贵州省科技攻关计划(2002-1075) 作品数:7 被引量:30 H指数:4 相关作者: 孙黔云 李敏 崔昊 王彩娥 叶巧玲 更多>> 相关机构: 中国科学院 贵州省人民医院 贵阳中医学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 贵州省科技攻关计划 贵州省优秀青年科技人才计划 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
眼镜蛇毒中一个弱纤维蛋白原水解活性金属蛋白酶的纯化和性质研究(英文) 被引量:9 2007年 通过蛋白层析从中华眼镜蛇毒中分离纯化出一个新的纤维蛋白原水解酶atrase A. Atrase A是一个分子量为64.6 kD,等电点为pH9.6和中性糖含量为4.16 %的碱性单链糖蛋白.它具有弱的纤维蛋白原α链水解活性.该活性能被金属螯合剂EDTA,EGTA,1 ,10-phenanthroline和还原剂DTT完全抑制,而PMSF只能部分抑制该活性,大豆胰蛋白酶抑制剂对其没有影响,表明atrase A属于金属蛋白酶.Atrase A具有水肿活性和金黄色葡萄球菌抑制活性.它对A549和K562细胞没有细胞毒性,但能使贴壁生长的A549细胞解离悬浮. Atrase A没有纤维蛋白、azocasein 、BAEE水解活性,对ADP、胶原诱导的血小板聚集没有明确的抑制作用.经小鼠皮下注射后没有发现其有出血毒活性. 孙黔云 李敏 杨付梅关键词:金属蛋白酶 蛇毒 中华眼镜蛇 眼镜蛇毒金属蛋白酶atrase A诱导人内皮细胞释放炎症介质及凋亡 被引量:4 2009年 目的研究眼镜蛇毒金属蛋白酶atrase A对人内皮细胞的作用。方法采用MTT法、SRB法、形态学观察分别检测atrase A对人微血管内皮细胞生长的影响;内皮细胞经at-rase A处理后,ELISA法检测内皮细胞释放IL-8、ICAM-1、MCP-1、E-selectin的变化,萤光发光法检测各组caspase-8、caspase-3/7的表达情况。经尾静脉给予大鼠atrase A后,检测大鼠血清中ICAM-1、IL-8、TNF-α的变化情况。结果At-rase A(400、40 mg.L-1)对内皮细胞的生长具有明显的抑制作用。而MTT法结果显示,atrase A对高接种密度的内皮细胞基本上没有影响;镜检结果显示,atrase A(400、40 mg.L-1)可使贴壁生长的内皮细胞解离悬浮。而4 mg.L-1的atrase A对内皮细胞的生长没有影响。高剂量atrase A(400mg.L-1)可诱导内皮细胞IL-8、ICAM-1、MCP-1释放增加,而低剂量atrase A(4 mg.L-1)对各炎症介质的表达没有影响。Atrase A还可诱导内皮细胞caspase-8、caspase-3/7的表达,12 h达峰值。经尾静脉分别给予2 240μg.kg-1和400μg.kg-1的atrase A后,高剂量组SD大鼠血清中ICAM-1、IL-8、TNF-α表达增加;而低剂量组中没有明显变化。结论眼镜蛇毒金属蛋白酶atrase A可抑制内皮细胞生长,诱导内皮细胞释放炎症介质和凋亡。 叶巧玲 孙黔云 李敏关键词:内皮细胞 炎症 凋亡 细胞粘附分子 眼镜蛇毒 刺梨多糖的抗补体活性研究 被引量:10 2009年 目的:研究刺梨多糖10种组分体外的抗补体活性。方法:采用补体溶血实验测定刺梨多糖10种组分对补体经典途径和替代途径的作用。结果:所测刺梨多糖的10种组分对补体经典途径均有抑制作用,同时有7种组分对补体替代途径也有抑制作用。结论:刺梨多糖组分具有抗补体活性,该工作为进一步认识和阐明刺梨多糖对免疫系统的作用和影响及刺梨多糖的相关开发应用提供了参考依据。 崔昊 孙黔云 杨娟眼镜蛇毒抗补体蛋白Atrase B对补体激活导致急性肺损伤的保护作用研究 被引量:3 2009年 目的:观察眼镜蛇毒抗补体蛋白Atrase B对补体激活导致急性肺损伤的保护作用。方法:样品组于造模前2h给予Atrase B,样品组与模型组舌下静脉给予眼镜蛇毒因子致肺损伤。50min后,各组取支气管肺泡灌洗液测定总细胞数、蛋白含量、TNF-α、ICAM-1、IL-8含量,比色法测定肺匀浆中性粒细胞髓过氧化物酶含量,取肺组织行病理切片检查。结果:Atrase B可明显降低损伤的肺组织中TNF-α、ICAM-1、MPO含量,减轻肺组织中炎症反应;对肺系数、肺含水量和支气管肺泡灌洗液蛋白含量的影响无统计学意义。结论:Atrase B可减少中性粒细胞在肺组织聚集,减轻补体激活导致急性肺损伤的症状。 叶巧玲 李敏 孙黔云关键词:眼镜蛇毒因子 急性肺损伤 抗补体 炎症 眼镜蛇毒金属蛋白酶atrase A抗血小板聚集作用及机制 被引量:3 2009年 目的研究中华眼镜蛇毒金属蛋白酶atrase A对血小板聚集的影响及其相关的机制。方法测定atrase A对二磷酸腺苷、胶原、血小板活化因子、花生四烯酸、瑞斯托霉素、凝血酶诱导血小板聚集的影响情况,并通过蛋白质免疫印迹检测atrase A对血小板膜糖蛋白和血管假血友病因子的酶切情况。结果中华眼镜蛇毒金属蛋白酶atrase A能明显抑制由瑞斯托霉素和凝血酶诱导的血小板聚集,这种抑制作用呈量效、时效关系。而atrase A和血小板预孵5min后对二磷酸腺苷、胶原、血小板活化因子、花生四烯酸诱导的血小板聚集有微弱的抑制作用,预孵时间延长至30min对血小板聚集有明显的抑制作用。蛋白质免疫印迹结果显示atrase A能特异性酶切血小板膜糖蛋白GPIb,但对vWF几乎没有酶切作用。结论中华眼镜蛇毒金属蛋白酶atrase A对二磷酸腺苷、胶原、血小板活化因子、花生四烯酸、瑞斯托霉素、凝血酶诱导的血小板聚集均有抑制作用,其中对瑞斯托霉素和凝血酶诱导的血小板聚集具有明显的抑制作用,其机制是通过酶切血小板膜糖蛋白GPIb。 王彩娥 孙黔云 李敏 石京山关键词:中华眼镜蛇毒 血小板聚集 血小板膜糖蛋白 瑞斯托霉素 蛇毒抗补体蛋白atrase B抑制补体活化引起的血小板聚集 被引量:4 2009年 目的观察眼镜蛇毒抗补体蛋白atrase B抑制补体活化引起的血小板聚集。方法采用眼镜蛇毒因子激活补体诱导血小板聚集,观察atrase B对补体活化引起人凝胶过滤血小板聚集的影响,并采用流式细胞仪测定血小板膜P-选择素和GPⅡb/Ⅲa表达情况。结果Atrase B能抑制补体激活引起的血小板聚集和P-选择素、GPⅡb/Ⅲa在血小板膜上的表达。结论眼镜蛇毒抗补体蛋白atrase B能有效抑制补体激活引起的血小板活化、聚集。 王彩娥 孙黔云 李敏 石京山关键词:补体活化 血小板活化 血小板聚集 眼镜蛇毒因子 蛇毒 P-选择素 烙铁头蛇毒的分离及部分生物活性研究 2008年 目的:对烙铁头蛇毒进行分离及部分生物活性的初筛,为发现新的功能蛋白奠定前期工作基础。方法:本文采用阴离子交换凝胶Q Sepharose Fast Flow和氯化钠直线梯度洗脱方法对国产烙铁头蛇(Trimeresurus mucrosquamatus)蛇毒进行柱层析分离,对分离峰进行抗补体活性、水肿活性、出血活性、流血时间、精氨酸酯酶活性和纤维蛋白原水解酶活性的测定。结果:获得6个蛋白峰;其中第1峰具有抗补体活性;1~6峰均有较强水解纤维蛋白原活性,同时都有精氨酸酯酶活性;1~6峰均有水肿活性,其中1、3峰活性较强;1~4峰有出血活性。结论:烙铁头蛇毒中具有抗补体、水解纤维蛋白原及抗凝等活性蛋白,该工作为从烙铁头蛇毒中分离纯化出新的生理活性蛋白奠定了基础。 崔昊 孙黔云关键词:抗补体活性 生物活性