中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(2013JB08)
- 作品数：3 被引量：9H指数：2
- 相关作者：马志永李蓓蓓魏建超史子学邵东华更多>>
- 相关机构：中国农业科学院上海兽医研究所上海农林职业技术学院河北工程大学更多>>
- 发文基金：国际科技合作与交流专项项目中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 展示日本乙型脑炎病毒B细胞表位和T细胞表位的猪细小病毒病毒样颗粒的制备被引量：6
- 2013年
- 为增强日本乙型脑炎病毒表位疫苗的免疫原性,提高其免疫效果,将日本乙型脑炎病毒(JEV)E蛋白中编码的B细胞表位(150～156aa,307～316aa,327～333aa,386～399aa)及T细胞表位(60～68aa,436～445aa)序列连接于猪细小病毒(PPV)VP2的5′端,并插入到原核表达质粒pCold-Ⅰ中,构建成重组质粒pMEP-VP2,转化大肠杆菌BL21(DE3),使重组蛋白MEP-VP2得到表达。Western-blot分析表明,表达产物能被抗JEV多抗和抗PPV多抗识别。电镜观察显示,表达的重组蛋白MEP-VP2能够在体外自我组装成病毒样颗粒PPV-VLP(JEV)。结果表明,N端连接JEV的多表位肽的猪细小病毒的VP2蛋白能体外组装成有活性的病毒样颗粒。
- 蒋春英魏建超史子学钟登科邵东华李蓓蓓马志永
- 关键词：日本乙型脑炎病毒猪细小病毒病毒样颗粒
- 日本脑炎病毒弱毒疫苗株全长cDNA的体外合成及恢复病毒的拯救被引量：1
- 2014年
- 将病毒的全基因组分成3个重叠的区段分别扩增出来,把这3个片段连接到载体中。以这3个片段为模板,通过融合PCR方法,获得JEV的全长cDNA。以cDNA为体外转录的模板,体外转录获得病毒mRNA,转染BHK-21细胞,拯救JEV病毒。通过生物学特性、分子生物学、蛋白水平等几个方面对恢复病毒进行鉴定,并测定恢复病毒的生长曲线和LD50。结果显示,获得了全长cDNA,体外转录获得的病毒RNA转染BHK-21细胞后,二代恢复病毒可引起明显的细胞病变,间接免疫荧光试验和RT-PCR均为阳性。空斑试验表明,拯救病毒与原病毒空斑表型类似;恢复病毒与亲本毒相比在BHK-21细胞上生长更快;恢复病毒的LD50与亲本毒类似。
- 蒋春英魏建超钟登科朱紫祥武专昌史子学邵东华李蓓蓓马志永
- 关键词：日本脑炎病毒全长CDNA体外转录
- 犬表皮细胞生长因子的原核表达和纯化及其活性鉴定被引量：2
- 2013年
- 为获得有生物活性的犬表皮生长因子(cEGF),设计了4条引物,用SOE-PCR合成cEGF基因,将cEGF基因克隆至表达载体pET-24a,构建融合表达质粒,转化至E.coli BL21,IPTG诱导表达,对表达得到的重组蛋白进行纯化,MTT法测定重组蛋白的生物活性。结果显示,SOE-PCR合成得到的cEGF基因大小为156bp,编码52个氨基酸。大部分表达为包涵体,通过变性、纯化、复性的过程,每1L菌液得到重组犬rcEGF 16.1mg,经MTT法检测,rcEGF具有生物活性。结果表明,获得了具有生物活性的rcEGF。
- 王雪敏杨传定魏建超史子学邵东华王少辉李蓓蓓姚建楠马志永
- 关键词：原核表达纯化复性
