南京医科大学科技发展基金(2010NJMUZ64)
- 作品数：2 被引量：6H指数：2
- 相关作者：王俊芳程力顾晓峰王琼夏仁云更多>>
- 相关机构：南京医科大学华中科技大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金南京医科大学科技发展基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 免疫磁珠分选兔前软骨干细胞及细胞研究平台的建立被引量：2
- 2013年
- [目的]研究兔前软骨干细胞PSCs,(precartilagious stem cells)的分离、培养方法及增殖、表型特征,为细胞移植治疗椎间盘退变,提供合适的种子细胞。[方法]取胎兔骨骺周围软骨膜(LaCroix环)中的细胞进行原代培养,然后采用免疫磁珠分离系统分选纯化PSCs。体外培养,传代,冻存复苏,绘制生长曲线,观察细胞特性。分别采用免疫组化、免疫荧光、RT-PCR等方法鉴定纯化后的PSCs。[结果]免疫磁珠分离可获得纯度较高的兔PSCs,培养后成活率高,细胞状态良好。细胞冻存复苏后,细胞增殖速度、细胞形态及表面标志物无明显变化。免疫组化、免疫荧光、RT-PCR等方法鉴定后,细胞都有明显的PSCs表面特异性标记物的表达。[结论]PSCs存在于LaCroix环中,免疫磁珠分离法得到的PSCs,体外培养条件下,细胞增殖较快,生物学特性稳定。
- 张瑞王俊芳程力
- 关键词：前软骨干细胞免疫磁珠分选
- 转化生长因子β1诱导永生化人前软骨干细胞向髓核样细胞分化的实验研究被引量：4
- 2012年
- 目的研究转化生长因子β1（TGF-β1）诱导永生化人前软骨干细胞（IPSCs）向髓核样细胞分化的可行性。方法将体外培养的IPSCs接种于温敏型壳聚糖水凝胶（C／GP）三维支架上，加人含TGF-β1的诱导培养基，低氧条件下进行诱导培养，观察三维支架上IPSCs的生长及分化情况。7d后行AlcianBlue染色，分析细胞外基质糖胺聚糖（GAG）合成情况，并收集细胞，提取RNA。RT-PCR检测诱导前后髓核样细胞标志基因Ⅱ型胶原（Collagen11）和蛋白聚糖（Aggrecan）的表达情况，WesternBlot检测诱导前后细胞内B．catenin蛋白表达水平的变化。结果IPSCs在三维支架上生长状态良好，诱导7d后，AlcianBlue染色表明，细胞外基质GAG的合成明显增多，实验组（诱导培养基）明显多于对照组（普通培养基）。RT-PCR证实Ⅱ型胶原和Aggrecan的基因表达水平明显增高，实验组明显高于对照组；West-eYnBlot证实细胞内p-catenin蛋白表达水平明显上调，实验组明显高于对照组。结论IPSCs经TGF—β1诱导可在体外定向分化为髓核样细胞，诱导分化后的细胞具有良好的分泌功能，能够有效地分泌细胞外基质成分。TGF—β1可能通过上调细胞内B—catenin的表达诱导IPSCs向髓核样细胞分化。
- 顾晓峰王琼夏仁云方煌程力王俊芳
- 关键词：转化生长因子Β1软骨细胞干细胞
