国家重点基础研究发展计划(G2000057003)
- 作品数：23 被引量：228H指数：8
- 相关作者：陈香美师锁柱彭丽霞田月蔡广研更多>>
- 相关机构：中国人民解放军总医院江苏省苏北人民医院中国人民解放军更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金国家自然科学基金创新研究群体项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 金属蛋白酶组织抑制剂1基因转染对系膜细胞表达纤连蛋白和Ⅳ型胶原的影响被引量：14
- 2002年
- 目的 探讨金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP)-1对大鼠肾小球系膜细胞表达纤连蛋白(FN)和Ⅳ型胶原的影响。方法 应用亚克隆技术构建正义pLXIN-TIMP-1(PLT)和反义pLXIN-ATIMP-1(PLA)两个逆转录病毒载体,经PA317细胞包装后,得到高滴度的病毒上清,分别感染大鼠系膜细胞,用PCR及Northern杂交鉴定外源基因的整合和表达。Northern杂交及ELISA方法检测大鼠系膜细胞内源性TIMP-1、FN和Ⅳ型胶原的表达。结果 外源TIMP-1基因稳定整合到大鼠肾小球系膜细胞中,并获得高效表达。感染正义TIMP-1基因后,大鼠系膜细胞内源性TIMP-1表达没有变化,细胞外基质成分FN和Ⅳ型胶原的蛋白质水平的表达明显增高;与之相反,感染反义的TIMF-1基因后,大鼠内源性TIMP-1下调,细胞外基质成分FN和Ⅳ型胶原的蛋白质水平的表达明显降低。然而,上述系膜细胞FN和Ⅳ型胶原的mRNA水平均没有变化。结论TIMP-1过表达引起FN和Ⅳ型胶原增多,反义TIMP-1则使FN和Ⅳ型胶原的表达下调。提示反义TIMP-1可通过促进肾脏细胞外基质降解而减轻其积聚,为进一步在某些纤维化肾脏疾病中应用反义TIMP-1进行基因治疗奠定一定的实验基础。
- 林洪丽于志恒傅博吕杨陈香美
- 关键词：金属蛋白酶组织抑制剂1基因转染纤连蛋白肾小球系膜细胞
- TIMP-1转基因小鼠纯合子的建立及建系被引量：5
- 2003年
- 采用遗传学育种方法 ,使外源基因整合位点随机的基质金属蛋白酶抑制剂 1(TIMP 1)转基因小鼠成为单一整合位点的纯合子转基因小鼠而建立TIMP 1转基因小鼠品系 .通过受精卵原核显微注射方法 ,获得带有人TIMP 1基因的Founder小鼠 .将转基因小鼠与正常小鼠交配 ,得到子代小鼠 .通过PCR及Southern印迹等方法 ,检测TIMP 1DNA在转基因小鼠体内的整合情况 ,阳性率达5 0 %后 ,进行近亲交配 .提取小鼠组织总RNA ,Northern印迹分析阳性小鼠各组织外源性TIMP 1mRNA表达情况 ,以正常NIH小鼠做对照 .获得了 6代小鼠共 4 2 4只 ,其中PCR阳性鼠 2 72只 ,Southern阳性鼠 2 2 6只 ,纯合子转基因小鼠 12 8只 ;F4代后阳性率达到 95 %以上 .转基因小鼠TIMP 1基因表达情况在肾脏的丰度明显高于肝脏和脾脏 (P <0 0 1) ,而肝和脾之间并没有显著差异 (P>0 0 5 ) .外源基因在转基因小鼠体内可以稳定遗传 ,并得到了整合有TIMP 1基因的纯合子转基因小鼠 ,且在阳性的转基因小鼠体内在肾脏中特异性表达 ,为以后开展TIMP
- 田玥刘庆鑫陈香美洪权林洪丽冯全洲张雪光
- 关键词：转基因小鼠纯合子基质金属蛋白酶抑制剂杂交
- IgA肾病患者纤溶酶原激活物的变化及临床意义被引量：8
- 2001年
- 为探讨IgA肾病 (IgAN)患者纤溶酶原激活物 (PA)的变化及临床意义 ,以纤维蛋白平板法检测 10 8例IgAN及 36例健康自愿者尿PA活性 ,以免疫组化方法观察了 2 7例IgAN及 6例正常人肾组织t PA、u PA抗原表达。结果显示 ,正常人肾组织t PA少量表达于肾小球毛细血管袢 ,u PA表达于所有节段的肾小管上皮细胞。IgAN肾组织t PA阳性率及肾小球t PA平均积分明显高于正常人 (P <0 0 1) ,与其增殖程度有关。IgAN患者u PA表达明显下调 ,尿PA活性下降 ,肾小管间质病变严重者尿PA活性下降更为明显。本研究表明 ,IgAN早期肾组织t PA表达增加 ,晚期下降 ;u PA表达减少 ;尿PA活性的检测有助于判断IgAN的病情。
- 庄永泽陈香美师锁柱吴镝张燕平田月
- 关键词：肾小球肾炎IGA组织型纤溶酶原激活物尿激酶型纤溶酶原激活物
- MRL/lpr狼疮小鼠肾脏明胶酶表达随增龄变化及意义被引量：4
- 2002年
- 目的 观察不同周龄MRL/lpr狼疮小鼠肾脏明胶酶的表达及其随增龄而发生的活性变化及意义。方法 取 8、16与 2 4周龄MRL/lpr狼疮小鼠的肾组织进行常规病理检测 ,利用含有放射自显影的成像乳胶对冷冻肾组织切片进行原位明胶酶活性的检测 ;利用免疫组织化学检测肾脏明胶酶A与明胶酶B的蛋白表达变化 ,十二氨基磺酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)明胶酶谱法检测肾脏明胶酶A、B的活性变化。结果 8周龄狼疮小鼠肾组织中仅在血管处检测到明胶酶的活性 ;16与2 4周龄狼疮小鼠肾小球内明胶酶的净活性明显增加 ,在肾小球以及肾小管间质上也可检测到明胶酶的活性。乙二胺四乙酸 (EDTA)能够抑制肾脏明胶酶的活性。免疫组织化学与SDS PAGE明胶酶谱法结果显示其肾组织中明胶酶A与明胶酶B的蛋白质表达及活性均明显增加。结论 明胶酶A、B在自发性狼疮小鼠肾炎中的表达及活化随增龄均明显增加 。
- 蔡广研陈香美王兆霞田月师锁柱
- 关键词：狼疮肾炎明胶酶
- 肾结石大鼠钠/二羧基转运蛋白1的表达及枸橼酸钾防治机制的研究被引量：6
- 2002年
- 目的 研究肾组织钠/二羧基转运蛋白1(SDCT1)与低枸橼酸尿的关系以及枸橼酸钾的干预作用,探讨肾结石发病的分子机制和防治措施。方法 雄性Wistar大鼠分为对照组、肾结石组及枸橼酸钾干预组。血、尿枸橼酸和草酸采用酶法测定,Northern blot检测大鼠肾组织SDCT1mRNA水平的改变,免疫组织化学观察SDCT1在肾组织的分布及表达变化。结果 与对照组比较,肾结石组第3天尿草酸水平显著升高,枸橼酸水平显著降低,同时肾组织SDCT1mRNA及其蛋白水平上调。第7天SDCT1mRNA及其表达产物增加更为显著,同时尿枸橼酸水平进一步降低,尿钙排泄显著增加,87.5％大鼠有中-大量的草酸钙结石形成。第14天上述改变更为明显,结石形成率达100％。枸橼酸钾干预组各时间点尿草酸水平与肾结石组差异无显著性意义,但尿枸橼酸水平显著高于肾结石组及对照组,肾组织SDCT1mRNA及蛋白表达显著低于肾结石组,与对照组差异无显著性意义;结石形成率显著低于肾结石组;肾小管扩张、炎细胞浸润等病变也明显减轻。结论 肾组织SDCT1表达上调可能是低枸橼酸尿的重要原因,与肾结石的形成有密切关系。枸橼酸钾可下调肾结石大鼠肾组织SDCT1的表达,对肾结石的形成具有明显的干预作用。
- 何娅妮陈香美于志恒吕杨师锁柱王兆霞朱晗玉彭丽霞
- 关键词：肾结石枸橼酸钾
- 纤维蛋白诱导活化系膜细胞表达明胶酶A、B的机制研究被引量：2
- 2001年
- 为观察纤维蛋白对系膜细胞 (HMC)表达明胶酶A(MMP 2 )、明胶酶B(MMP 9)的作用并探讨其活化机制 ,应用RT PCR、明胶酶谱分析法分别在基因转录水平与蛋白质活性水平上检测纤维蛋白对HMC表达MMP 2、MMP 9的作用 ,采用纤维蛋白酶谱法与平板法检测纤维蛋白对HMC表达纤溶酶原激活物 (PA)活性的影响。结果发现 ,纤维蛋白呈剂量与时间依赖性促进HMCMMP 2与MMP 9表达的上调 ,并同时促进HMCtPA与uPA的表达 ;应用抑肽酶阻断纤溶酶活性后能够完全阻断 pro MMP 2与pro MMP 9的活化。提示肾脏局部沉积的纤维蛋白可以促进HMC表达与活化MMP 2、MMP 9,而MMP 2与MMP 9的活化依赖于PA/纤溶酶系统的调控。
- 蔡广研陈香美傅博吕扬
- 关键词：纤维蛋白明胶酶A明胶酶B纤溶酶原激活剂
- IgA肾病肾血管纤溶酶原激活物抑制物-1和基质金属蛋白酶-9的表达及其意义被引量：5
- 2002年
- 为探讨免疫球蛋白A肾病(IgA肾病)患者肾血管壁纤溶酶原激活物抑制物1(PAI1)、基质金属蛋白酶9(MMP9)、金属蛋白酶组织抑制物1(TIMP1)和α平滑肌肌动蛋白(αSMA)的表达及意义,采用免疫组织化学技术检测38例IgA肾病肾组织血管壁的PAI1、MMP9、αSMA和TIMP1的蛋白表达。结果显示,αSMA主要表达于平滑肌细胞;PAI1表达与αSMA类似;MMP9在平滑肌细胞和内皮细胞均表达;TIMP1仅在血管壁内膜的内皮细胞微弱表达。在IgA肾病LeeⅣ～Ⅴ级组,肾血管壁的PAI1、MMP9和αSMA表达显著高于LeeⅠ～Ⅲ级组(P<001)。直线相关分析显示,肾血管的PAI1、MMP9和αSMA表达与肾小管间质的纤维化和炎细胞浸润呈正相关(P<001)。提示PAI1可能参与介导了IgA肾病肾血管壁细胞外基质的积聚过程,MMP9则可能促进血管的平滑肌细胞迁移和内膜增生。
- 王建中陈香美师锁柱田月
- 关键词：IGA肾病基质金属蛋白酶-9金属蛋白酶组织抑制物-1
- 衰老大鼠肾脏肾素-血管紧张素系统的变化及缬沙坦的调控作用被引量：4
- 2002年
- 为观察老年肾脏肾素-血管紧张素系统（RAS）随增龄的改变及长期应用血管紧张素Ⅰ1型受体拮抗剂（AT1RA）后的影响,将雄性Wistar大鼠分为青年组、老年组及缬沙坦治疗组,测定肾素、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）水平、AngⅡ受体AT1aR mRNA、AT1bR mRNA及AT1R mRNA的表达。结果发现,与青年组比较,老年大鼠血浆肾素、AngⅡ水平明显下降,肾组织AngⅡ则明显升高,应用缬沙坦后肾组织AngⅡ水平进一步升高;老年大鼠肾脏AT1aR mRNA、AT1bR mRNA表达下调,AT2R mRNA表达则上调,应用缬沙坦可上调AT1aRmR-NA,但对AT1bRmRNA及AT2RmRNA表达无影响。研究表明,老年大鼠肾脏局部AngⅡ水平升高,两型ATR的基因表达与青年鼠相比则发生了不同改变;缬沙坦使老年大鼠肾组织AngⅡ水平升高,同时阻断了AT1R的作用,而AT2RmRNA水平未发生改变,有利于加强AT2R的作用。
- 张利陈香美彭丽霞刘航张雪光洪权
- 关键词：衰老肾素-血管紧张素系统
- 金属蛋白酶组织抑制剂1在大鼠肾小管间质损害中的表达及其意义被引量：42
- 2002年
- 目的 观察单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠模型中金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP-1)在肾小管间质中的表达部位、动态变化及其与肾小管问质损害的关系。方法 制备UUO大鼠模型,采用免疫组织化学方法检测UUO术后第1、3、5、7、14天肾小管间质中TIMP-1、α-平滑肌肌动蛋白(SMA)、增殖细胞核抗原(PCNA)和单核巨噬细胞抗原(ED)-1的表达及其与输尿管梗阻后肾小管间质损害的关系。结果 UUO术后第1天肾间质可见少量TIMP-1表达细胞,第3～7天TIMP-1表达明显增加,主要表达于肾小管上皮细胞和肾间质。UUO术后第3天肾小管PCNA表达达高峰,随后下降,而肾间质PCNA水平于第7～14天仍较高。UUO术后第3天肾间质成纤维细胞及肾小管上皮细胞可检出α-SMA表达并随时间递增。α-SMA阳性面积与肾间质相对面积成正相关(r=0.924,p<0.01)。TIMP-1表达与间质相对面积(r=0.835,P<0.05)及α-SMA阳性面积(r=0.922,P<0.01)成正相关。结论 TIMP-1蛋白质于肾小管间质病变早期表达于肾小管间质,早于肾间质纤维化出现,其表达量与肾间质α-SMA表达及肾间质相对面积呈正相关并随病变进展逐渐增加。TIMP-1在肾小管上皮细胞和问质细胞的高表达及肾小管上皮细胞和间质细胞增殖可能参与介导UUO术后肾小管间质损害。
- 董健平陈香美师锁柱田月
- 关键词：金属蛋白酶组织抑制剂1输尿管梗阻纤维化肾小管间质损害免疫组织化学细胞增殖
- 基质金属蛋白酶-9和金属蛋白酶组织抑制物-1在IgA肾病肾组织中的表达被引量：60
- 2002年
- 目的 探讨基质金属蛋白酶 9(MMP 9) /金属蛋白酶组织抑制物 1(TIMP 1)系统在IgA肾病肾组织中的表达及其对IgA肾病的进展的影响。方法 采用免疫组织化学和原位杂交技术 ,分别在蛋白质和基因水平检测 38例IgA肾病患者肾组织中的MMP 9和TIMP 1的变化。结果 MMP 9在正常肾脏肾小球的脏层上皮细胞和内皮细胞有少量表达 ,在肾小管上皮细胞和间质血管壁也有少量表达 ;在IgA肾病中 ,MMP 9在系膜增殖性肾小球和间质血管壁的表达均明显增多 (P <0 0 0 1) ,而在硬化肾小球内的表达则明显减少 ,肾小管细胞的MMP 9表达无明显变化。TIMP 1在正常肾组织中不能检出 ,在IgA肾病患者具有系膜增殖性病变的肾小球中有微量表达 ,在增殖很重但尚未完全硬化的肾小球内表达增多 ,在肾小管间质表达最为明显 (P <0 0 0 1) ,其主要见于肾小管细胞、间质细胞和血管内皮细胞。肾组织中的TIMP 1表达与血清肌酐水平呈显著相关 (P <0 0 5 ) ,与肾小管间质的纤维化和炎细胞浸润程度亦明显相关 (P值均 <0 0 1)。肾小球中的MMP 9表达与尿蛋白无明显相关性 ,但与血清肌酐水平呈显著负相关 (P <0 0 5 )。结论 MMP 9和TIMP
- 王建中陈香美师锁柱张燕平田月
- 关键词：肾小球肾炎IGA金属蛋白酶类金属蛋白酶类组织抑制剂
