天津市卫生局科技基金(2011KZ57)
- 作品数：17 被引量：66H指数：5
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- 循环牵张应力对人骨关节炎软骨细胞增殖的影响被引量：9
- 2013年
- 目的探讨循环牵张应力对体外培养的人骨关节炎患者软骨细胞增殖的影响。方法退变软骨来源于1例66岁骨关节炎患者的手术取材,病理学诊断评估其退变程度。无菌条件下酶消化法原代培养退变软骨细胞,并用甲苯胺蓝、番红O和Ⅱ型胶原免疫荧光染色进行鉴定。将第3代细胞接种于硅橡胶膜载体上,用Electro?Force3200力学试验仪搭载的BioDynamic生物反应仓对其施加0、5%、10%和15%的应变作用3 h,受力完成后继续培养24 h,用流式细胞仪测定不同力学环境下细胞的增殖活性。结果随着牵张应力的增加,S期细胞百分比和增殖指数(PI)呈缓慢上升趋势,10%时达到峰值,之后开始下降。结论体外培养的人骨关节炎软骨细胞的增殖活性与受力大小有关,且存在细胞增殖的最适应力条件;超过此应力范围其增殖活性将会降低。
- 孙晓雷赵斌马信龙李秀兰马剑雄李爽杨强
- 关键词：骨关节炎关节细胞增殖细胞周期
- 柚皮苷环境下微应变对成骨细胞增殖与分化的影响被引量：4
- 2014年
- 目的:探讨柚皮苷环境下,微应变对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响。方法:体外培养大鼠成骨细胞,在柚皮苷环境下,采用EF3200力学试验仪搭载的BioDynamic生物反应仓及自行研制的硅橡胶膜,对细胞进行循环牵张微应变加载。流式细胞仪检测细胞周期,RT-PCR检测骨钙素(OCN)、I型胶原(ColⅠ)及成骨特异性转录因子(Runx2)基因表达。结果:单纯力学刺激及柚皮苷联合力学刺激均能促进细胞增殖(P<0.05)。柚皮苷及单纯力学刺激均抑制细胞OCN基因表达(P<0.05)。但柚皮苷联合10%的微应变环境明显增强OCN基因表达(P<0.05)。单纯5%微应变刺激能增强Runx2基因表达(P<0.05);而柚皮苷联合力学刺激对Runx2基因表达没有影响;单纯10%微应变刺激与柚皮苷联合10%微应变刺激均增强ColⅠ基因表达。结论:微应变环境能促进成骨细胞增殖;柚皮苷环境下微应变加载能促进成骨细胞的分化功能。
- 孙晓雷马信龙张晨马剑雄赵斌张扬郭悦李秀兰
- 关键词：骨碎补柚皮苷成骨细胞分化
- 兔坐骨神经损伤后内源性生长因子含量的变化及意义被引量：3
- 2014年
- 目的探讨兔坐骨神经损伤后内源性bFGF、NGF及脑源性神经营养因子（brain—derivedneurotrophicfactor，BDNF）的变化规律及干细胞移植治疗周围神经损伤的最佳时机。方法新西兰大白兔16只，采用钳夹法制作坐骨神经损伤模型，按随机数字表法分为正常对照组、损伤3，7，14d组，每组4只。病理切片HE染色观察钳夹损伤后神经组织的结构变化，采用ELISA方法检测各组坐骨神经匀浆上清液中bFGF、NGF及BDNF的含量。结果损伤坐骨神经组织中bFGF的含量伤后缓慢上升，至伤后7d达到峰值（P〈0．05），之后下降并于14d降至正常水平（P〉0．05）；BDNF的含量伤后迅速上升，至伤后7d达到峰值（P〈0．05），之后逐渐下降并于14d降至正常神经水平（P〉0．05）；NGF的含量伤后迅速上升，至伤后3d达到峰值（P〈0．05），之后迅速下降并于7d降至正常水平（P〉0．05）。结论在周围神经损伤后的早期修复过程中，神经组织能够迅速调节NGF、bFGF及BDNF的分泌，各因子的分泌调节与损伤时间有关，呈峰值效应；伤后早期（3～7d）是进行神经吻合修复、神经移植及干细胞移植治疗的最佳时间。
- 孙晓雷赵斌马信龙李秀兰徐康张扬郭悦
- 关键词：坐骨神经干细胞移植
- 柚皮苷联合运动对去势大鼠骨量和骨强度的影响被引量：1
- 2014年
- 目的观察柚皮苷(NG)联合中强度跑台运动对去势大鼠骨质疏松模型的治疗效果。方法2月龄雌性SD大鼠80只,用随机数字法分为假手术组(SHAM)、去势组(OVX)、去势+不同浓度(40、100、200 mg/kg)柚皮苷组(OVX+NG)、去势+跑台+柚皮苷组(OVX+EX+NG)、去势+跑台组(OVX+EX)、雌激素组(OVX+E2),每组10只。大鼠切除卵巢2个月后开始给药,给药60 d后观察各组大鼠股骨骨密度(BMD),Micro-CT参数,血清生化指标及及股骨力学性能与组织学改变。结果柚皮苷与跑台运动干预60 d后,OVX+EX+NG组大鼠股骨颈力学强度、股骨BMD、BV/TV、Tb.N、Tb.Th等均高于单纯去势组(P<0.05),OVX+EX+NG组治疗效果与柚皮苷浓度呈正相关,以200 mg/kg柚皮苷效果最佳;200 mg/kg柚皮苷联合中强度跑台运动可进一步提高治疗效果。OVX+NG组大鼠血清骨钙素升高,Ⅰ型胶原C端肽(CTX-1)降低;OVX+EX组大鼠骨钙素与CTX-1均降低;OVX+EX+NG组大鼠骨钙素水平与柚皮苷组(200 mg/kg)无差异,但高于OVX+EX。OVX+EX+NG组CTX-1水平低于单纯柚皮苷组和单纯跑台组(P<0.05)。结论柚皮苷联合中强度跑台运动可提高去势大鼠股骨BMD,增加骨小梁数目,改善骨代谢指标,提高股骨力学性能。
- 孙晓雷李风波马剑雄马信龙张扬赵斌李艳军孟新民吕建伟
- 关键词：柚皮苷跑台骨代谢
- 低渗联合冻干改良制备组织工程神经支架及其性能研究被引量：1
- 2014年
- 目的探讨低渗联合冻干技术改良制备脱细胞周围神经支架的可行性。方法将剥离神经周嗣结缔组织的坐骨神经分为3组（n=12）：未处理组：正常新鲜神经未做任何处理；传统组：传统Hudson法制备脱细胞神经支架；改良组：低渗联合冻干技术制备改良脱细胞神经支架。对以上3组行组织学、扫描电镜、孔隙率及孔隙直径测定、生物力学评估；噻唑蓝法（MTT）分析改良支架浸提液毒性；分离兔脂肪干细胞（ADSCs）种植到改良支架七，用苏术精-伊红（HE）染色、Live／Dead染色观察细胞在支架上生长、存活情况。结果与未处理组和传统组比较，改良组神经蓝染细胞核消失，仅见呈波浪状排列的雪旺细胞基底膜，结构较疏松。各组层黏连蛋白免疫荧光染色均为阳性。与末处理组比较，传统组与改良组脱细胞神经支架髓鞘、轴突及细胞等结构均消失，纵切面上均可见平行排列的基底膜管，但改良组相对传统组而言组织结构较为疏松。改良组脱细胞神经支架的孔隙率（49．34％4-9．76％）及孔隙直径（17．6l±3．69）μm较传统组[34．50％4-7．26％、（11．964-3．10）μm]明显增大，差异均有统计学意义（P〈0．05）。3组神经间生物力学性能（极限载荷、韧度、极限应力、极限应变、弹性模量及断裂功耗）比较差异均无统计学意义（P〉0．05）。MTT法显示不同浓度支架浸提液与对照培养液对细胞增殖影响差异均无统计学意义（P〉0．05）。HE染色及Live／Dead染色显示细胞在改良支架上存活及生长情况良好。结论低渗联合冻干技术改良制备的脱细胞神经支架具有良好的孔隙率、孔隙商径及牛物力学特性，无毒，细胞相容性良好，可作为一种更有利于细胞复合的神经支架材料。
- 赵斌马信龙李秀兰马剑雄张扬杨召李爽杨强
- 关键词：生物力学冷冻干燥低渗
- 低分子量褐藻糖胶对去势大鼠骨质疏松的影响被引量：2
- 2016年
- 目的:观察低分子量褐藻糖胶(LMWF)对去势大鼠骨质疏松的影响。方法:手术切除SD大鼠双侧卵巢,建立大鼠骨质疏松模型。实验分为假手术组(SHAM),去势组(OVX),LMWF(5μg/kg)组。于用药4、8周时测量其股骨的骨密度、骨小梁情况、骨代谢与力学性能,并进行组间比较。结果:与OVX组比较,LMWF组用药4周后即可明显提升股骨骨密度(P<0.05):用药8周后骨密度进一步提升:LMWF组骨体积比(BV/TV)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁数目(Tb.N)、骨小梁间隙(Tb.Sp)明显优于OVX组(P<0.05);LMWF可降低血PINP与CTX-1的水平,提升去势大鼠的股骨干与股骨颈的力学性能(P<0.05)。结论:LMWF能提高去势大鼠的骨密度和骨小梁数目,增加骨矿化,改善骨代谢指标,提升股骨的力学性能。
- 金鑫朱立国李秀兰贾建张杨孙晓雷马剑雄马信龙
- 关键词：骨质疏松褐藻糖胶骨代谢骨密度
- 柚皮苷对破骨细胞分化的影响被引量：20
- 2015年
- 目的:探讨骨碎补单体成分柚皮苷对小鼠单核细胞RAW264.7诱导分化为破骨细胞的影响。方法:通过100μg·L-1核因子κB受体活化因子配基(RANKL)诱导RAW264.7细胞株分化为成熟破骨细胞,经TRAP特异性染色和骨吸收陷窝对破骨细胞进行鉴定。采用MTT法筛选抑制破骨细胞最强的浓度。在诱导过程中,采用筛选后含柚皮苷的培养基,诱导5 d后,通过TRAP阳性细胞计数和骨吸收面积分析来观察柚皮苷对破骨细胞的形成和骨吸收功能情况;流式细胞术检测柚皮苷对破骨细胞增殖的影响,RT-PCR检测柚皮苷对破骨细胞分化过程中核因子κB受体活化因子(RANK)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、活化T细胞核因子1(NFATc1)与C-fos mRNA表达的影响。结果:采用100μg·L-1的RANKL可成功诱导成熟的、有功能的破骨细胞。柚皮苷可以抑制破骨细胞的分化和骨吸收功能;抑制破骨细胞的增殖活性;柚皮苷可明显下调破骨细胞分化过程中的RANK,TRAP,MMP-9,NFATc1 mRNA的表达,上调C-fos mRNA表达。结论 :柚皮苷可抑制破骨细胞分化、增殖和骨吸收功能,其机制可能是通过抑制破骨细胞分化过程中特异性基因表达实现的。
- 李风波孙晓雷马剑雄张杨赵斌李艳军马信龙
- 关键词：柚皮苷破骨细胞分化RAW264.7MMP-9
- 内皮祖细胞与骨折愈合:培养与移植中的问题被引量：2
- 2014年
- 背景:近年来,人们意识到血供可能是影响骨折愈合的一个因素,基于内皮祖细胞具有良好的血管化能力,将其应用于临床促进骨折愈合具有良好的应用前景。目的:介绍内皮祖细胞在骨折愈合中的研究情况。方法:以"内皮祖细胞、骨折、血管化、血管形成"为中文关键词,以"endothelial progenitor cell,fracture,neovascularization,angiogenesis"为英文关键词,采用计算机检索1980年1月至2014年9月CNKI数据库、万方数据库和Pub Med数据库相关文章,选择48篇内皮祖细胞与骨折愈合血管化相关的文章进行分析。结果与结论:大量的研究证明内皮祖细胞具有血管化能力以及促进骨折愈合的能力,因此将内皮祖细胞应用于组织工程支架可能会增强支架在体内的存活率,从而挽救一大部分骨折延迟愈合与不愈合患者。但是对于临床来说,使用内皮祖细胞进行大规模治疗仍然存在许多问题,如内皮祖细胞体外分离培养、扩增,移植细胞数量以及移植细胞所需要的支架材料的选择等,这些问题的解决依赖于更进一步的研究。
- 孟新民孙晓雷马剑雄马信龙
- 关键词：干细胞内皮祖细胞血管形成骨折愈合间充质干细胞血管内皮生长因子促红细胞生成素
- 兔坐骨神经匀浆上清液对脂肪干细胞的诱导分化作用被引量：2
- 2015年
- 目的探讨兔坐骨神经匀浆上清液对脂肪来源干细胞（adipose-derived stem cells,ADSCs）的诱导分化作用。方法取4月龄健康新西兰大白兔（体重2.0～2.5 kg）体外分离、培养ADSCs并传至第3代;用b FGF预诱导后,加入正常坐骨神经匀浆上清液（B组）及损伤3、7、14 d的坐骨神经匀浆上清液（分别为C、D、E组）对其进行诱导,空白对照组（A组）仅加入D-Hank液。观察细胞形态变化,并采用实时荧光定量PCR检测各组细胞神经组织蛋白（S-100）、神经元特异性烯醇化酶（neuron-specific enolase,NSE）及巢蛋白（Nestin）基因表达,免疫细胞化学染色检测S-100蛋白表达。结果 C、D、E组细胞经诱导后逐渐出现雪旺细胞或神经细胞样形态改变,以D组变化最为明显;A、B组细胞形态未见明显改变,仍以梭形为主。S-100免疫细胞化学染色示,C、D、E组染色均为阳性,以D组阳性细胞最多;A、B组细胞无阳性表达。实时荧光定量PCR检测示,S-100基因表达量随损伤时间延长呈上升趋势,C、D组达高峰,之后缓慢下降;C、D组表达量显著高于A、B、E组（P〈0.05）,C、D组间差异无统计学意义（P〉0.05）。NSE基因表达量呈相同趋势,D组达高峰,之后缓慢下降;D、E组表达量显著高于A、B、C组（P〈0.05）,D、E组间差异亦有统计学意义（P〈0.05）。Nestin基因表达量各组间差异无统计学意义（P〉0.05）。结论兔损伤坐骨神经匀浆上清液在体外能够有效诱导ADSCs分化为雪旺细胞和神经细胞,伤后早期（3～7 d）可作为细胞移植的最佳时间。
- 赵斌马信龙孙晓雷李秀兰张杨郭悦杨强
- 关键词：脂肪来源干细胞雪旺细胞诱导分化
- 柚皮苷对去势大鼠骨质疏松性骨折愈合的作用被引量：8
- 2015年
- 目的观察柚皮苷对去势大鼠骨质疏松骨折愈合的作用，探讨柚皮苷促进大鼠骨质疏松骨折愈合的机制。方法选择60只3个月龄雌性SD大鼠，行双侧卵巢切除，建立骨质疏松动物模型，2个月后制作右侧胫骨横行骨折。术后按随机数字表法分为对照组（20只）、柚皮苷组（20只）和雌激素组（20只）。柚皮苷组灌服柚皮苷100mg·kg-1·d-1；雌激素组灌服17—β雌二醇22．5μg·kg-1·d-1；对照组给予等体积的等渗盐水皮下注射。术后分别于2，8周处死动物，取出手术侧胫骨，行x线片进行评分；然后行双能x线吸收测定骨折部位骨密度（BMD）；采用Micro—CT对骨折部位进行定量分析，检测指标：骨体积（BV）、相对骨体积比（BV／TV）、平均骨小梁厚度（Tb．Th）；ELISA法测定血清骨钙素与大鼠I型胶原C端肽（CTX-1）；三点弯曲力学试验测定骨折最大载荷。结果术后2周对照组、柚皮苷组、雌激素组x线片评分分别为0．6±0．6，1．2±0．5，1．4±0．6，柚皮苷组、雌激素组均较对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）；术后8周对照组、柚皮苷组、雌激素组x线评分分别为2．6±0．6，3．6±0．6，3．6±0．6，柚皮苷组、雌激素组均较对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。术后2周对照组、柚皮苷组、雌激素组BMD值分别为（117．4±4．4）mg／cm2、（129．4±2．8）mg／cm2、（127．6±3．0）mg／cm2，柚皮苷组、雌激素组均较对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）；术后8周对照组、柚皮苷组、雌激素组BMD值分别为（119．0±3．8）mg/cm2、（132．0±5．8）mg／cm2、（133．8±3．2）mg,／cm2，柚皮苷组、雌激素组均较对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。Micro—CT扫描显示柚皮苷组和雌激素组骨折断端骨小梁数目及骨小梁连续性明显多于对照组。术后2周对照组、柚皮苷组、雌�
- 李风波孙晓雷马剑雄张杨赵斌李艳军韩哲马信龙
- 关键词：胫骨骨折骨质疏松柚皮苷
