国家自然科学基金(30471837)
- 作品数：10 被引量：49H指数：4
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- 干扰组蛋白乙酰化引发间充质干细胞心肌定向分化特定蛋白的异常表达被引量：14
- 2008年
- 目的利用组蛋白乙酰化修饰关键因子Gcn5 shRNA重组质粒转染经5-氮杂胞苷(5-azacytidine,5-aza)诱导后的间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)并检测心肌早期发育相关结构和功能蛋白表达情况,探讨组蛋白乙酰化修饰在MSCs定向分化过程中的调控作用。方法①以组蛋白乙酰化修饰关键因子Gcn5为靶点,用带绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)基凶的pGenSil-1作为载体,构建Gcn5shRNA质粒。②MSCs体外扩增,5-aza诱导后,不同的时间点用脂质体包载Gcn5 shRNA共转染大鼠MSCs,24h后相差显微镜下观察细胞生长状况,电镜下观察染色质的形态变化,采用Western blot法分别检测Gcn5、心肌结构重链蛋白(myosin heavy chain,MHC)和连接蛋白(Connexin 43,Cx43)的表达状况。结果电镜示经通用阴性质粒HK转染的MSCs细胞,形态与正常MSCs无明显差别,染色质仍以边集状态为主;经干扰质粒转染的MSCs细胞在形态上与正常MSCs细胞无明显差别,但其染色质出现明显的浓缩紧密现象。以β-artin为内参,比较干扰组和阴性对照组Gcn5、Cx43、MHC蛋白,计算出沉默效率分别为86%、58%和67%。结论转染Gcn5shRNA质粒可干扰组蛋白乙酰化平衡,进而影响MSCs体外分化中心肌发育特定蛋白的表达。
- 朱静冯川李莉邓兵田杰张晓萍
- 关键词：乙酰化修饰RNA干扰间充质干细胞分化
- Gcn5基因shRNA的载体构建及其对干细胞分化中组蛋白乙酰化修饰的干扰作用被引量：7
- 2006年
- 目的构建组蛋白乙酰化酶转录辅激活酶Gcn5基因表达的干扰shRNA质粒并初步检测其性质,为研究干细胞诱导分化过程中乙酰化修饰所起的调控作用奠定基础。方法选择7条组蛋白乙酰化修饰关键因子Gcn5基因片段,用带有绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)基因的pGenesil-1作为载体,构建相应7个shRNA质粒。脂质体共转染5-氮杂胞苷(5-azacytidine,5-aza)诱导的大鼠间充质干细胞(mesenchymal stemcells,MSCs),利用乙酰化酶特异性抗体Gcn5(H75)对转染细胞进行免疫化学检测,荧光显微镜图象分析系统,记数细胞,在同视野中记数转染阳性细胞以及干扰的阳性细胞,初步计算出其转染率和干扰效率。结果通过限制性内切酶酶切和DNA序列分析,重组质粒shRNA与设计相吻合;免疫细胞化学检测,发现转染阴性对照HK的细胞显现“饱满核”,乙酰化作用蛋白表达明显;转染shRNA质粒的细胞呈现十分明显表达减弱的“淡染核”或不表达的“空洞核”,转染率和干扰效率分别为93.7%和46.6%。结论构建的shRNA质粒能够达到干扰乙酰化作用的目的,为深入研究乙酰化作用奠定了一定的试验基础。
- 朱静王应雄张晓萍王金菊张小飞田杰
- 关键词：乙酰化修饰RNA干扰质粒间充质干细胞
- GCN5特异性质粒筛选及其对MSCs分化的影响
- 2008年
- 目的筛选有效质粒片段,探讨组蛋白乙酰化平衡对MSCs分化的影响。方法提取针对GCN5基因的3条shRNA(ZJ1、ZJ2、ZJ3)重组质粒及阴性对照质粒HK,分别转染入经5-aza诱导的MSCs,24h后荧光显微镜观察细胞、流式细胞仪检测转染效率、Western-blot分析GCN5蛋白表达,ELISA检测组蛋白乙酰化酶活性。结果质粒转染效率大于20%;ZJ3转染组组蛋白乙酰化酶活性及GCN5蛋白表达量均有明显降低,抑制效率分别为[(49.0±0.6)%,(35.7±0.1)%,P<0.05];组蛋白乙酰化水平与MSCs分化进程密切相关,质粒ZJ3可有效抑制不同分化阶段MSCs中乙酰化酶水平,抑制效率分别为[(27.0±0.1)%,(26.7±0.1)%,(25.4±0.1)%,P<0.05]。结论成功筛选出有效质粒片段ZJ3,初步确证GCN5抑制状态可导致组蛋白乙酰化失衡,从而调控MSCs的分化进程,为后期MSCs移植的临床应用奠定实验基础。
- 李莉朱静冯川田杰
- 关键词：RNA干扰质粒组蛋白乙酰化酶
- 组蛋白乙酰化酶和去乙酰化酶在细胞周期中的调控作用被引量：1
- 2008年
- 随着组蛋白乙酰化酶和去乙酰化酶的克隆,人们开始重视组蛋白乙酰化平衡在细胞周期中的调控作用。细胞周期进程中的两个控制点容易受到众多因素的干扰,导致细胞增生、静止或死亡。现介绍组蛋白乙酰化酶和去乙酰化酶的研究进展及其在细胞周期进程中的调控作用,为临床上以肿瘤为代表的多种疾病的诊断和治疗提供一些指导作用。
- 李莉田杰
- 关键词：组蛋白脱乙酰基酶类细胞周期
- RNA干扰enolase-1基因治疗胃癌的实验研究被引量：3
- 2008年
- 目的:探讨RNA干扰enolase-1基因对人胃癌的治疗作用。方法:根据enolase-1mRNA序列构建表达enolase-1特异的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)真核表达质粒pMSCVU6/ENO-1si1,pMSCVU6/ENO-1si2,pMSCVU6/ENO-1si3。种植人胃癌SGC-7901细胞于裸鼠皮下建立裸鼠肿瘤模型。将构建成功的三种siRNA质粒分别转染SGC-7901细胞株,pMSCVU6/ENO-1si2和pMSCVU6/ENO-1si3转染裸鼠瘤体内。MTT法检测SGC-7901细胞增殖状况;测量荷瘤裸鼠的肿瘤体积,计算抑瘤率;RT-PCR检测SGC-7901细胞enolase-1mRNA表达;分别以免疫组化SP法和Western blot检测体内外enolase-1蛋白表达。结果:SGC-7901细胞株及裸鼠瘤体均被所采用的质粒成功转染。SGC-7901细胞受pMSCVU6/ENO-1si2转染后,其生长活性受到明显抑制(P<0.01),enolase-1mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.01)。体内抑瘤实验表明,pMSCVU6/ENO-1si2组平均瘤体积为(380±26)mm3,pMSCVU6/ENO-1si3组与空白对照组分别为(993±124)mm3和(1102±131)mm3;pMSCVU6/ENO-1si2组抑瘤率为65.52%,pMSCVU6/ENO-1si3组为9.89%;pMSCVU6/ENO-1si2组肿瘤体积明显小于pMSCVU6/ENO-1si3组和空白对照组,差异具有显著性(P<0.01);pMSCVU6/ENO-1si3组和空白对照组之间肿瘤体积无显著差异(P>0.05);pM-SCVU6/ENO-1si2组与pMSCVU6/ENO-1si3组和空白对照组相比,enolase-1蛋白表达减弱。结论:表达siRNA的enolase-1基因特异的真核表达质粒能成功转染体内、外胃癌细胞,其中pMSCVU6/ENO-1si2可有效抑制人胃癌细胞的生长。
- 刘靖鲍依稀刘明学祝绚李进
- 关键词：RNA干扰胃癌基因治疗
- 5-aza诱导干细胞经乙酰化特异RNAi后心肌细胞发育相关基因检测被引量：10
- 2006年
- 目的通过组蛋白乙酰化作用相关shRNA质粒转染5氮杂胞苷(5-azacytid ine,5-aza)诱导后不同时间段间充质干细胞心肌发育基因的检测,探讨乙酰化修饰在干细胞特化心肌样细胞转录调控中的作用。方法选择7条组蛋白乙酰化修饰关键因子Gcn5基因片段,用带有绿色荧光蛋白(green fluorescence prote in,GFP)基因的pGenesil-1作为载体,构建相应7个shRNA质粒。5-aza诱导大鼠间充质干细胞(m esenchym al stem cells,MSCs)24 h、2、4、7 d,分别用重组shRNA质粒脂质体共转染后提取RNA,逆转录PCR检测Gcn5基因和心肌早期发育基因GATA4的表达。结果经特异性限制性内切酶酶切分析和DNA序列测定,质粒构建与设计符合;各个时间段对照组Gcn5和GATA4均有表达,而实验组却无相应表达。结论通过实验提示封阻干细胞染色质组蛋白乙酰化可以达到抑制干细胞特化心肌细胞转录过程的作用,这为进一步研究组蛋白末端乙酰化修饰与干细胞分化调节机制奠定实验室基础。
- 朱静邓兵王金菊田杰王应雄
- 关键词：心肌细胞乙酰化修饰
- 云芝糖肽配合化疗对恶性肿瘤患者的评估被引量：2
- 2010年
- 目的:系统评价云芝糖肽配合化疗对恶性肿瘤患者生活质量、血液系统及免疫功能的影响。方法:计算机检索MEDLINE、Pubmed等数据库。按Cochrane评价标准严格评价文献,纳入高质量研究。结果:共纳入7个研究,701例患者。Meta分析结果示:云芝糖肽具有一定改善恶性肿瘤病人化疗后生活质量的作用。云芝糖肽联合化疗药物组在改善白细胞、血红蛋白、血小板方面与单纯使用化疗药物或鲨肝醇联合化疗药物组之间无明显差异。云芝糖肽联合化疗药物组可提高CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/CD8+比值,而NK细胞无明显差异。结论:云芝糖肽配合化疗治疗恶性肿瘤有一定的疗效。但鉴于本系统评价纳入的研究大多质量低下,有必要进行更多的质量高、设计严谨、多中心的随机对照试验。
- 赖思含尹黎李雯雯徐灿鲍依稀
- 关键词：云芝糖肽恶性肿瘤随机对照试验
- 5aza诱导干细胞经乙酰化特异RNAi后心肌细胞发育相关基因检测
- 目的:通过组蛋白乙酰化作用相关shRNA质粒转染5氮杂胞苷(5-azacytidine,5-aza)诱导后不同时间段间充质干细胞心肌发育基因的检测,探讨乙酰化修饰在干细胞特化心肌样细胞转录调控中的作用。
- 朱静邓兵王金菊田杰王应雄
- 文献传递
- 云芝糖肽、丹参酮ⅡA对荷瘤小鼠的抗肿瘤及免疫调节作用被引量：17
- 2008年
- 目的:研究云芝、丹参有效组分单体以及复方对EAC荷瘤小鼠的抗肿瘤和免疫调节作用,为肿瘤的中药治疗新方剂的临床广泛应用提供一定的实验基础。方法:建立EAC实体型荷瘤小鼠动物模型,随机分为6组:生理盐水对照组(NS)、阿霉素治疗组(ADM)、云芝糖肽组(PSP)、丹参酮Ⅱ组(TanⅡA)、复方组(PSP+TanⅡA)和综合治疗组(PSP+TanⅡA+ADM),并给予相应药物治疗,应用免疫组化法检测小鼠脾脏IL-2、IL-2R和肿瘤组织中周期蛋白CDK4以及凋亡蛋白Bax、Bcl-2表达,并计算抑瘤率、脏器指数,结果与对照组和化疗组进行比较。结果:云芝糖肽组小鼠脾脏IL-2、IL-2R水平高于NS组和化疗组(P<0.05),各药物治疗组肿瘤Bax均高于化疗组,CDK4均低于NS组(P<0.05),复方组Bax高于NS组(P<0.05),云芝组糖肽、丹参酮ⅡA组、综合治疗组CDK4低于化疗组(P<0.05),云芝糖肽组、复方组与综合治疗组肿瘤Bcl-2低于NS组(P<0.05),各药物治疗组对肿瘤有明显的抑制作用(P<0.05),复方组胸腺指数高于NS组,各药物治疗组胸腺指数均高于化疗组(P<0.05)。结论:云芝糖肽、丹参酮ⅡA对EAC荷瘤小鼠有明显的抗肿瘤和免疫调节作用,并能缓解化疗药物所引起的毒副作用,二者联用存在一定协同作用。
- 祝绚鲍依稀李进刘靖王宏萍
- 关键词：云芝糖肽艾氏腹水癌免疫调节周期蛋白凋亡相关蛋白
- 抑制组蛋白乙酰化酶活性对心肌微环境中间充质干细胞向心肌细胞分化的影响被引量：4
- 2008年
- 目的通过检测移植经干扰乙酰化作用基因Gcn5表达重组质粒ZJ3转染间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）的Wistar大鼠心肌组织内乙酰化酶活性及乙酰化作用基因Gcn5、心肌发育基因GATA4的表达量，探讨体内心肌微环境下乙酰化修饰在干细胞特化心肌样细胞转录调控中的作用。方法提取干扰组蛋白乙酰化酶Gcn5表达重组质粒ZJ3，经脂质体包载转染MSCs24h后移植至Wistar大鼠心肌组织内，2w后检测移植区域心肌组织内乙酰化酶活性及乙酰化作用基因Gcn5、心肌发育基因GATA4的表达量。结果实验组心肌组织乙酰化酶活性较正常对照组、阴性对照组及试剂对照组均有显著性降低；实验组心肌组织内Gcn5及GATA4表达量较正常对照组、阴性对照组及试剂对照组均有明显减弱。结论相关特异性基因的检测结果显示封阻干细胞染色质组蛋白乙酰化修饰后，在体内心肌微环境诱导下亦可以抑制干细胞特化心肌细胞转录过程，这为进一步研究组蛋白末端乙酰化修饰与干细胞分化调节机制奠定了实验室基础。
- 李莉朱静田杰冯川
- 关键词：GATA4基因
