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细胞膜富含脯氨酸和谷氨酰胺的剪切因子维持急性髓系白血病HL-60细胞对多柔比星的敏感性被引量：1: 2013年; 目的探讨细胞膜抗原富含脯氨酸和谷氨酰胺的剪切因子（SFPQ）在多柔比星（ADR）耐药的白血病细胞中的作用。方法以急性髓系白血病细胞株HL-60及其ADR耐药株HL．60／ADR细胞为研究对象，通过免疫荧光法比较HL。60和HL-60／ADR细胞膜SFPQ表达丰度；应用单抗5D12封闭细胞膜SFPQ，通过MTr法测定5D12对HL-60、HL-60／ADR细胞增殖的影响，计算ADR的半数抑制浓度（Jc钔）和5D12对细胞增殖的促进率；流式细胞术检测5D12对罗丹明在细胞内蓄积的影响。结果SFPQ在HL-60细胞膜表达高于HL-60／ADR细胞。5D12封闭膜SFPQ作用后，ADR作用HL-60细胞48h的‰由（0．19±0．03）μg／ml升高至（0．95±0．13）μg／ml，HL-60／ADR细胞的IC50（4．41±2．42）μg／ml升高至（21．33±4．26）μg／m1。l、3、5、8、12μg／ml的5D12作用细胞96h后，HL-60细胞增殖促进率分别为（9．12±2．02）％、（16．63±0．92）％、（19．04±0．25）％、（24．17±0．53）％、（34．04±3．20）％，HL-60／ADR细胞分别为（7．40±2．23）％、（8．72±2．38）％、（10．47±3．78）％、（11．57±1．49）％、（13．97±0．91）％。结论核蛋白SFPQ在HL-60细胞膜表达丰度高于HL-60／ADR细胞；该蛋白在细胞膜易位表达不改变药物在细胞内的蓄积，通过抑制细胞增殖维持HL-60细胞对ADR的敏感性。; 任思楣闫颖陆红谢波彭明婷; 关键词：多药耐药多柔比星药物敏感性

利用蛋白转导域介导的新型大分子转染方法: 2012年; 目的构建蛋白转导域（PTD）与扩增链亲和素（Strep）融合蛋白，用于转染常规操作中难于转染生物大分子的血液肿瘤细胞、神经细胞、干细胞等细胞系。方法采用聚合酶链反应（PCR）法引入PTD和G4S序列、扩增Strep序列；经酶切、连接构建重组质粒pAYZ-PTD-Strep，用低磷培养液AP5诱导表达融合蛋白，E-tag亲和层析柱纯化产物，Westernblot鉴定产物，利用pAYZ-PTD—Strep将eGFP质粒转染到悬浮U937细胞内，流式细胞术测定融合蛋白转染效率。结果目的产物PTD—G4S—Strep融合蛋白以可溶形式表达，产量约为0．7mg／L，经E—tag亲和层析柱纯化后纯度可达90％以上。融合蛋白PTD-Strep可成功将质粒运送至悬浮细胞U937内，转染效率高于PTD单体。结论构建的融合蛋白PTD-Strep具有将生物大分子转入血液肿瘤悬浮细胞内的活性，有望发展成为一种高效、可靠的真核细胞转染方法。; 张砚君任思楣陆红刘倩曾洁张益枝; 关键词：蛋白转导域转染

富含脯氨酸和谷氨酰胺的剪切因子：预测血液肿瘤耐药的潜在靶点被引量：1: 2012年; 目的鉴定血液肿瘤细胞耐药相关膜抗原，探讨其在血液肿瘤细胞膜易位表达的普遍性。方法以蛋白电泳和免疫共沉淀法分离并沉淀细胞膜抗原，以质谱分析鉴定抗原信息，通过siRNA基因干扰法和激光共聚焦显微镜法确证抗原信息及其易位细胞膜的鉴定结果，通过流式细胞术检测抗原在多种血液肿瘤细胞膜的易位表达。结果免疫共沉淀和质谱等实验证实白血病耐药相关单抗——5D12在HL-60细胞膜抗原为细胞核因子富含脯氨酸和谷氨酰胺的剪切因子（PSF），经一系列生物学实验确证PSF在HL-60细胞膜的易位表达，在敏感株的膜表达显著高于耐药株的膜表达。流式细胞术检测结果表明PSF的特异性单抗5D12与血液肿瘤多种细胞系的膜结合率为：HL-60（78．56±0．76）％；K562（26．54±4．42）％；Nomalwa（38．10±5．11）％；U937（64．03±7．96）％；Jurkat（29．12±5．58）％；Raji（74．92±3．41）％；CEM（12．18±3．21）％。结论核蛋白PSF易位表达于多种血液肿瘤细胞膜，对维持肿瘤细胞对化疗药的敏感性有重要作用，是血液肿瘤耐药预测的候选靶点。; 任思楣刘倩彭洪薇张砚君熊冬生张益枝; 关键词：多药耐药 PSF 血液肿瘤靶点

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国家自然科学基金(81201729)

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