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牛病毒性腹泻病毒反向遗传学研究进展: 2012年; 为了预防控制和消灭牛病毒性腹泻病(bovine viral diarrhea,BVD),深入研究牛病毒性腹泻病毒的致病机理和免疫机制非常必要,构建全长感染性cDNA克隆技术平台已成为研究RNA病毒的一条有效途径。文章针对黄病毒科瘟病毒属牛病毒性腹泻病毒反向遗传学的研究现状进行综述。; 何延华韩猛立黄新钟发刚薄新文; 关键词：BVDV 反向遗传学

牛病毒性腹泻病毒石河子株E2基因的克隆及其表达载体的构建被引量：1: 2008年; 应用RT-PCR方法从牛病毒性腹泻病毒(BVDV)新疆石河子分离株中扩增了E2基因,命名Shihezi 148(GenBank登录号:EU159699),扩增序列分析结果表明:Shihezi 148 E2基因长度为1121 bp,编码373个氨基酸残基;同源性分析表明,Shihezi 148与澳大利亚Bega株E2基因核苷酸同源性为88.32%,与中国changchun 184株的同源性为74.42%;通过基因重组技术构建了去除C端跨膜区的截短E2基因的原核表达载体pProEX HTa-E2和包括信号肽和全长E2蛋白的真核重组质粒pVAX1-E2。经过PCR、酶切及测序结果表明pProEX HTa-E2和pVAX1-E2重组表达载体构建成功。; 黄新钟发刚薄新文杨华郭燕刘志强赵军民任耀军罗盘棋王新华; 关键词：牛病毒性腹泻病毒 E2基因克隆

牛IFN-α、IFN-β及IFN-γ mRNA实时SYBR GreenⅠ定量RT-PCR检测方法的建立及应用被引量：4: 2010年; 为建立灵敏度高、特异性强、能够快速检测牛α-、β-、γ-干扰素(BoIFN-α、BoIFN-β、BoIFN-γ)mRNA的实时荧光定量PCR方法,本研究根据GenBank中登录的BoIFN-α、BoIFN-β和BoIFN-γ基因序列,分别在其保守区内设计并合成特异引物,以牛3-磷酸甘油脱氢酶(GAPDH)mRNA为内参,建立SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法。将BoIFN-α、BoIFN-β和BoIFN-γcDNA分别克隆到pMD18-T载体中,转化大肠杆菌DH5α内,经PCR及测序鉴定,将得到的阳性重组质粒制备成标准品,建立SYBR Green荧光定量PCR标准曲线并分析溶解曲线,进行灵敏性、特异性和重复性试验。结果表明:BoIFN-α、BoIFN-β、BoIFN-γ和GAPDH基因的Ct值与标准品稀释度在1×101copies/μL～1×107copies/μL内均呈良好的线性关系,相关系数均大于0.991。熔解曲线分析表明,产物为特异的单峰,特异性和重复性较好。本研究建立的检测牛IFN-α、IFN-β和IFN-γmRNA的实时荧光定量PCR方法,为牛IFN mRNA水平上的定量分析奠定了基础。; 韩猛立杨井泉姚守秀黄新薄新文钟发刚; 关键词：SYBR Β-干扰素

牛病毒性腹泻病毒新疆分离株E2基因的克隆及序列分析被引量：5: 2008年; 应用RT-PCR方法从牛病毒性腹泻病毒(BVDV)新疆石河子分离株、玛纳斯不同年份两个分离株扩增获得的3株BVDV的E2基因序列,分别命名Shihezi148、Manasi和MNS2(GenBank登录号:EU159699、EU159703和EU169937)。序列分析结果表明3株E2基因长度分别为1121bp、1122bp和1122bp,分别编码373、374和374个氨基酸残基。核酸序列同源性和系统发生分析表明,3株病毒均属于BVDV基因1型(BVDV-1),Shihezi 148株与澳大利亚Bega株亲缘关系最近,同处于BVDV-1c基因亚型群,其E2氨基酸同源性为90.11%。Manasi株和MNS2株E2基因核酸序列仅有4个碱基的差别,它们与Changchun 184和匈牙利VEDEVAC株亲缘关系最近,位于BVDV-1b基因亚型群。Manasi和MNS2株与Changchun 184株E2氨基酸同源性分别高达98.66%和98.93%。; 黄新钟发刚薄新文杨华郭燕刘志强王新华; 关键词：克隆

牛病毒性腹泻病毒基因组结构与蛋白功能研究进展被引量：21: 2008年; 牛病毒性腹泻病毒为黄病毒科(Flaviviridae)瘟病毒属(Pestivirus)的代表种,这个属的成员中还包括羊边界病毒(BDV)和猪瘟病毒(CSFV)。病毒基因组为单股正链RNA。论文就牛病毒性腹泻病毒已定位的4种结构蛋白、8种非结构蛋白以及3′和5′非翻译区的基因结构特征及其编码蛋白的合成与功能研究进行了综述,为牛病毒性腹泻的防控和疫苗研制提供参考。; 范进江薄新文钟发刚; 关键词：牛病毒性腹泻病毒基因组结构蛋白功能

牛病毒性腹泻病毒巢式RT-PCR检测方法的建立及应用被引量：6: 2010年; 参照多株不同基因型和基因亚型牛病毒性腹泻病毒(BVDV)5′UTR相对保守的基因序列,设计3对引物,其中1对能够扩增不同基因型BVDV 5′UTR片段(288 bp),另2对分别能够扩增BVDV-1型和BVDV-2型5′UTR片段(195 bp和116 bp)。扩增片段大小与预计片段一致。对PCR反应条件进行优化,建立了一种特异、敏感的RT-nPCR检测方法。敏感性试验表明,敏感性为10-2TCID50/mL。特异性试验表明,对猪瘟兔化弱毒疫苗株、牛轮状病毒、牛传染性鼻气管炎病毒的检测结果均为阴性。通过对新疆部分地区无BVD临床症状的牛场208份奶牛血样检测,阳性率为50.43%,表明该方法具有快速、简便、特异性强和灵敏度高等特点,可以作为BVDV隐性感染临床诊断的有效方法。; 韩猛立李娜黄新薄新文王新华赵玉龙钟发刚; 关键词：牛病毒性腹泻病毒

牛病毒性腹泻病流行现状与防制被引量：11: 2010年; 牛病毒性腹泻是由牛病毒性腹泻病毒引起的多种动物感染的一类重要传染病,给世界畜牧业尤其是养牛业以及相关产业造成巨大的经济损失。本文主要阐述了牛病毒性腹泻的国内外流行现状、发展趋势以及防治概况,以期为我国防治该病提供一些借鉴和参考。; 韩猛立黄新钟发刚薄新文; 关键词：牛病毒性腹泻防制

牛Th1/Th2型细胞因子实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用被引量：2: 2011年; 根据GenBank中牛Th1/Th2(BoTNF-α、BoIFN-γ、BoIL-2、BoIL-4、BoIL-6、BoIL-8、BoIL-10)型细胞因子的基因序列,在保守区设计并合成各自特异引物,并以牛3-磷酸甘油脱氢酶(GAPDH)基因为内参,采用SYBR GreenⅠ染料以建立实时荧光定量PCR检测方法。将Th1/Th2型细胞因子基因克隆至pMD18-T载体上,转化大肠杆菌DH5α,经PCR及测序鉴定后得到阳性重组质粒,作为标准品模板建立SYBR-GreenⅠ荧光定量RT-PCR标准曲线和溶解曲线,并做灵敏性、特异性和重复性试验。对建立的Th1/Th2型细胞因子SYBR-GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR方法进行分析,结果表明牛IFN-α、IFN-β、IFN-γ和GAPDH基因的Ct值与标准品稀释度在1×101～1×108 copies/μL范围分别呈良好的线性关系,相关系数均大于0.991。溶解曲线分析表明产物为特异的单峰,具有较高的灵敏性和特异性,重复性较好。建立了检测Th1/Th2型细胞因子的实时荧光定量RT-PCR方法,为在mR-NA水平对牛Th1/Th2型细胞因子的定量分析奠定了基础。; 韩猛立蔡曰鹏黄新何延华薄新文钟发刚; 关键词：TH1/TH2型细胞因子外周血单个核细胞实时荧光定量RT-PCR SYBR

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兵团博士基金(2007JC15)