵴细胞的发育异常可能参与了Cx43基因缺陷小鼠锥干部畸形的发病机制。
- 赵晓晴黄国英谢利剑彭涛周国民
- 关键词：室性流出道阻塞连接蛋白43基因剔除小鼠异常发育干部
- 小鼠心脏神经嵴细胞的体外培养及其生物学特性被引量：1
- 2006年
- 目的体外培养和鉴定心脏神经嵴细胞,探讨其生物学特性。方法取8·5d小鼠胚胎枕中部至第3体节神经管,组织块法无血清条件培养获心脏神经嵴细胞,采用转录激活因子2α(AP-2α)作为其生物学标记物,观察其迁移、分化等生物学特性。结果从胎鼠神经管中分离培养的细胞AP-2α表达阳性,具有迁移特性,传代后以含血清培养基培养后能自然分化成神经元和神经胶质细胞。结论体外培养可成功获得心脏神经嵴细胞,且具有迁移特性和多向潜能分化能力。
- 彭涛黄国英赵晓晴谢利剑齐春华周国民
- 关键词：心脏神经嵴生物学细胞分化
- 连接蛋白43基因敲除小鼠胚胎心脏流出道组织中转录因子的表达及意义被引量：5
- 2007年
- 目的研究连接蛋白43(Cx43)基因敲除小鼠胚胎心脏近端流出道组织中转录因子的改变,从分子水平探讨 Cx43基因敲除小鼠胚胎心脏近端流出道发育异常的原因。方法以胎龄13.5 d 和14.5 d 的 Cx43基因敲除、Cx43杂合子和 Cx43野生型鼠胚心脏近端流出道部分为研究对象。分别提取总 RNA,反转录成 cDNA;并在体外转录为 cRNA,同时进行生物素标记及片段化;再与Affymetrix 430 2.0小鼠全基因组芯片进行杂交。杂交信号经扫描后,应用相关生物信息软件分析基因表达情况。用实时定量逆转录(RT)PCR 的方法对基因芯片筛选出的与心脏发育相关的部分转录因子进行验证。结果与 Cx43野生型组相比,Cx43基因敲除组表达差异的基因中,有6个是与心脏发育相关的转录因子。实时定量 RT-PCR 验证了其中3个基因:Sox11、Foxp1和 Tbx20。在胎龄13.5 d,Cx43基因敲除鼠胚 Sox11、Foxp1的表达量均明显低于 Cx43野生型组(4.76±0.19 vs 5.34±0.25,5.08±0.28 vs 5.64±0.15,均 P<0.01);Tbx20在各组间差异不明显。胎龄14.5 d,各基因Sox11、Foxp1以及 Tbx20的表达量在基因敲除组均明显低于 Cx43野生型组(4.71±0.27 vs 5.00±0.19,5.25±0.31 vs 5.77±0.16,7.05±0.17 vs 7.43±0.25,均 P<0.05)。其变化趋势与基因芯片结果基本一致。结论心脏特异性的转录因子 Foxp1、Sox11和Tbx20等的表达异常可能与 Cx43基因敲除小鼠流出道的异常发育有关。
- 齐春华黄国英周国民
- 关键词：心脏缺损室性流出道阻塞连接蛋白43转录因子
- Cx43基因敲除鼠胚心脏近端流出道组织中Galpha13信号通路基因的差异表达被引量：1
- 2007年
- 目的研究Cx43基因剔除(Cx43KO)小鼠胚胎心脏近端流出道组织中基因表达谱的改变,筛选可能导致Cx43KO小鼠流出道梗阻的相关基因。方法以胎龄(embryonic day,ED)14.5天的Cx43KO和野生型(Cx43WT)鼠胚心脏近端流出道部分为研究对象,分别提取总RNA,逆转录成cDNA;并在体外转录为cRNA,同时进行生物素标记及片段化;再与Affymetrix-4302.0基因芯片进行杂交。杂交信号经扫描后,应用相关生物信息软件分析基因表达情况。结果与Cx43WT组相比,Cx43KO组中表达上调2倍以上的基因共有287个,表达下调2倍以上的基因有199个。其中表达差异的基因参与转录调控、细胞周期等主要生理过程。进一步筛查表达差异1.5倍以上的基因发现,Galpha13信号通路上的多个基因在Cx43KO组有明显变化。结论利用基因芯片技术初步筛选出与Cx43KO鼠胚心脏近端流出道发育有关的多个基因,其中Galpha13信号通路上的相关基因可能与Cx43KO小鼠流出道梗阻的发生有关。
- 齐春华黄国英赵晓晴周国民
- 关键词：心脏发育CX43基因芯片
- 心脏近端流出道隔心肌化调控机制研究进展
- 2007年
- 心脏锥干部畸形是造成儿童先天性心脏病死亡的一个主要原因。近年来发现“心肌化”过程是心脏近端流出道隔发育中的一个重要事件。对“第二生心区”的深入探讨以及对调控心肌化的分子机制的研究正在成为研究热点。了解这些机制在心肌化过程中的作用将有助于更深入了解心脏流出道发育的调控过程及对心脏锥干部畸形进行的预防和治疗。
- 齐春华黄国英
- 关键词：心肌
