国家自然科学基金(81070270)
- 作品数：3 被引量：7H指数：1
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- HP1α在Zmpste24-缺陷早老小鼠胚胎成纤维细胞中表达和磷酸化水平升高被引量：1
- 2012年
- 本实验旨在研究异染色质蛋白1(heterochromatin protein 1,HP1)在Zmpste24基因敲除早老小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEFs)中的表达量和磷酸化水平,探索异染色质功能异常与早老发病机制的内在联系.首先取雄雌Zmpste24杂合子小鼠胚胎,原代培养MEFs;分别用PCR和Western印迹检测MEFs基因型和A型核纤层蛋白(laminA)表达以区分野生型与Zmpste24-缺陷型早老细胞;用与衰老相关的β-半乳糖苷酶染色法(senescence associated-β-galactosidase assay,SA-β-gal)确定早老细胞出现衰老表型的传代数.用Western印迹和phos-tagWestern印迹分别检测HP1在Zmpste24+/+和Zmpste24-/-MEFs中表达量和磷酸化水平的差异.实验结果显示,Zmpste24-/-MEFs中存在异常的LaminA,且在传代培养第5代出现明显的细胞衰老现象.选用培养至第3代或第4代的MEFs细胞进行下述实验发现,Zmpste24-/-MEFs中HP1α表达量明显高于Zmpste24+/+MEFs,而HP1β未发现明显升高;Zmpste24+/+MEFs中HP1α以非磷酸化状态为主,但在Zmpste24-/-MEFs中磷酸化HP1α比例明显升高;2种细胞中均未检测到磷酸化HP1β.本研究结果证明,HP1α在Zmpste24-缺陷型早老小鼠传代早期MEFs中的表达量和磷酸化水平均有升高,提示HP1α参与A型核纤层蛋白相关的早老小鼠发病机制.
- 刘佳周光前尹献辉刘宝华郑慧玲李雪芹王优雅王子梅
- 关键词：早老症小鼠胚胎成纤维细胞蛋白质磷酸化
- 衰老的表观遗传机制研究进展被引量：6
- 2013年
- 近年来,关于衰老的表观遗传学机制的研究逐渐成为分子生物学研究的热点之一。表观遗传修饰在衰老进程中发生了复杂的变化,而这种变化可能是衰老的决定因素之一。该文从基因组DNA甲基化、组蛋白H3、H4特殊位点甲基化、乙酰化及其相应修饰酶变化、染色质结构状态改变、端粒功能和非编码RNA调节等方面总结近几年来关于衰老进程中发生的表观遗传学修饰改变的研究情况,为衰老发生机制和抗衰老研究提供依据。
- 尹献辉刘佳李雪芹王优雅胡静仪王子梅周中军
- 关键词：衰老表观遗传组蛋白甲基化组蛋白乙酰化染色质重塑细胞衰老
- 磷酸化标签方法检测异染色质蛋白1αDNA损伤后蛋白磷酸化状态
- 2012年
- 目的通过检测异染色质蛋白1α(HP1α)在DNA损伤后的磷酸化状况,介绍一种用磷酸化标签(phos-tag)试剂检测磷酸化蛋白质的新方法。方法取雄雌C57小鼠交配后孕13.5 d胚胎,分离并原代培养小鼠胚胎成纤维细胞。对照组及实验组(6个损伤时间点)各取2个100 mm培养皿的细胞进行实验,实验组细胞用喜树碱进行DNA损伤;对照组用等量的二甲基亚砜处理。用掺入phos-tag的十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白并转印,将膜用抗HP1α的抗体孵育,用偶联辣根过氧化物酶的抗体做二抗,通过成像系统检测蛋白。结果实验组存在一条与HP1α有明显不同迁移率的磷酸化HP1α条带,与对照组相比DNA损伤后磷酸化HP1α含量一过性增多。结论 HP1α被DNA损伤诱导为磷酸化状态,提示其可能在DNA修复过程中扮演重要角色。Phos-tag蛋白质印迹法可采用普通抗体检测磷酸化的蛋白,是一种简便易行的检测未知磷酸化蛋白质的新方法。
- 刘佳周光前尹献辉李雪芹王优雅胡静仪王子梅
- 关键词：蛋白质磷酸化DNA损伤
