黑龙江省教育厅振兴老工业基地项目(115129d11)
- 作品数：3 被引量：11H指数：2
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- 相关机构：哈尔滨医科大学更多>>
- 发文基金：黑龙江省教育厅振兴老工业基地项目国家高技术研究发展计划更多>>
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- 三种抗人细胞色素P450酶合成肽抗体的制备及应用研究
- 2007年
- 目的制备兔抗人细胞色素P450酶1A2、3A4及4A11的特异性抗体,对其在药物代谢方面的应用进行研究。方法①利用生物信息学方法分析CYP1A2、CYP3A4及CYP4A11蛋白的序列,利用DNAstar软件中蛋白质的亲水性结构、柔韧区、抗原指数及表面概率结构指标选择多肽序列,应用Blast软件对所选序列进行同源性分析并合成多肽,与载体蛋白钥孔戚血蓝素(KLH)偶联,免疫大耳白兔制备抗CYP1A2、3A4及4A11抗体。抗体纯化后经酶联免疫吸附(ELISA)、免疫印迹(Western blot)鉴定其特异性;②通过制备大鼠给药模型利用Western blot评价上述抗体在药物代谢酶分析方面的作用。结果获得抗CYP1A2、CYP3A4及CYP4A11合成肽的抗体。Western blot结果显示,三种抗体均可与其合成肽及天然CYP1A2、CYP3A4及CYP4A11蛋白出现特异性反应,识别的相应抗原的相对分子质量(Mr)分别为63 000、59 000及53 000。同时,Western blot结果显示,所制备的抗体能识别药物诱导后大鼠天然CYP1A2、CYP3A4及CYP4A11。结论合成的多肽-KLH复合物具有免疫原性,可用于制备相应的抗体。制备的抗体特异性良好,可应用于药物代谢酶方面的研究。
- 杨微刘海英朱大岭徐东花唐晓波
- 关键词：合成肽多克隆抗体药物代谢
- 细胞色素P450 3A4抗原表位的分析及其抗体的制备与鉴定被引量：8
- 2007年
- 目的：制备兔抗人细胞色素P450 3A4（CYP3A4）抗体及其特性鉴定。方法：利用生物信息学方法分析CYP3A4蛋白的序列,根据亲水性、抗原性、柔韧性及表面性等指标选择多肽序列,合成CYP3A4多肽,与载体蛋白钥孔戚血蓝素（KLH）偶联,免疫日本大耳白兔制备抗CYP3A4抗体。辛酸-硫酸铵法纯化抗体,间接ELISA测定抗体的效价及相对亲和力常数,Western blot鉴定其特异性,免疫组化进行定位。结果：获得针对小分子CYP3A4的抗体。该抗体效价为1∶16000;相对亲和力常数在10^5～10^6M^-1,具有实用价值;可与CYP3A4合成肽及天然CYP3A4出现特异性反应;可识别正常人肝脏组织CYP3A4;Western blot的结果显示,该抗体识别的相应抗原的相对分子质量（Mr）为46000。结论：合成的多肽-KLH复合物具有免疫原性,可用于制备相应的抗体。制备的兔抗CYP3A4合成肽抗体可应用于ELISA、Western blot和免疫组化实验。
- 刘海英杨微武正华唐晓波朱大岭
- 关键词：CYP3A4合成肽多克隆抗体
- 兔抗人细胞色素P4504A11合成肽抗体的制备与鉴定被引量：3
- 2007年
- 目的制备兔抗人细胞色素P4504A11(CYP4A11)抗体,并对其特性进行初步鉴定。方法利用生物信息学方法分析CYP4A11蛋白的序列,根据亲水性结构、柔韧区、抗原指数及表面概率结构等指标选择多肽序列、合成CYP4A11多肽,与载体蛋白钥孔戚血蓝素(KLH)偶联,免疫大耳白兔制备抗CYP4A11抗体。辛酸-硫酸铵法纯化抗体,对纯化的抗体进行ELISA、Westernblot、免疫组化等鉴定。结果获得抗CYP4A11合成肽的抗体。该抗体效价为1∶32000。可与CYP4A11合成肽及天然CYP4A11出现特异性反应,该抗体识别的相应抗原的相对分子质量(Mr)为53000,可识别正常肝脏的CYP4A11。结论合成的多肽-KLH复合物具有免疫原性,可用于制备相应的抗体。制备的兔抗CYP4A11合成肽抗体可应用于ELISA、Westernblot、免疫组化等实验。
- 杨微刘海英武正华唐晓波朱大岭
- 关键词：合成肽多克隆抗体
