天津市自然科学基金(05YFJMJC01800)
- 作品数：6 被引量：33H指数：3
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- 相关领域：生物学理学更多>>
- 表达外源rhBMP2的CHO细胞株稳定性分析被引量：2
- 2008年
- 骨形态发生蛋白2(BMP2)属于TGF-β超家族,是诱导成骨活性最强的BMPs之一,具有广泛的临床应用的前景。本实验室已成功构建高效表达rhBMP2的重组CHO细胞株,现选取其中一株表达量最高的细胞rCHO(hBMP2)-C8进行长期体外培养,并在培养过程中比较了添加和去除压力筛选中使用的MTX对细胞生长,rhBMP2基因拷贝数及rhBMP2分泌蛋白表达的影响;检测了该细胞株在无血清培养基中可以连续表达rhBMP2的时间以及培养基中rhBMP2的温度敏感性等等。该研究为进一步采用动物细胞规模化培养技术生产rhBMP2奠定了基础。
- 翟春利闫继东杨爽杜君袁伟王兆奇朱天慧
- 关键词：BMP2稳定性
- E3泛素连接酶Smurf家族在骨形态发生蛋白和转化生长因子信号转导中的作用被引量：4
- 2006年
- 泛素-蛋白酶体降解系统广泛存在于各种真核细胞中,参与调控细胞多种生理进程.作为该系统中行使调控降解功能的核心成员,E3泛素连接酶的重要作用已经越来越引起人们的重视.BMP和TGF-β是骨组织中调控成骨细胞和软骨细胞增殖、分化和凋亡的关键分子,通过不同的信号通路体系调控骨生理代谢,参与骨组织的多种生理进程.最近的研究表明,泛素-蛋白酶体降解系统在骨细胞和骨组织中具有十分重要的作用,E3泛素连接酶Smurf作为这一系统的核心,参与调控骨组织中BMP和TGF-β两个家族的分子信号转导过程.在前期成果的基础上,结合最新的研究进展,系统阐述了骨组织中E3泛素连接酶的发现,及其调控BMP和TGF-β信号通路的机制以及其对成骨细胞和软骨细胞增殖和分化的影响.
- 王磬朱天慧张明陈棣
- 关键词：E3泛素连接酶骨形态发生蛋白转化生长因子Β软骨细胞
- 重组人骨形态发生蛋白2在CHO细胞中的表达、鉴定及活性分析被引量：9
- 2006年
- 构建真核表达载体pCDNA3.1(+)-hBMP-2,与质粒pSV2-dhfr共转染CHO-dhfr-细胞,以含有700μg/mLG418的IMDM进行选择性培养,筛选抗性克隆,并用MTX扩增,提高rhBMP-2的表达量。收集的rhBMP-2蛋白进行Westernblot检测,还原蛋白样品电泳产生一条大小约为18kD的特异性条带,非还原蛋白样品电泳产生一条大小约为30kD的特异性条带,提示表达的rhBMP-2是经过糖基化修饰的,且以同源二聚体形式分泌表达。单细胞分离培养得到14株rCHO(hBMP-2)单克隆细胞株,ELISA法检测rhBMP-2表达水平,最高可达7.83μg/24h/106cells。活性分析结果表明,表达的rhBMP-2具有很强的生物学活性。
- 张道永杨爽吕树军闫继东朱天慧
- 关键词：人骨形态发生蛋白2CHO共转染C2C12
- 利用同源蛋白的信号肽和前肽序列在CHO细胞中表达重组人BMP6被引量：1
- 2007年
- BMP6属于TGF-β超家族,具有较强的骨诱导作用。主要利用BMP6自身的信号肽、前肽与成熟肽基因序列构建了表达质粒pcDNA-BMP6;同时利用BMP2的信号肽、前肽与BMP6的成熟肽基因序列构建了表达质粒pcDNA-BMP2/6。将两种质粒分别瞬时转染Cos7细胞,发现质粒pcDNA-BMP2/6表达rhBMP6的效率高于质粒pcDNA-BMP6。然后将质粒pcDNA-BMP2/6与含二氢叶酸还原酶基因(dhfr)的表达质粒共转染dhfr缺陷型的中华仓鼠卵巢(CHO)细胞,经G418筛选、氨甲蝶呤(MTX)介导目的基因扩增、亚克隆后得到表达rhBMP6成熟肽的单克隆细胞株。将表达产物rhBMP6初步纯化后,能诱导前成肌细胞系C2C12向成骨细胞方向转化,显示其具有骨诱导作用。
- 闫继东杨爽吕树军雷荣悦朱天慧
- 关键词：骨诱导作用
- 重组人BMP6在大肠杆菌中可溶表达、纯化及活性分析被引量：16
- 2008年
- BMP6是一种调节成骨细胞和成软骨细胞分化的骨诱导因子,在修复各种骨缺损方面具有很好的应用潜力。有诱骨活性的BMP6是多二硫键的二聚体蛋白,疏水性极强容易聚集沉淀。为了在大肠杆菌中可溶表达具有生物活性的重组人BMP6(rhBMP6),构建了具有TRX、GST、MBP、CBD融合标签和His6标签的rhBMP6成熟肽原核表达载体,调节诱导温度和IPTG浓度,比较不同融合标签和诱导条件对目的蛋白表达量和溶解性的影响。结果表明,MBP最能有效的增强rhBMP6的溶解性,诱导条件对溶解性影响较小。大肠杆菌BL21 trxB(DE3)这种硫氧还蛋白还原酶缺陷菌株为rhBMP6二硫键在胞质中形成提供了合适的氧化还原环境。MBP和BL21 trxB(DE3)相结合在细胞质中高效可溶表达出了BMP6融合蛋白二聚体。表达产物经亲和层析和凝胶排阻层析纯化后,能诱导成肌细胞系C2C12向成骨细胞方向转化。
- 雷荣悦乔玉欢闫继东杨爽朱天慧
- 关键词：MBPBL21可溶性
