公共文化服务平台

国家自然科学基金(30371307): 作品数：11 被引量：11H指数：2; 相关作者：刘全胜何波张青许松梅郑立恒更多>>; 相关机构：四川大学哈佛大学河北北方学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金更多>>; 相关领域：生物学医药卫生更多>>

地塞米松对LPS诱导的小鼠24p3 mRNA表达的影响: 2009年; 采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法研究了脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的炎症中小鼠免疫器官脾脏和胸腺中24p3 mRNA含量的变化以及糖皮质激素地塞米松(DEX)对它的影响。结果表明,应急时相反应蛋白24p3不仅能被促炎症因素LPS还能被抑炎症因子DEX诱导,并且两者都呈时间依赖性的诱导24p3 mRNA的表达,但两者作用机制以及反应时间不同,DEX的作用较LPS缓慢。LPS和DEX共同作用时DEX起了主导作用,即24p3 mRNA的表达与地塞米松单独作用时趋势一致。DEX可能通过下调促炎症因子的表达来抑制由LPS诱导的应急时相反应蛋白24p3在炎症前期的高表达。24p3 mRNA的表达在胸腺和脾脏中无显著差异。; 王琛琛何波宋桂芹杨明理熊华辉刘全胜; 关键词：脂多糖地塞米松

人IL35-IgG4(Fc)融合蛋白在CHO／DG44细胞中的稳定表达被引量：2: 2009年; 本研究利用基因重组技术构建人IL35-IgG4(Fc)融合基因真核表达载体,稳定转染CHO/DG44细胞并检测重组蛋白的表达。主要采用聚合酶链式反应(PCR)从脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)诱导的人髓性白血病细胞株KG-IcDNA文库中克隆EBI3和IL-12p35cDNA,重叠PCR法连接2个片段,并克隆到IgG4(Fc)-pOptiVECTM-TOPO载体上,对新构建的IL-35-IgG4(Fc)pOptiVECTM-TOPO真核表达载体并进行酶切、测序、PCR鉴定;脂质体法转染CHO/DG44细胞;RT-PCR检测转染结果,采用a-MEM-培养基筛选实验组细胞,对筛选的阳性克隆细胞再进行氨甲喋呤(Methotrexate,MTX)的加压筛选,ProteinG-Agarose纯化阳性克隆培养上清,免疫印迹检测目的蛋白表达。结果显示IL-35-IgG4(Fc)pOptiVECTM-TOPO表达载体稳定转染CHO/DG44细胞并获得阳性克隆;SDS-PAGE电泳得到一条与预期相对分子质量大小相符的蛋白条带;该蛋白能与羊抗人IgG4抗体特异结合。本实验获得了能够稳定表达具有稳定结构的IL35-IgG4(Fc)融合蛋白的CHO/DG44细胞株。; 唐静高闻达张青张大为陈洋何波刘全胜; 关键词：重叠PCR 稳定转染

人IL-32-IgG4(Fc)融合蛋白在CHO/DG44细胞中的表达: 2009年; 【目的】构建人白细胞介素32(IL-32)和IgG4 Fc段的融合基因真核表达载体IL-32-IgG4(Fc)-pOp-tiVEC,建立稳定转染的中华仓鼠卵巢细胞(CHO/DG44)克隆,并检测其重组蛋白的表达。【方法】用PCR方法从脂多糖(LPS)激活的人CD4+T细胞cDNA中扩增出IL-32蛋白基因,并克隆到IgG4(Fc)-pOptiVEC载体上,构建重组质粒IL-32-IgG4(Fc)-pOptiVEC,并进行酶切和测序鉴定。采用脂质体法,将重组质粒线性化后转染CHO/DG44细胞,进行RT-PCR检测,筛选阳性克隆,并对筛选的阳性克隆进行氨甲喋呤(MTX)加压筛选。利用ProteinG-Agarose亲和层析纯化转染CHO/DG44细胞培养上清液中的融合蛋白IL-32-IgG4(Fc),通过SDS-PAGE、Western-blot对融合蛋白IL-32-IgG4(Fc)的表达和生物学活性进行检测。【结果】PCR扩增获得了长度为564 bp的人IL-32蛋白基因cDNA,经测序与GenBank报道的序列一致。真核表达载体IL-32-IgG4(Fc)-pOptiVEC经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切,获得了IL-32蛋白基因片段,其长度为564 bp。筛选出了能稳定表达IL-32-IgG4(Fc)融合蛋白的CHO/DG44细胞克隆。亲和纯化后的IL-32-IgG4(Fc)融合蛋白经SDS-PAGE和Western-blot鉴定,其分子质量约为50.0 ku,与预期结果一致。MTX加压后,IL-32-IgG4(Fc)融合蛋白的表达量明显升高。【结论】成功构建了人IL-32蛋白融合基因的真核表达载体IL-32-IgG4(Fc)-pOptiVEC,获得了能够表达具有生物学活性的IL-32-IgG4(Fc)融合蛋白的CHO/DG44细胞克隆。; 张大为高闻达张青唐静陈洋刘全胜; 关键词：融合蛋白真核表达

IL-21/4-IgG4融合基因的真核表达: 2009年; 利用新型细胞因子 IL-21的变异体 IL-21/4与 IgG4构成融合基因IL一21/4一IgG4.将构建好的融合基因载体 poptivec-IL-21/4-IgG4转染到中华仓鼠卵巢细胞中,成功并稳定表达了 IL-21/4-IgG4融合蛋白.; 陈洋唐静张青张大为刘全胜; 关键词：CHO细胞真核表达转染 IL-21 融合基因

EGFP-IgG4融合基因真核表达载体的构建及其表达被引量：3: 2007年; 构建增强型绿色荧光蛋白(Enhanced Green Fluorescent Protein,EGFP)和IgG4基因的融合蛋白真核表达载体pMM-EGFP-IgG4/WG,转染至中华仓鼠卵巢细胞(Chinese HamsterOvary,CHO)中成功表达,并发出绿色荧光,证明pMM-EGFP-IgG4/WG是一种良好的生产分泌型外源融合蛋白的阳性对照.; 郑立恒许松梅何波张青熊华辉刘全胜; 关键词：CHO细胞转染

24p3及白细胞介素17A在自身免疫性肝炎中的表达被引量：5: 2007年; 本研究以刀豆蛋白A（Con A）诱导AIH动物模型,研究24p3和IL-17A在AIH病理过程中的表达,发现24p3相对特异性地表达于炎症组织和免疫器官,证实了24p3在AIH中有特异表达并可能与免疫系统有关。; 何波高闻达宋桂芹王琛琛杨明理刘全胜; 关键词：肝炎自身免疫性白细胞介素17

小鼠分娩前后子宫IL-17A及24p3表达变化的研究被引量：1: 2008年; 选择雌性BALB/c小鼠作为动物模型,分别在未孕期、怀孕中期、分娩当天、分娩后一天和分娩五天5个不同时期剖取子宫和肝脏.RT-PCR检测不同时期IL-17A及24p3 mRNA在小鼠子宫及肝脏内的表达,HE组织染色检查淋巴细胞浸润程度.结果发现小鼠分娩前后IL-17A和24p3 mRNA在子宫内的表达呈正相关,两者可能参与了分娩前后子宫局部免疫炎症反应的调节.; 宋桂芹何波王琛琛梁素华刘康刘全胜; 关键词：子宫

增强型绿色荧光蛋白基因转染CHO细胞研究: 2006年; 目的:探讨增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)在中华仓鼠卵巢细胞(CHO-DHFR)细胞中的作用。方法:将增强型绿色荧光蛋白基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)-EGFP,转染至培养的中华仓鼠卵巢细胞(Chinese Hamster Ovary,CHO-DHFR-)中。结果:成功表达并产生绿色荧光。结论:证明EGFP是一种良好的报告基因和筛选标志,为进一步研究应用最广泛的哺乳动物细胞表达系统—CHO细胞表达系统奠定了基础。; 郑立恒魏会平许松梅孙伟华李保国胡火珍刘全胜; 关键词：增强型绿色荧光蛋白转染

EGFP基因转染骨髓间充质干细胞的实验研究被引量：1: 2006年; 目的:探讨外源性EGFP基因转染修饰兔骨髓间充质干细胞(m esenchymal stem cells,MSCs)的可行性。方法:用增强型荧光绿色蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)作为报告基因,以脂质体法转染骨髓间充质干细胞,观察转染结果、表达情况及对靶细胞活力的影响。结果:经荧光显微镜下观察证实:成功地对骨髓间充质干细胞实现了基因转染。结论:兔骨髓间充质干细胞能够在体外适宜的条件下进行长期培养;骨髓间充质干细胞可直接作为基因靶细胞,建立稳定表达EGFP的骨髓间充质干细胞系具有可行性,为进一步做标记的MSCs细胞的移植研究奠定基础。; 郑立恒魏会平许松梅何波杨明理王黎明刘全胜; 关键词：转染

hTNFR(p75)-IgG4融合蛋白在DG44细胞中的表达: 2009年; 目的以pOptivec为载体,以DG44细胞为宿主细胞在贴壁培养条件下表达hTNFR(p75)-IgG4融合蛋白。方法将重组质粒hTNFR(p75)-IgG4-pOptivec线性化后转染DG44细胞,经筛选得到稳定表达hTNFR(p75)-IgG4融合蛋白的DG44细胞克隆。培养上清经ProteinG亲和层析柱纯化后,进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。然后对稳定表达目的蛋白的细胞株进行不同浓度的MTX加压以扩增目的基因,检测不同MTX加压条件下目的蛋白的表达量。结果重组质粒成功转染DG44细胞,经筛选后得到稳定表达目的蛋白的细胞株。经MTX加压后最高表达量达到15μg/mL培养基左右。结论hTNFR(p75)-IgG4融合基因片段在DG44细胞中成功表达,且其表达量能够满足实验研究的需要,为下一步实验打下了良好的基础。; 张青张大为唐静高闻达刘全胜; 关键词：TNFR 融合蛋白真核表达

国家自然科学基金(30371307)

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户反馈

国家自然科学基金(30371307)

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户登录

用户反馈