国家公益性行业科研专项(200802012)
- 作品数：7 被引量：29H指数：3
- 相关作者：曹建平沈玉娟袁忠英陈盛霞卢潍媛更多>>
- 相关机构：中国疾病预防控制中心江苏大学遵义医学院更多>>
- 发文基金：国家公益性行业科研专项国家科技重大专项艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 隐孢子虫感染模型及体外培养研究进展
- 2010年
- 隐孢子虫是一种重要的人兽共患寄生原虫,能引起婴幼儿和免疫低下人群及动物以胃肠道腹泻为主的严重消化道疾病。隐孢子虫动物感染模型和体外培养体系的建立,为隐孢子虫的生长发育过程、免疫学、疫苗研究、药物筛选和疗效考核以及卵囊灭活技术提供了良好的基础。本文就近年来隐孢子虫的动物感染模型和体外培养体系的发展及其应用情况作一综述。
- 尹建海沈玉娟曹建平
- 关键词：隐孢子虫动物模型体外培养
- 我国隐孢子虫病的现状和防治对策被引量：3
- 2009年
- 隐孢子虫病是全球六大腹泻病之一，属新发传染病，是艾滋病患者死亡的主要病因之一。隐孢子虫卵囊污染水源、食物造成隐孢子虫病暴发，引起的腹泻在寄生虫性腹泻中占首位或次位，已成为重要的公共卫生问题。该病目前尚无特效治疗药物和预防疫苗，在我国各地普遍流行。该文就我国隐孢子虫病的现状和防治对策作一综述。
- 沈玉娟陈勤曹建平
- 关键词：隐孢子虫病
- 环介导等温扩增技术检测牛源隐孢子虫的研究被引量：12
- 2009年
- 目的用环介导等温扩增技术检测牛源隐孢子虫。方法提取牛粪中隐孢子虫卵囊DNA。根据隐孢子虫18S rRNA序列及环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification，LAMP）技术的原理，设计4条隐孢子虫特异引物，利用LAMP检测牛粪中隐孢子虫卵囊DNA和蓝氏贾第鞭毛虫DNA，以正常牛粪DNA为阴性对照。LAMP产物经SYBR Green I显色及电泳后观察结果，绿色判为阳性，棕色判为阴性，对LAMP产物进行电泳分析，观察其特征条带的情况。结果隐孢子虫卵囊DNA检测管经显色后呈绿色，阴性对照及蓝氏贾第鞭毛虫DNA呈棕色。隐孢子虫LAMP产物经电泳后呈LAMP特征性梯状条带，阴性对照及蓝氏贾第鞭毛虫DNA无扩增产物。结论LAMP方法敏感、特异、简便，可用于检测牛粪中的隐孢子虫。
- 袁忠英沈玉娟曹建平周何军卢潍媛陈勤倪奕昌汤林华
- 关键词：RRNA
- 采用实时PCR技术比较不同方法提纯隐孢子虫卵囊DNA效果被引量：2
- 2009年
- 目的比较不同方法提纯隐孢子虫卵囊DNA的效果。方法将分离纯化的隐孢子虫卵囊分别加入美国Promega公司(简称Promega)和上海捷瑞公司(简称捷瑞)基因组DNA纯化试剂盒的裂解液、2%TritonX-100和5%异硫氰酸胍,同时联合使用冻融法、蛋白酶K法和声裂法裂解卵囊,用试剂盒法或Chelex-100法提纯卵囊基因组DNA,用实时PCR测定隐孢子虫卵囊囊壁蛋白(COWP)基因拷贝数,以Promega试剂盒为参照比较不同纯化方法的提纯效果。结果Promega试剂盒的裂解液裂解隐孢子虫卵囊的效果最好,纯化所得卵囊COWP基因拷贝数可达(6.45～9.86)×106;其他依次为捷瑞试剂盒的裂解液[(2.38～3.69)×106]、5%异硫氰酸胍[(1.27～21.29)×105]和2%TritonX-100[(2.06～866.70)×103]。冻融法+蛋白酶K法+声裂法提纯隐孢子虫卵囊DNA效果最佳,其次为冻融法+声裂法和蛋白酶K法+声裂法,冻融法+蛋白酶K法效果最差。结论冻融法+蛋白酶K法+声裂法联合使用能使卵囊DNA的提纯效率达到最大,捷瑞基因组DNA纯化试剂盒和5%异硫氰酸胍裂解法提纯隐孢子虫卵囊DNA可获得与Promega试剂盒相近的效果。
- 陈盛霞吴亮沈玉娟章秋霞李婷婷姜旭淦徐馀信曹建平
- 关键词：隐孢子虫卵囊实时PCRDNA提纯
- 牛源隐孢子虫上海分离株的巢式PCR鉴定被引量：5
- 2009年
- 目的用巢式PCR鉴定1株自然感染的上海牛源隐孢子虫。方法改良抗酸染色法检查含隐孢子虫卵囊的牛粪,油镜下观察卵囊形态,测量大小。以牛粪中的隐孢子虫卵囊DNA为模板,根据隐孢子虫18SrRNA序列设计2对引物,巢式PCR扩增目的片段,测序,同源性比对,并运用MEGA4.0软件构建系统发育树。结果上海牛源隐孢子虫分离株卵囊呈圆形或椭圆形,大小为(5.6±0.49)mm×(5.2±0.51)mm。扩增出的18SrRNA基因片段为812bp。上海牛源隐孢子虫分离株的18SrRNA与巴西的牛隐孢子虫(Cryptospridium bovis,GenBank登录号为151935628)序列一致性为100%,两者在种系发育树上为同一分支,亲缘关系最近;与中国青海、蒙古国、美国、突尼斯等地的牛隐孢子虫序列一致性均为99%。结论上海牛源隐孢子虫分离株为牛隐孢子虫(C.bovis)。
- 袁忠英沈玉娟曹建平刘晖陈盛霞
- 关键词：RRNA基因巢式PCR系统发育分析
- 安氏隐孢子虫在HCT-8和AGS细胞中增殖效果的研究被引量：1
- 2011年
- 目的比较安氏隐孢子虫(Cryptosporidium andersoni)在人结肠腺癌(human ileocecal adenocarcinoma,HCT-8)细胞和人胃腺癌(human stomach adenocarcinoma,AGS)细胞中的增殖。方法取培养至对数生长期的HCT-8细胞和AGS细胞,接种于6孔培养板中,待细胞生长融合至60%～70%时,加入2.5×105个安氏隐孢子虫卵囊,培养至24 h和48 h,以Giemsa染色法和Real-time PCR技术检测虫体在细胞中的增殖。结果 Giemsa染色法观察24 h和48 h HCT-8细胞中虫体数量均高于AGS细胞(P<0.05)。Real-time PCR技术测得24 h和48 h HCT-8细胞中安氏隐孢子虫卵囊COWP基因拷贝数均高于AGS细胞(P<0.05)。结论与AGS细胞相比,以HCT-8细胞作为体外感染模型更利于安氏隐孢子虫的增殖。
- 逯兆喜吴亮姜旭淦沈玉娟傅行礼涂国华李礼陈盛霞曹建平
- 关键词：安氏隐孢子虫HCT-8细胞AGS细胞GIEMSA染色
- 环介导等温扩增技术检测蓝氏贾第鞭毛虫被引量：13
- 2010年
- 目的 建立应用环介导等温扩增技术（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）检测蓝氏贾第鞭毛虫的方法. 方法 体外培养蓝氏贾第鞭毛虫滋养体,提取DNA.根据GenBank显示的贾第虫序列及环介导等温扩增技术的原理,设计4条贾第虫特异引物,利用LAMP检测蓝氏贾第鞭毛虫DNA,以隐孢子虫卵囊DNA、疟原虫DNA为对照,并将不含病原体DNA的纯水作为阴性对照.LAMP产物经SYBR green I显色后观察结果,绿色为阳性,棕色为阴性;对LAMP产物进行琼脂糖凝胶电泳分析,观察其特征条带的情况. 结果 蓝氏贾第鞭毛虫DNA检测管经显色后呈绿色,隐孢子虫卵囊DNA、疟原虫DNA及水阴性对照管呈棕色.含有蓝氏贾第鞭毛虫DNA的LAMP产物经电泳后呈LAMP特征性梯状条带,安氏隐孢子虫DNA、恶性疟原虫DNA及阴性对照水无扩增产物. 结论 成功建立了检测蓝氏贾第鞭毛虫的LAMP方法.
- 卢潍媛袁忠英沈玉娟尹建海曹建平
- 关键词：蓝氏贾第鞭毛虫安氏隐孢子虫
