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絮凝基因FLO1及FLO1c高表达提高工业酿酒酵母乙酸耐受性及发酵性能被引量：8: 2015年; 乙酸是生物质乙醇发酵过程中酵母细胞面临的重要抑制剂之一,对细胞生长及发酵性能有强烈的抑制作用。增强酵母菌对乙酸胁迫的耐受性对提高乙醇产率具有重要意义。用分别带有完整絮凝基因FLO1及其重复序列单元C发生缺失的衍生基因FLO1c的重组表达质粒分别转化非絮凝型工业酿酒酵母CE6,获得絮凝型重组酵母菌株6-AF1和6-AF1c。同时以空载体p YCPGA1转化CE6的菌株CE6-V为对照菌株。与CE6-V相比,絮凝酵母明显提高了对乙酸胁迫的耐受性。在0.6%(V/V)乙酸胁迫下,6-AF1和6-AF1c的乙醇产率分别为对照菌株CE6-V的1.56倍和1.62倍;在1.0%(V/V)乙酸胁迫下,6-AF1和6-AF1c的乙醇产率分别为对照菌株CE6-V的1.21倍和1.78倍。可见絮凝能力改造能明显提高工业酿酒酵母的乙酸胁迫耐受性及发酵性能,而且FLO1内重复序列单元C缺失具有更加明显的效果。; 杜昭励程艳飞朱卉何秀萍张博润; 关键词：发酵性能

适于二代燃料乙醇生产酿酒酵母的精准构制被引量：1: 2018年; 以木质纤维素为原料的二代燃料乙醇工业生产对发酵微生物的基本要求,一是可对木质纤维素组分中的全糖发酵,二是对预处理过程产生的毒性物质具有高耐受性。酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)是具有优良生产性能的传统乙醇发酵生产菌株,是适合包括二代燃料乙醇等生物基化合物转化的理想底盘细胞。近30年来,利用理性代谢工程改造、非理性适应性进化以及新兴起的合成生物学等策略,对酿酒酵母进行精准构制,极大地提高了其二代燃料乙醇生产的产业化性能。综述了适于二代燃料乙醇生产酿酒酵母精准构制过程中的己糖和戊糖代谢途径工程、辅酶工程、糖转运蛋白、抗性元件发掘以及产业化推进等方面的研究进展。; 赵建志李洪兴王心凝沈煜侯进鲍晓明; 关键词：木质纤维素耐受性

一个酿酒酵母呼吸突变株在高糖胁迫下的生理特性研究被引量：3: 2013年; MF11a为甘蔗糖蜜乙醇发酵野生型高产菌株MF1002的呼吸突变体,对糖分的利用能力显著高于MF1002。本文研究了这两菌株应激高糖胁迫的生理特性变化。结果表明,高糖培养条件下,MF11a菌株的生长和乙醇发酵受抑制的程度均明显低于MF1002,培养基的葡萄糖浓度为30%和40%时,其最大菌体密度、最高出芽率和乙醇浓度等已显著高于MF1002,表明MF11a较MF1002具有更强的高糖耐受能力。在30%葡萄糖的胁迫培养条件下,两菌株胞内的总超氧化物歧化酶(SOD)活力、过氧化氢酶活力、过氧化物酶活力,及它们细胞质和线粒体的ATP酶活力均显著上升,说明这五种酶均参与了两菌株的高糖胁迫反应。其中,MF11a的胞内过氧化氢酶活性、过氧化物酶活力、细胞质ATP酶活力在高糖胁迫下的上升幅度显著高于MF1002,表明这三种酶活力可能与MF11a菌株的高糖耐受能力有关,可作为该菌株进一步改造的指导指标。; 张穗生陈东熊雅兰陆琦黄日波; 关键词：酿酒酵母生理特性

酿酒酵母α-半乳糖苷酶基因重组菌株的表达分析被引量：3: 2013年; PCR扩增里氏木霉(Trichoderma reesei)2个α-半乳糖苷酶基因agl2和agl3,将其分别与表达载体pY-ES2连接,电转化酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)INVSc1菌株。从重组菌株提取载体进行单酶切凝胶电泳检测,证实agl2和agl3分别在重组菌株AGL2和AGL3表达。以葡萄糖和棉子糖为碳源培养菌株,2株重组菌的生长速率均显著高于原始菌株,提前8h菌数达到最大,其中以AGL3的生长速率提高较为明显,重组还使菌株在液体培养基由原来的部分絮凝转变为完全游离状。2株重组菌株均不能利用蜜二糖为碳源生长。; 陈英陈东陆琦芦志龙黄日波; 关键词：细胞生长细胞形态

基于TTC染色法的高活力酵母细胞定量筛选被引量：6: 2014年; 在2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法及96孔板基础上建立高活力与高产乙醇酵母细胞的同步定量筛选方法。选用体积分数为85%二甲基亚砜作为TTF提取剂,培养液(pH8.0)中TTC添加浓度为0.4%,以96孔板在0%、10%、14%的乙醇浓度下培养27株备选酵母菌株,通过酶标仪测定波长486 nm下TTF吸收值。结果显示TTF吸收值越高,酵母活性越高,并且通过比较酵母活性与其乙醇产量,得出两者在一定程度上呈正相关,即高活性酵母其乙醇产量也较高。共筛得6株具有较高细胞活性的菌株。此方法为高活性、高产乙醇酵母及其他微生物及植物细胞的活性的快速、大量检测提供了一条新途径。; 徐俊雍晓雨费文斌周俊王舒雅陈怡露郑涛; 关键词：TTC

碱性纤维素酶产生菌株的筛选及其酶学性质研究被引量：5: 2014年; 【目的】从堆肥中筛选和鉴定产碱性纤维素酶的菌株，对菌株及其酶学特性进行研究。【方法】以刚果红平板染色法进行初筛，摇瓶发酵复筛，分离到高酶活菌株C73。通过形态观察和16SrRNA序列分析对菌株进行鉴定。采用DNS定糖法测定发酵液酶活最适pH值、pH值稳定性、最适温度、热稳定性及常见金属离子、SDS、EDTA等对酶活的影响。[结果]该菌株形态呈杆状，革兰氏阳性，不产芽孢，适宜在pH值8．0～11．0、30～37℃条件下生长。16SrRNA序列比对发现，该菌株与琼斯氏菌（Jonesiasp．）PCI序列相似度大于99％，初步鉴定为琼斯氏菌属菌株。在发酵培养基中，菌体浓度和CMCase活力分别在40h和50h达到最大值，随着发酵时间的延长发酵液pH值稳定在9．5左右。粗酶液的最适作用pH值为10．0，此时CMCase活力达2．3U／mL。在pH值8．0～11．0的范围内保持60％以上的酶活；最适作用温度为60℃，且在30-80℃的范围内保持60％以上的酶活。金属离子Mn^2＋、Co^2＋和（NH4）2SO4对酶活力有较强的抑制作用。【结论】菌株C73呈现较高的碱性CMCase酶活、较高的热稳定性和pH值稳定性，具有良好的工业应用前景。; 陈雅娟董园芦志龙陈东黄日波; 关键词：纤维素酶酶学性质

1株耐热产乙醇酵母的分离、鉴定与性能测试被引量：4: 2015年; 以江苏省灌南县汤沟酿酒厂的大曲、窖泥及发酵酒醅为样品,经富集、分离得到18株初筛酵母菌株,从中经复筛分离出1株能在42℃下发酵产乙醇的酵母菌,命名为NR11。经过形态观察、BIOLOG微生物检定系统以及18S rDNA基因的分析,将该酵母菌鉴定为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)。对其特性及发酵性能的研究结果显示,NR11可以在12%乙醇溶液及55%糖溶液下正常发酵,致死温度可达60℃,在30、38、40、42℃条件下,乙醇产量分别可以达到109.0、93.2、73.8、44.0 g/L。; 费文斌雍晓雨徐俊周俊王舒雅陈怡露郑涛; 关键词：酿酒酵母菌株鉴定耐热性乙醇

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国家高技术研究发展计划(2012AA022106)