国家自然科学基金(30671565)
- 作品数：8 被引量：21H指数：4
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- 狂犬病毒分离株N基因的分析
- 2009年
- 运用RT-PCR和动物接种的方法从广东省东莞市正常犬只的唾液中分离获得1株狂犬病毒,编号为GD33.为了解析该毒株与兽用狂犬病弱毒疫苗的关系,对该分离株的N基因进行了克隆和测序,并将N基因的序列与GeneBank上已发表的狂犬病毒N基因核苷酸和推导的氨基酸序列进行比较.结果发现:该分离株仅能引起乳鼠发病,对6周龄成鼠无致病性,说明该毒株不是强毒.该分离株N基因与弱毒疫苗HEP-F lury N基因的相似性最高,达99.7%,并且同处系统发育树的最近分枝.因此,推测该分离株源自接种的弱毒疫苗.
- 江飙刘晓慧陈晶孙招金郭霄峰
- 关键词：狂犬病毒弱毒疫苗N基因克隆
- 狂犬病毒HEP-dG株的拯救被引量：5
- 2009年
- 目的筛选免疫原性高、致病性低的狂犬病疫苗候选株。方法应用反向遗传技术,在狂犬病毒弱毒株HEP-Flury株全基因组3'-N-P-M-G-L-5'的假基因区域(G与L之间),插入一个G基因,构建携带双G基因的全长感染性克隆,其与辅助质粒共转染BHK-21细胞,盲传十代,用荧光抗体和RT-PCR鉴定病毒。结果成功获得携带双G基因的狂犬病毒HEP-dG株,该病毒在BHK-21细胞中稳定生长,其病毒滴度达到1010FFU/mL。结论HEP-dG株会为研制高效的狂犬病病毒基因工程口服疫苗提供了良好的疫苗候选株。
- 刘晓慧艾军孙招金陈晶孙京臣郭霄峰
- 关键词：狂犬病毒G基因反向遗传学
- 禽流感病毒HA基因在狂犬病毒中的表达被引量：6
- 2008年
- 为了研究狂犬病毒作为载体表达外源基因的特性,将禽流感病毒HA基因插入狂犬病毒全基因组cDNA感染性克隆pHEP-3.0G基因与L基因的假基因位点,再通过反向遗传技术,获得了携带流感病毒HA基因的嵌合狂犬病毒(HepFHA),并进行了病毒传代与HA基因表达的研究.结果显示,重组病毒经BHK-21细胞传代10次,病毒表达稳定,但各代次常规红细胞凝集试验均为阴性;Western-blotting检测到病毒表达产物中存在部分HA蛋白的表达,其相对分子质量为39 540,与HA裂解的HA1蛋白相对分子质量相吻合.
- 艾军金晓芹孙京臣罗琴芳黄文科郭霄峰
- 关键词：狂犬病毒反向遗传技术HA基因
- 狂犬病病毒HepFlury株P蛋白单克隆抗体的制备及间接免疫荧光检测方法的建立被引量：1
- 2010年
- 本研究以原核表达的融合型的重组蛋白pET32a（＋）-P（狂犬病病毒HepFlury株P蛋白）免疫6-8周龄的BALB/c小鼠,取脾细胞和SP2/0按常规杂交瘤技术进行细胞融合,经间接免疫荧光方法（IFA）筛选及对mAb进行初步鉴定。经3次亚克隆后获得1株稳定分泌表达的杂交瘤细胞株5G8。
- 毛三英郭霄峰何敏马勇江范小龙剡海阔马红娜邓衔柏
- 关键词：细胞融合MAB
- 狂犬病毒HEP-Flury株基质蛋白的原核表达及纯化被引量：2
- 2010年
- 为原核表达狂犬病毒(RV)基质蛋白(M),本研究以RV的HEP-Flury株全长重组质粒为模板扩增M基因,双酶切后定向克隆至原核表达载体pQE30,构建重组质粒pQE-M并转化至宿主菌E.coli M15(pREP4),在IPTG的诱导下表达。SDS-PAGE电泳分析显示M蛋白为25ku。Western blot检测证明,重组蛋白可被鼠抗His单克隆抗体及鼠抗狂犬病毒多克隆抗体特异识别。本研究为狂犬病诊断方法的建立奠定了基础。
- 江飙郑佳琳邝贞结梁红茹徐蕙郭霄峰
- 关键词：狂犬病病毒基质蛋白原核表达
- 糖蛋白基因重排至第二位对狂犬病病毒生物学特性的影响
- 目的研究狂犬病毒糖蛋白基因重排至基因组的第二位对病毒生物学特性的影响。方法应用基因操作技术,将狂犬病毒HEP-Flury株全基因组中G基因从原来的第四位重排至第二位,构建重组病毒N1G2的全长感染性cDNA克隆,拯救重组...
- 陈晶刘晓慧艾军孙招金孙京臣郭霄峰
- 关键词：狂犬病毒反向遗传操作技术基因重排生物学特性
- 狂犬病毒分离株糖蛋白基因的克隆与序列分析被引量：1
- 2010年
- 为分析狂犬病毒(RV)分离株糖蛋白基因之间的差异,本研究采用RT-PCR的方法扩增由广东某地临床表现正常犬的唾液中分离的RV(GD33)分离株的G基因,将其克隆、测序后与国内外部分毒株相应基因进行核苷酸序列比较,结果表明,该分离株与其他毒株相比核苷酸同源性为94%～97.1%;氨基酸同源性为97%～99.2%。而GD33分离株与HEP-Flury株在跨膜区、膜内区有很高的一致性;另外,GD33分离株与HEP-Flury和FluryLEP株在333位点出现精氨酸被取代的现象,证实GD33分离株这2个疫苗株没有显著差异,对监控我国狂犬病疫情具有一定的意义。
- 江飙郑佳琳梁红茹徐蕙郭霄峰
- 关键词：狂犬病毒糖蛋白基因
- 狂犬病毒HEP-Flury株糖蛋白基因重排至第二位的拯救及其生物学特性研究
- 为了研究狂犬病毒G基因在基因组不同位置所具有的功能差异,应用基因操作技术,将狂犬病毒HEP-Flury株全基因组中G基因从原来的第四位重排至第二位,构建了重组病毒N1G2的全长感染性cDNA克隆,拯救出重组病毒N1G2。...
- 陈晶刘晓慧艾军孙京臣薛素强郭霄峰
- 关键词：反向遗传操作技术基因重排
- 文献传递
- 腺病毒载体及其在狂犬病疫苗研究中的应用被引量：5
- 2008年
- 谭业平祝艳蕾郭霄峰
- 关键词：狂犬病疫苗腺病毒载体传染性疾病预防接种
- 优化密码子以提高狂犬病病毒糖蛋白基因在原核细胞的表达被引量：5
- 2010年
- 目的探讨提高狂犬病病毒(RV)HEP-Flury株糖蛋白(GP)基因在原核细胞中表达的水平和与抗体的反应水平。方法以RVHEP-Flury株的全长质粒为模板,采用PCR方法扩增获得去除信号肽基因的GP(G1)、GP的膜外区基因(G2)。选取膜外区基因中抗原表位富集区基因,对氨基酸密码子进行修饰并合成其序列(G3)。分别将G1、G2及G3基因亚克隆到表达载体pET32a(+),构建融合表达质粒pET32a-G1、pET32a-G2及pET32a-G3,转化表达宿主菌BL21,并利用IPTG诱导表达。经SDS-PAGE,Western-blotting和薄层扫描分析,比较重组蛋白的表达量。结果 G3基因的表达量比G1、G2基因明显提高。结论通过密码子优化,能显著提高G基因在原核细胞中的表达水平。
- 郑佳琳江飙郭霄峰
- 关键词：基因修饰原核表达
