国家自然科学基金(81201685)
- 作品数：2 被引量：6H指数：2
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- 相关机构：遵义医学院附属医院第三军医大学西南医院更多>>
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- Ascl2 RNA干扰对结肠癌LS174T细胞EMT相关microRNA表达的影响被引量：5
- 2013年
- 目的探讨转录因子Ascl2对结肠癌细胞上皮间质转化(EMT)相关的微小RNA(microRNA)的影响。方法对结肠癌LS174T细胞进行Ascl2的RNA干扰质粒转染,对照质粒shRNA-control/EGFP和干扰质粒shRNA-Ascl2/EGFP转染LS174T细胞,经G418筛选建立了稳定转染的细胞系,并分别命名为shRNA-Ctr/LS174T和shRNA-Ascl2/LS174T细胞,实时荧光定量PCR(real-time PCR)和蛋白印迹(Western-blot)实验确定干扰效果后,采用Transwell小室侵袭实验观察Ascl2干扰对细胞侵袭能力的影响,再进一步行microRNA芯片筛选与EMT相关的microRNA并行real-time PCR验证。结果干扰后细胞中Ascl2的mRNA和蛋白质表达均明显减少(P<0.01)。Ascl2干扰后LS174T细胞的侵袭能力明显下降(P<0.01)。microRNA芯片筛选出与EMT相关的microRNA-200家族(包括microRNA-200b、microRNA-200a、microRNA-429、microRNA-200c、microRNA-141)在Ascl2干扰后均出现2倍以上的上调(P<0.01)。结论 Ascl2可能通过转录调节microR-200家族,进而调控EMT从而影响结肠癌的浸润转移。
- 朱蓉田音汪荣泉
- 关键词：微RNAS上皮间质转化结肠肿瘤
- 活体成像观察Ascl2-RNAi对结肠癌HT-29细胞裸鼠移植瘤生长的影响被引量：2
- 2014年
- 目的小动物活体成像直观观察转录因子Ascl2对结肠癌HT-29细胞裸鼠移植瘤生长的影响。方法构建Ascl2的shRNA干扰质粒,对人结肠癌HT-29细胞进行瞬时转染48 h,G418筛选、克隆挑取、扩增培养建立稳定转染的细胞系,采用小动物活体成像仪直观观察Ascl2-RNAi对裸鼠移植瘤生长的影响。结果成功构建Ascl2的shRNA干扰质粒,并进行测序验证;质粒转染HT-29细胞,经G418筛选后挑选稳定转染的克隆,进行扩增培养,成功建立稳定转染的细胞系,命名为shRNA-Ascl2/HT-29和shRNA-control/HT-29细胞,并采用Western-blot证实干扰效果(P<0.01);采用小动物活体成像仪直观观察发现Ascl2-RNAi抑制HT-29细胞裸鼠移植瘤的生长。结论 Ascl2-RNAi导致结肠癌HT-29细胞体外致瘤能力下降,小动物活体成像技术直观、灵敏度高、实验成本低,值得进一步推广应用。
- 朱蓉赵逵方兴国狄连君陈小燕
- 关键词：结肠癌细胞
