湖北省卫生厅科研基金(NX200501)
- 作品数：7 被引量：11H指数：2
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- 新构建的含DF3启动子和白喉毒素A片段的重组表达载体对人乳腺癌细胞的特异性杀伤作用
- 2006年
- 目的研究新构建的含人乳腺癌DF3启动子和白喉毒素A片段的重组表达载体PGL3-DF3-DTA对人乳腺癌细胞的影响。方法构建重组表达载体PGL3-DF3-DTA,并用其转染DF3阳性和阴性的乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231。通过MTT法测定PGL3-DF3-DTA在体外对乳腺癌细胞生长的影响,建立裸鼠动物模型观察PGL3-DF3-DTA在体内对乳腺癌细胞的杀伤效应。结果成功构建出重组表达载体PGL3-DF3-DTA并建立了人乳腺癌裸鼠动物模型,经重组表达载体PGL3-DF3-DTA作用后的DF3阳性人乳腺癌细胞出现明显的凋亡现象,Ki-67、bcl-2基因表达水平降低,bax基因表达水平升高。结论重组表达载体PGL3-DF3-DTA能对DF3阳性的乳腺癌细胞产生特异性杀伤作用。
- 蔡明黄文广罗威潘晟殷涛
- 关键词：基因表达基因治疗人乳腺癌
- DF3调控下的白喉毒素A片段在体内特异性杀伤人乳腺癌细胞的研究被引量：2
- 2007年
- 目的研究新构建的含人乳腺癌DF3启动子和白喉毒素A片段的重组表达载体PGL3-DF3-DTA在体内对人乳腺癌细胞的特异性杀伤作用。方法4周龄裸鼠36只,随机分为实验组、空载体组、空白对照组、阴性对照组4组,每组9只。将DF3阳性和阴性的人乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231分别接种于相应的裸鼠皮下。待成瘤后,将重组表达载体PGL3-DF3-DTA和PGL3-DF3多次、多位点注射入相应裸鼠移植瘤内。连续测量瘤体大小,计算瘤体重量。在不同时间分批处死动物,用光镜进行形态学观察、用TUNEL法检测肿瘤细胞的凋亡、用免疫组化技术检测肿瘤内淋巴管和血管的生成情况。结果成功的建立了人乳腺癌裸鼠动物模型,经重组表达载体PGL3-DF3-DTA作用后的DF3阳性人乳腺癌细胞出现明显的凋亡现象,LYVE-1、F8基因表达水平降低。结论重组表达载体PGL3-DF3-DTA能在体内对DF3阳性的乳腺癌细胞产生特异性杀伤作用。
- 蔡明黄文广潘晟
- 关键词：基因表达基因治疗乳腺癌
- 重组质粒PGL3-DF3-DTA对乳腺癌荷瘤裸鼠的治疗研究被引量：2
- 2006年
- 目的探讨重组质粒PGL3-DF3-DTA对乳腺癌移植模型的治疗作用。方法裸鼠皮下接种MCF-7人乳腺癌细胞,建立人乳腺癌移植模型。用质粒PGL3-DF3-DTA,质粒PGL3-DF3和生理盐水分别给裸鼠移植瘤瘤内多点注射。观察肿瘤大小和组织形态学变化,并用流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡改变。结果重组质粒PGL3-DF3-DTA组裸鼠乳腺癌生长受到明显抑制,抑制率为50.08%,肿瘤细胞的凋亡率增加。结论重组质粒PGL3-DF3-DTA对裸鼠人乳腺癌移植瘤的生长具有明显抑制作用,为乳腺癌基因治疗提供了新的方法。
- 潘晟黄文广
- 关键词：重组质粒乳腺癌裸鼠
- 靶向DF3的白喉毒素A链基因对乳腺癌细胞的杀伤作用被引量：4
- 2007年
- 目的探讨白喉毒素A链（DTA）基因在DF3／MUC1启动子调控下的杀伤作用。方法构建含人乳腺癌DF3启动子和白喉毒素A链基因的表达载体pGL3-DF3-DTA，转染DF3阳性的乳癌细胞MCF-7，逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测DTA基因的表达；噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞生长活性；免疫组织化学法和流式细胞术检测细胞凋亡。结果酶切和测序表明获得了与预期结果相一致的pGL3-DF3-DTA真核表达载体。转染MCF-7细胞后，RT—PCR检测到了249bp的DTA mRNA片段。与对照组比较，转染pGL3-DF3-DTA的MCF-7细胞生长受到了抑制，流式细胞术检测到的凋亡率达39．43％，而对照组仅有0．28％。结论pGL3-DF3-DTA可对DF3阳性的乳癌细胞产生特异性的杀伤，对乳腺癌的基因治疗有潜在的应用价值。
- 黄文广罗威黄汉菊
- 关键词：乳腺肿瘤基因治疗白喉毒素
- PGL3-DF3-DTA特异性杀伤移植瘤裸鼠人乳腺癌细胞的实验研究被引量：4
- 2007年
- 目的研究新构建的含人乳腺癌DF3启动子和白喉毒素A片段的重组表达载体PGL3-DF3-DTA对裸鼠人乳腺癌移植瘤的特异性杀伤作用。方法建立人乳腺癌移植瘤裸鼠动物模型,将4周龄裸鼠36只随机分为实验组、空载体组、空白对照组、阴性对照组4组,每组9只。将DF3阳性和阴性的人乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231分别接种于相应的裸鼠皮下。待成瘤后,将重组表达载体PGL3-DF3-DTA和PGL3-DF3多次、多位点注射入相应裸鼠移植瘤内。连续测量瘤体大小,计算瘤体体积。在不同时间点分批处死部分动物,行形态学观察、检测肿瘤细胞的凋亡,检测Ki-67,Bax及Bcl-2蛋白的表达。结果裸鼠人乳腺癌动物模型建立成功,经重组表达载体PGL3-DF3-DTA作用后的人乳腺癌细胞出现明显的凋亡现象,Ki-67及Bcl-2基因表达水平降低,Bax基因表达水平升高。结论重组表达载体PGL3-DF3-DTA能对DF3阳性的乳腺癌细胞产生特异性杀伤作用。
- 蔡明黄文广潘晟
- 关键词：重组蛋白质类
- PGL3-DF3-DTA对DF3阳性人乳腺癌细胞的体内杀伤作用及机制探讨
- 2006年
- 将36只4周龄雌性SPF级裸鼠随机分为实验组、空载体组、空白对照组、阴性对照组四组,每组各9只。将人乳腺癌M CF-7细胞接种于前三组裸鼠皮下,M DA-M B-231细胞接种于阴性对照组裸鼠皮下。待成瘤后,将重组表达载体PGL 3-DF 3-DTA和PGL 3-DF 3多次、多位点注射入相应裸鼠移植瘤内。观察肿瘤体积变化情况。并于接种后2、5、7周分批处死动物,用免疫组化技术检测瘤组织中LYVE-1、F 8、K i-67、bax、B cl-2蛋白的表达。结果从接种后3周起,实验组裸鼠肿瘤体积明显小于其他三组;从接种后5周起实验组裸鼠瘤细胞LYVE-1、F 8、K i-67、B cl-2表达水平降低,bax表达水平升高。认为重组表达载体PGL 3-DF 3-DTA能对DF 3阳性的乳腺癌细胞产生特异性杀伤作用。其机制可能与PGL 3-DF 3-DTA下调LYVE-1、F 8、K i-67、B cl-2表达及上调bax表达有关。
- 蔡明黄文广潘晟
- 关键词：白喉毒素基因基因疗法
- DF3调控下的白喉毒素A片段对人乳腺癌细胞的特异性杀伤作用被引量：1
- 2006年
- 目的:研究新构建的含人乳腺癌DF3启动子和白喉毒素A片段的重组表达载体PGL3-DF3-DTA对人乳腺癌细胞的影响。方法:构建重组表达载体PGL3-DF3-DTA,并用其转染DF3阴性和阳性的乳腺癌细胞。采用RT-PCR法检测DTA在乳腺癌细胞中的表达,通过MTT法测定PGL3-DF3-DTA在体外对乳腺癌细胞生长的影响。建立裸鼠动物模型观察PGL3-DF3-DTA在体内对乳腺癌细胞的杀伤效应。结果:重组表达载体PGL3-DF3-DTA在DF3阳性的乳腺癌细胞中高表达,并在体内外均能发挥特异性杀伤作用。结论:重组表达载体PGL3-DF3-DTA能对DF3阳性的乳腺癌细胞产生特异性杀伤作用。
- 蔡明黄文广罗威潘晟殷涛
- 关键词：基因表达基因治疗乳腺癌
