天津市卫生局科技基金(2011KZ24)
- 作品数：5 被引量：9H指数：2
- 相关作者：刘晓智姜忠敏刘振林于士柱黄建永更多>>
- 相关机构：天津市第五中心医院杜克大学天津医科大学总医院更多>>
- 发文基金：天津市卫生局科技基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 诱导非典型蛋白激酶C基因沉默增加胶质瘤干细胞化疗药物敏感性的研究
- 2015年
- 目的通过诱导非典型蛋白激酶C（aPKC）基因沉默增加胶质瘤干细胞对化疗药物的敏感性，为根治胶质瘤干细胞提供理论支持。方法流式细胞术分离大鼠c6胶质母细胞瘤侧群细胞，RNA干扰（RNAi）技术沉默c6侧群细胞aPKC表达，MTT和锥虫蓝实验检测单纯疱疹病毒-胸苷激酶（HSV-tk）／更昔洛韦（GCV）对c6侧群细胞的杀伤效果；建立裸鼠皮下胶质瘤模型，测量肿瘤体积，肿瘤组织块称重，原位凋亡法检测细胞凋亡。结果c6侧群细胞aPKC基因被有效沉默后，可显著增加其对HSV-tk／GCV药物的敏感性，表现为细胞凋亡和死亡数明显增加（P〈0．05）；体内实验显示肿瘤体积和重量较对照组明显减小（P〈0．05），细胞凋亡明显增加（P〈0．05）。结论通过诱导aPKC基因沉默可进一步增加胶质瘤干细胞对化疗药物HSV-tk／GCV的敏感性，为胶质瘤干细胞的基因治疗提供了新的方法选择。
- 刘晓智于士柱姜忠敏黄建永苏治国李罡张琳李艳霞刘振林
- 关键词：神经胶质瘤肿瘤干细胞蛋白激酶C
- CD133^+胶质母细胞瘤细胞的分离与恶性行为特征被引量：4
- 2012年
- 背景与目的:在恶性胶质瘤中存在一类恶性度极高的前体细胞,它们控制着肿瘤的生长与恶性演进,也是肿瘤复发的根源。本研究对胶质母细胞瘤进行肿瘤干细胞的分离与恶性行为特征分析,旨在验证胶质瘤干细胞的存在,并为未来该领域研究打下基础。方法:充分消化术中切除的胶质母细胞瘤组织块至单细胞悬液,流式细胞术检测CD133+肿瘤细胞百分率,免疫磁珠分选法分离CD133+和CD133-胶质母细胞瘤细胞;免疫荧光法检测两类细胞中巢蛋白(nestin)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达水平;Transwell双室培养体系检测两类瘤细胞的侵袭能力,血清依赖实验检测两类瘤细胞在低营养条件下的生存能力,软琼脂克隆形成实验检测瘤细胞的克隆形成能力;去胸腺小鼠腹股沟皮下接种瘤细胞,观察成瘤率。结果:流式细胞术检测CD133+肿瘤细胞百分率为(2.31±0.57)%。CD133+细胞高表达nestin,低表达GFAP和NSE;CD133-细胞则相反。与CD133-细胞比较,CD133+细胞具有更高的细胞侵袭能力、低营养耐受能力和克隆形成能力。CD133+细胞在小鼠体内成瘤率为87%(26/30),CD133-细胞为7%(2/30)。结论:CD133+胶质母细胞瘤细胞具有更高的恶性细胞表型,提示其具有高度研究价值。
- 刘振林刘晓智陈镭姜忠敏刘洪赵玉军史万超李罡
- 关键词：胶质母细胞瘤干细胞侵袭力
- 水通道蛋白4和缝隙连接蛋白43的表达及与胶质瘤性脑水肿的关系被引量：3
- 2013年
- 目的研究水通道蛋白4(AQP4)和缝隙连接蛋白43(Cx43)的表达以及其在胶质瘤性脑水肿间的关系和两者的相关性。方法选择胶质瘤患者40例,瘤周相对正常脑组织20例。利用免疫组织化学方法检测胶质瘤及对照组中AQP4和Cx43的表达水平,同时结合患者影像学资料计算瘤周水肿指数(EI),分析AQP4和Cx43表达与胶质瘤性水肿的关系及两者的相关性。结果随着胶质瘤水肿程度的增加,AQP4表达随之增加,Cx43表达随之减少。胶质瘤各组间两两比较,无水肿与轻度水肿间差异均无统计学意义,其余各组间差异均有统计学意义。两者间无显著相关性。结论 AQP4和Cx43在胶质瘤脑水肿的发生发展过程中起着重要作用,两者作用机制是否相关及能否成为新的治疗靶点尚需进一步研究。
- 曹欣成平姜忠敏刘晓智曾雅清
- 关键词：水通道蛋白4缝隙连接蛋白43
- 连接蛋白CX43与水通道蛋白4联合诱导胶质瘤性脑水肿形成的偶联机制被引量：1
- 2013年
- 目的:探讨细胞间连接蛋白43(connexin 43,CX43)与水通道蛋白4(aquaporin 4,AQP4)在联合诱导成胶质细胞瘤性脑水肿形成过程中的功能偶联机制。方法:在大鼠颅内建立C6胶质瘤脑移植模型,磁共振成像检测成瘤及水肿情况,免疫荧光法和蛋白质印迹法检测肿瘤内部及瘤周CX43和AQP4的表达特点。体外采用低渗环境培养C6胶质瘤细胞和正常胶质细胞后,反转录PCR法比较2种细胞中CX43和AQP4的mRNA表达变化趋势;采用小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)技术分别沉默C6胶质瘤细胞和正常胶质细胞中AQP4和CX43的表达,检测另一基因的表达变化。结果:C6胶质瘤脑移植模型中,胶质瘤内部CX43表达缺失和AQP4表达水平轻度增高,瘤周则表现为CX43表达水平轻度增高和AQP4明显高表达。体外实验发现,低渗环境下正常胶质细胞和C6胶质瘤细胞中AQP4和CX43的mRNA水平随时间的延长均有不同程度的升高,但正常胶质细胞的变化程度明显低于肿瘤细胞,且CX43的变化时间窗落后于AQP4。siRNA沉默C6细胞的AQP4表达后,其CX43表达水平的升高程度明显下降(P<0.05);沉默正常细胞的CX43表达后,其AQP4水平则无明显变化(P>0.05)。结论:AQP4和CX43在胶质瘤内部及其边缘存在2种不同的致脑水肿机制,CX43可能是AQP4的潜在下游调控因子。
- 姜忠敏于士柱刘振林黄建永盛凤李宝江张亮刘晓智
- 关键词：神经胶质瘤连接蛋白43脑水肿
- Par-6／aPKC极性蛋白重排促进胶质瘤侧群细胞快速增殖与分化被引量：1
- 2014年
- 目的 探讨Par-6/非典型蛋白激酶C（atypical protein kinase C,aPKC）极性蛋白重分布是否能促进胶质瘤侧群细胞快速增殖与分化.方法 实验分为对照组、无义序列组和siR-PKCξ组3组.免疫细胞荧光方法检测aPKC、Par-6和TRIM32（tripartite motif-containing protein 32 gene）在细胞中的定位,绘制细胞球体生长曲线,Ki67免疫荧光方法检测细胞核增殖活性,免疫荧光方法检测细胞标记蛋白的表达.结果 与对照组和无义序列组比较,siR-PKCξ组PKCζ蛋白表达水平明显降低（0.07±0.03,P＜0.01）,Par-6极性消失,TRIM32发生核转移.基因转染24 h,siR-PKCξ组Ki67阳性百分率为（48.65±11.34）％,均高于其他两组（P＜0.05）,转染72 h,siR-PKCζ组低表达CD133和Nestin,高表达GFAP（P ＜0.05）,β-tubulinⅢ和myelin表达无明显变化（P＞0.05）.结论 通过诱导Par-6/aPKC极性蛋白重排可促进胶质瘤侧群细胞快速增殖与分化.
- 刘晓智姜忠敏于士柱黄建永怀鹏李艳霞刘振林
- 关键词：神经胶质瘤细胞极性RNA干扰
