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上海市自然科学基金(08ZRI403000)
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新型胰腺癌MUC1 DNA疫苗的优化构建及体外转染研究
2013年
目的优化构建新型胰腺癌MUC1 DNA疫苗。方法目的基因增加重复序列可变数目串联重复序列(VNTR),并分别插入乙型肝炎病毒(HBV)核心抗原基因(C1-144)和/或小鼠白细胞介素(IL)-18基因序列,插入真核表达载体pIRES2-EGFP,构建成优化重组质粒,酶切及测序鉴定。4种优化重组质粒分别体外转染2×10^6个293T细胞和Panc-02细胞,观察转染后48h后绿色荧光表达,评估转染效率。收集转染后的细胞,裂解后Western blot检测目的基因的表达,验证各优化重组质粒在真核细胞中的表达。结果双酶切鉴定证实了pIRES2-EGFP—A—B插入了1100bp大小片段,pIRES2-EGFP—A—C和pIRES2-EGFP—A—B—C重组质粒都插入了1200bp大小片段,分别与目的基因大小一致。在转染转染后48h后,293T和Panc-02均可见绿色荧光。Western blot检测可见在Panc-02细胞中pIRES2-EGFP-A—B质粒、pIRES2-EGFP—A—B—C质粒均可表达乙肝病毒核心抗原C1—144,pIRES2-EGFP—A—C质粒、pIRES2-EGFP—A—B-C质粒均可表达小鼠IL-18(mIL-18)。在293T细胞中,pIRES2-EGFP—A质粒、pIRES2-EGFP—A—B质粒、pIRES2-EGFP—A—C质粒、pIRES2-EGFP—A—B—C质粒均表达VNTR。结论优化构建的4个重组质粒均可在真核细胞中表达插入的目的抗原。
吴文川
靳大勇
楼文晖
戎叶飞
王单松
秦新裕
关键词:
胰腺癌
DNA疫苗
细胞转染
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