国家高技术研究发展计划(2012AA022209D)
- 作品数：9 被引量：41H指数：4
- 相关作者：刘正初成莉凤段盛文郑科冯湘沅更多>>
- 相关机构：中国农业科学院麻类研究所湖南利尔康生物股份有限公司湖南农业大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家麻类产业技术体系建设项目国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学轻工技术与工程环境科学与工程更多>>
- 一种耐热偏酸性β-甘露聚糖酶基因克隆与高效表达被引量：7
- 2015年
- 【目的】克隆半纤维素降解高效菌株Bacillus subtilis BE-91的甘露聚糖酶基因并进行原核表达,对表达产物进行酶学性质研究。【方法】采用PCR扩增法从B.subtilis BE-91菌株中克隆β-甘露聚糖酶基因,分别连接到p EASY-E1和p ET28a载体,导入Escherichia coli BL21(DE3)进行诱导表达。用DNS法对工程菌株的胞内和胞外β-甘露聚糖酶进行定量分析,选取胞外甘露聚糖酶活力高的组分进行酶学性质研究。【结果】从B.subtilis BE-91菌株中克隆的β-甘露聚糖酶基因(Gen Bank登录号:KP277209)在E.coli中获得高效表达,工程菌株p EASY-man/BL产胞外β-甘露聚糖酶的活性可达229.1 IU/m L;该基因序列全长960 bp,包含319个氨基酸的编码序列和一个终止密码子;表达产物的最适反应温度为65°C,最适反应p H为6.0,属于耐热偏酸性β-甘露聚糖酶;该酶稳定温度≤65°C,稳定p H为4.5-7.0;1 mmol/L的Cu2+、Mn2+、Zn2+、Ca2+对该酶有激活作用,而Ba2+和Pb2+有强烈抑制作用。【结论】B.subtilis BE-91拥有珍贵的β-甘露聚糖酶基因资源,其胞外表达产物的耐热偏酸性酶学性质在开发饲料添加剂方面具有潜在的应用前景。
- 成莉凤冯湘沅段盛文郑科刘正初
- 关键词：枯草芽孢杆菌Β-甘露聚糖酶基因克隆原核表达酶学性质
- Bacillus subtilis BE-91生长及其胞外表达β-甘露聚糖酶的发酵条件优化被引量：8
- 2015年
- 【目的】优化枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BE-91生长及其胞外表达β-甘露聚糖酶的发酵条件。【方法】对影响菌株生长和发酵的主要因素(C源、N源、起始p H、温度等)进行单因素试验后,采用正交试验法研究B.subtilis BE-91生长培养条件和摇瓶发酵条件的优化组合。【结果】优化生长条件为:0.3%牛肉膏、0.2%酵母膏、0.1%葡萄糖、0.4%魔芋精粉、0.5%Na Cl,初始p H6.0、培养温度35°C;胞外表达β-甘露聚糖酶活力的摇瓶发酵条件优化组合为:0.7%魔芋精粉、0.4%大豆蛋白胨、0.1%(NH4)2SO4、0.5%Na Cl,发酵温度35°C和起始p H 6.0;优化条件下发酵10 h,β-甘露聚糖酶活力最高达432.4 IU/m L,比国内外已有相关菌株报道的发酵时间缩短了14-86 h,最高酶活力提高了5倍以上。【结论】B.subtilis BE-91生长与发酵周期短、胞外表达β-甘露聚糖酶的活力高,是酶制剂产业具有重大开发价值的菌种资源。
- 成莉凤戴小阳冯湘沅段盛文郑科刘正初
- 关键词：BACILLUSSUBTILISΒ-甘露聚糖酶发酵条件
- 麻类脱胶高效菌株DCE01的Pel325基因克隆与表达被引量：1
- 2015年
- 采用软件Primer premier 5设计引物,从麻类脱胶高效菌株DCE01中克隆出一个果胶酶基因Pel325,重组到表达载体p ET-28a中,在E.coli BL21(DE3)中成功表达。试验结果显示,酶的活性随着底物(橘子果胶)酯化程度的增加而增加。胞内酶用酯化程度≥85%的橘子果胶作底物检测时酶活最高(酶活为37.5U/ml),其最适反应温度为55℃,最适反应p H为8.0。该结果可为进一步发掘DCE01菌株的基因资源提供重要科学依据。
- 李琦成莉凤曾洁李国高刘正初
- 关键词：果胶酶克隆
- 麻类脱胶高效菌株DCE01的Pel4I8基因克隆与表达被引量：1
- 2015年
- 从麻类脱胶高效菌株DCE01中克隆出一个果胶酶基因Pel4I8,采用表达载体p ET-28a,在E.coli BL21(DE3)中成功表达。实验结果表明,底物(橘子果胶)的酯化度对酶活有较大影响,用酯化程度在55%-70%的橘子果胶作底物时酶活最高(酶活为17.5U/ml);胞内酶最适反应温度为55℃,最适反应p H为9.5。该结果可为深入发掘DCE01菌株的基因资源提供重要科学依据。
- 李琦成莉凤曾洁刘朝阳刘正初
- 关键词：基因克隆果胶酶
- 新型β-甘露聚糖酶制备葡甘寡糖工艺优化被引量：8
- 2016年
- 为探索能应用于葡甘寡糖制备的新型β-甘露聚糖酶,利用半纤维素降解高效菌株Bacillus subtilis BE-91高产的β-甘露聚糖酶水解魔芋胶(纯度>95%)。在单因素试验的基础上,采用四因素三水平的正交试验优化魔芋胶酶解工艺条件,薄层层析法定性分析酶解产物。结果表明:正交试验的最佳酶解工艺组合为魔芋胶质量浓度0.33 g/100 m L、加酶量6 U/g、酶解时间1 h、酶解温度60℃,在该条件下魔芋胶水解率为35.96%;β-甘露聚糖酶水解魔芋胶产物为二糖以上的寡糖,且主要介于二糖与六糖之间。该新型β-甘露聚糖酶用于葡甘寡糖制备,其工艺具有加酶量少、酶解时间短、产品纯度高等优势,在功能性食品制备方面具有广阔的应用前景。
- 成莉凤冯湘沅段盛文郑科刘正初
- 关键词：BACILLUSSUBTILISΒ-甘露聚糖酶魔芋胶
- 来源于欧文氏杆菌CXJZ95-198的β-甘露聚糖酶基因高效表达体系构建被引量：3
- 2015年
- 旨在构建β-甘露聚糖酶基因的高效表达体系。从原基因工程菌株slp-man-p ET28a/JM提取重组质粒slp-man-p ET28a,转化Escherichia coli BL21(DE3)。用水解圈大小,β-甘露聚糖酶活力高低和天然半纤维素底物降解能力等综合指标衡量新基因工程菌株的β-甘露聚糖酶表达效果。新基因工程菌株slp-man-p ET28a/BL在选择平板上能产生明显的水解圈,其分泌的β-甘露聚糖酶活性最高达645.5 U/m L,是原基因工程菌株slp-man-p ET28a/JM分泌的1.28倍,是出发菌株Erwinia carotovora CXJZ95-198分泌的1.97倍;新基因工程菌株在苎麻原料发酵液的COD净增加值达5.13 g/L左右,分别为原基因工程菌株和出发菌株净增值的1.5、1.2倍;其还原糖生成量为0.721 mg/m L,比原基因工程菌株和出发菌株分别提高了26.7%和10.1%。新基因工程菌株的β-甘露聚糖酶分泌量大幅度提高,可为麻类生物脱胶β-甘露聚糖酶制剂制备提供科学依据。
- 成莉凤冯湘沅段盛文郑科刘正初
- 关键词：Β-甘露聚糖酶启动子
- 从富集液中发掘麻类脱胶果胶酶基因的技术被引量：2
- 2014年
- 为了突破传统可培养技术筛选麻类脱胶用果胶酶基因的不足,通过设计不同总DNA提取方法、样品富集方法以及优化PCR反应体系,建立起了一套适合于直接从富集液中发掘麻类脱胶用果胶酶基因的技术。结果表明,震荡培养脱胶时间比静止培养脱胶时间缩短51.5%;通过PowerSoilTMDNA Isolation Kit从第4次富集后的震荡发酵中能提取适合的总DNA;PCR最优反应体系为:总体积为25 ml,Mg2+浓度为2.0 mmol/L,dNTPs浓度为0.2 ng/μl,引物浓度为0.6μmol/L,DNA模板取2.5 ng/μl,Taq聚合酶量为0.8 U。获得的基因序列与已报道的果胶酶基因FJ538208序列高度相似,应用该技术成功地从麻类脱胶富集液中克隆到了果胶酶基因。
- 段盛文刘正初郑科冯湘沅成莉凤郑霞
- Sphingobacterium bambusaue及其紫外诱变菌株的石油降解功能被引量：10
- 2013年
- 【目的】研究Sphingobacterium bambusaue及其紫外诱变菌株的石油降解功能。【方法】紫外诱变后筛选石油降解高效菌株;以不同石油浓度、pH值及盐浓度优化培养条件,用重量法检测高效菌株石油降解率。【结果】发现菌株S.bambusaue在石油降解培养基中培养5 d的石油降解率为25.86%,UV诱变高效菌株IBFC2009-S3培养5 d的石油降解为42.85%,比始发菌株提高65.7%;UV诱变菌株IBFC2009-S3的优化培养条件为石油浓度0.5 g/L、pH值7.0以及NaCl质量浓度为10 g/L,其石油降解率可达50.51%。【结论】首次报道S.bambusaue具有石油降解功能;紫外诱变获得的菌株S3的石油降解能力较强。
- 段盛文刘正初郑科冯湘沅成莉凤郑霞
- 关键词：石油降解
- 生物制剂在草本纤维质农产品加工业中的应用进展被引量：2
- 2013年
- 为了阐明生物制剂在草本纤维质农产品加工业中应用的研究范围与进展,采用系统信息学技术原理,围绕生物制剂在脱胶、纺织、造纸、轻工制造等学科领域中应用的主线,对近40年的相关研究报道进行分类整理与凝练。分析结果表明,在草本纤维原料脱胶及其类似初级加工过程中应用菌制剂具有节能、减排、降耗、高效利用资源等优点;在草本纤维纺织、造纸、轻工制造等深加工领域里应用酶制剂可以充分发挥酶的专一性、高效性作用,说明生物制剂在草本纤维质农产品加工业中应用的前景十分广阔。
- 刘正初
- 关键词：生物制剂农产品加工业
