宁夏回族自治区自然科学基金(NZ12199)
- 作品数：4 被引量：14H指数：3
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- 细粒棘球蚴Eg95蛋白减毒沙门氏菌重组株的构建与免疫原性分析被引量：6
- 2014年
- 目的探讨以减毒鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)为载体构建细粒棘球蚴口服活载体疫苗的可行性。方法将细粒棘球蚴Eg95基因插入到表达载体p YA3341中,构建重组质粒p YA3341-Eg95,并用PCR和酶切鉴定。将重组质粒先后电转入减毒沙门氏菌X3770和X4550,获得重组菌株St-Eg95,蛋白质印迹(Western blotting)分析重组菌Eg95蛋白的表达情况。将重组菌St-Eg95体外培养传10代,每隔一代提取质粒,利用PCR鉴定重组质粒的稳定性。BALB/c小鼠30只,随机均分为6组,其中4组分别经口灌胃给予St-Eg95 1×109、1×1010、1×1011和1×1012 cfu/ml,100μl/只,余下2组分别经口灌胃给予等体积野生型沙门氏菌1×107 cfu/ml和PBS,常规饲养30 d,观察生存情况。另取15只BALB/c小鼠,均分为3组,分别为St-Eg95免疫组、阴性对照组和空白对照组,St-Eg95组和阴性对照组按5×1010cfu/ml剂量的重组菌和阴性菌分别经口灌胃免疫小鼠,0.5 ml/(只·次),共2次,间隔2周。分别于免疫前和末次免疫后2、4和6周采血,收集血清。用细粒棘球蚴Ig G抗体检测试剂盒(间接ELISA)检测Eg95蛋白的Ig G抗体滴度。于末次免疫后6周处死小鼠,用噻唑蓝(MTT)法检测特异性脾淋巴细胞增殖活性。结果经PCR和酶切鉴定表明,重组质粒p YA3341-Eg95构建成功,在重组菌St-Eg95中有目的蛋白Eg95的表达,相对分子质量(Mr)约为18 000,与预期大小一致。重组菌传10代后,PCR仍可扩增到约486 bp的Eg95基因片段。安全性实验结果显示,灌胃给予重组菌和PBS的小鼠30 d后均存活,活动正常;给予野生型沙门氏菌的小鼠均于4 d后死亡。间接ELISA检测结果显示,末次免疫后2周St-Eg95组小鼠特异性Ig G抗体水平即明显升高,显著高于阴性对照组和空白对照组(P<0.05);末次免疫后4周抗体水平达到最高值,约1∶1 700。小鼠淋巴细胞增殖试验结果显示,末次免疫后6周,St-Eg95组小鼠的脾淋巴细胞刺激指数(SI值)达到1.94±0
- 王志昇吴璟林源李红兵刘强王志辉郎多勇杨文
- 关键词：细粒棘球蚴EG95减毒沙门氏菌免疫原性
- 我校屏障环境动物实验室管理初探被引量：6
- 2014年
- 针对医学院校屏障环境动物实验室管理和运行中存在的问题,分析了目前动物实验室管理工作的困境,结合自身实际情况,对动物实验室管理模式进行了探讨,以期对动物实验室建设与管理提供有益的借鉴.
- 王志昇陈健茂李红兵冉林武杨文
- 关键词：动物实验室医学院校
- 细粒棘球蚴重组St-Eg.ferritin疫苗构建与免疫性分析
- 2014年
- 目的探讨以减毒沙门菌为载体,构建表达细粒棘球蚴Eg.ferriti蛋白口服活载体疫苗的可行性。方法从细粒棘球蚴包囊中分离原头节,超声粉碎后提取总RNA,通过RT-PCR扩增细粒棘球蚴Eg.ferritin基因,然后将Eg.ferritin基因插入到pYA3341表达载体中,构建重组质粒pYA3341-Eg.ferritin,将重组质粒依次电转入减毒鼠伤寒沙门菌X3770和X4550,获得重组菌株St-Eg.ferritin,对重组菌的稳定性、安全性以及免疫原性进行评价。结果经酶切鉴定成功构建了重组质粒pYA3341-Eg.ferritin,Western blot结果证实Eg.ferritin蛋白在重组菌中获得了表达;重组菌株在体外至少传代10次而保证重组质粒不丢失;小鼠免疫试验证实,重组菌安全无毒性;重组菌口服免疫小鼠可检测到Eg.ferritin特异性IgG抗体。结论本试验成功构建了能稳定表达细粒棘球蚴Eg.ferritin蛋白的口服减毒鼠伤寒沙门菌活载体疫苗株,并显示了良好的免疫原性和安全性,为包虫病新型口服基因工程活载体疫苗的研制奠定基础。
- 王志昇杨文陈健茂林源吴璟李红兵郎多勇邱红燕
- 关键词：细粒棘球蚴减毒鼠伤寒沙门菌免疫原性
- 细粒棘球蚴重组St-Eg 95-Eg.ferritin疫苗构建及生物学特性检测被引量：3
- 2014年
- 构建表达细粒棘球蚴Eg95-Eg.ferritin融合蛋白的重组口服减毒鼠伤寒沙门菌活载体疫苗株并评价其生物学特性。将细粒棘球蚴Eg95-Eg.ferritin融合基因插入到表达载体pYA3341中,构建重组质粒pYA3341-Eg95-Eg.ferritin,将重组质粒分别电转入减毒鼠伤寒沙门菌X3770和X4550,获得重组疫苗菌株St-Eg95-Eg.ferritin,对重组菌的稳定性、生长状态及安全性进行分析。结果表明,经PCR和酶切鉴定成功构建重组质粒pYA3341-Eg95-Eg.ferritin,Western blot检测Eg95-Eg.ferritin蛋白在重组菌中获得表达;生物学特性研究结果表明,重组质粒可稳定存在,且不影响重组菌的生长状态,小鼠口服试验证实,重组菌安全无毒性。成功构建能稳定表达细粒棘球蚴Eg95-Eg.ferritin融合蛋白的口服减毒鼠伤寒沙门菌活载体疫苗株,将为研究包虫病口服基因工程疫苗奠定基础。
- 王志昇林源刘强吴璟郎多勇李红兵杨文
- 关键词：细粒棘球蚴减毒鼠伤寒沙门菌
