湖南省自然科学基金(13JJ9002)
- 作品数：3 被引量：13H指数：2
- 相关作者：郑甲周洪波吴丽双郭宁李古月更多>>
- 相关机构：中南大学教育部更多>>
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- 相关领域：生物学更多>>
- RT-PCR检测毕赤酵母外源β-甘露聚糖酶基因拷贝数被引量：2
- 2014年
- 利用荧光定量PCR方法检测毕赤酵母外源β-甘露聚糖酶基因(man)拷贝数。以毕赤酵母中高度保守基因三磷酸甘油醛脱氢酶基因(gap)为内参基因,分别构建含有gap和man的克隆质粒,进行RT-PCR反应构建gap和man双标准曲线;获得的双标准曲线具有良好的重复性,其相关系数(R2)均为0.999,其扩增效率分别为105.1%和102.2%。提取含有外源man基因的毕赤酵母基因组进行RT-PCR检测,通过双标准曲线计算出外源man基因的拷贝数。结果显示:预先经过博莱霉素(Zeoicn)抗性筛选得到的10株毕赤酵母重组菌株中含有1、2、3、4、5和7个不等拷贝的β-甘露聚糖酶基因。结果表明该方法能够高效快速筛选和鉴定出含有不同外源β-甘露聚糖酶基因拷贝数的毕赤酵母重组菌株。
- 林福来周洪波郑甲郭宁吴俊子吴丽双
- 关键词：实时荧光定量PCR毕赤酵母基因拷贝数Β-甘露聚糖酶
- 外源蛋白在巴斯德毕赤酵母中高效分泌表达的前沿技术被引量：10
- 2014年
- 巴斯德毕赤酵母表达系统是目前应用非常广泛的外源蛋白真核表达系统。外源蛋白在巴斯德毕赤酵母中的高效分泌表达有利于减少下游纯化步骤,降低生产成本,具有重大的实用意义。本文综述了生物信息学、系统生物学、高通量筛选和合成生物学等前沿技术在信号肽和代谢系统优化中的应用,为进一步提高外源蛋白在巴斯德毕赤酵母中的分泌表达提供参考。
- 王冶郑甲唐诗哲黄才智李古月周洪波
- 关键词：巴斯德毕赤酵母外源蛋白分泌表达系统生物学合成生物学
- 普鲁兰酶基因在毕赤酵母中组成型表达及定点突变研究被引量：1
- 2013年
- 合成Bacillus acidopullulyticus的全长普鲁兰酶基因并在毕赤酵母X-33中进行组成型外分泌表达,重组酶的最适作用温度为60℃,最适作用pH值为4.5～5.0,酶比活力为2.0 U/mg。采用重叠延伸PCR方法对普鲁兰酶基因进行定点突变,实验结果表明,625、626位点Ala、Leu氨基酸突变为Leu、Tyr氨基酸后,该酶的催化效率有所降低,而Gln487Ala的突变对催化效率没有较大的影响。该研究结果为探究关键氨基酸区域对催化效率的影响提供了一定的理论和实验基础。
- 吴丽双田健郑甲郭宁王玉光周洪波
- 关键词：普鲁兰酶BACILLUS毕赤酵母定点突变
