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国家自然科学基金(30371262)

作品数:14 被引量:40H指数:3
相关作者:曹建平刘述先李小红韩海勃沈玉娟更多>>
相关机构:中国疾病预防控制中心湖州师范学院南京市疾病预防控制中心更多>>
发文基金:国家自然科学基金国家高技术研究发展计划江苏省教育厅自然科学基金更多>>
相关领域:医药卫生更多>>

文献类型

  • 14篇中文期刊文章

领域

  • 14篇医药卫生

主题

  • 13篇血吸虫
  • 13篇吸虫
  • 11篇日本血吸虫
  • 6篇免疫
  • 6篇克隆
  • 5篇硫氧还蛋白
  • 4篇疫苗
  • 4篇免疫原性
  • 4篇免疫原性研究
  • 3篇重组抗原
  • 2篇蛋白
  • 2篇血吸虫病
  • 2篇吸虫病
  • 2篇小鼠
  • 2篇免疫研究
  • 2篇抗原
  • 2篇核酸疫苗
  • 2篇DNA疫苗
  • 2篇虫病
  • 1篇东方田鼠

机构

  • 14篇中国疾病预防...
  • 1篇湖州师范学院
  • 1篇苏州大学
  • 1篇南京市疾病预...

作者

  • 14篇曹建平
  • 9篇刘述先
  • 6篇李小红
  • 5篇沈玉娟
  • 5篇韩海勃
  • 4篇徐馀信
  • 3篇卢潍媛
  • 3篇宋光承
  • 2篇刘海鹏
  • 2篇徐裕信
  • 1篇汤林华
  • 1篇童群波
  • 1篇成静
  • 1篇刁薇
  • 1篇夏超明
  • 1篇胡媛
  • 1篇臧炜
  • 1篇费正弦
  • 1篇袁忠英
  • 1篇周玮

传媒

  • 6篇中国血吸虫病...
  • 5篇国际医学寄生...
  • 1篇中国人兽共患...
  • 1篇国外医学(寄...
  • 1篇中国寄生虫学...

年份

  • 1篇2010
  • 3篇2007
  • 5篇2006
  • 4篇2005
  • 1篇2004
14 条 记 录,以下是 1-10
排序方式:
日本血吸虫硫氧还蛋白编码基因的克隆和表达被引量:2
2005年
目的克隆和表达日本血吸虫大陆株硫氧还蛋白(SjcTrx)的编码基因。方法根据日本血吸虫菲律宾株硫氧还蛋白基因序列设计一对引物,上游引物引入BamHI酶切位点和起始密码子ATG,下游引物引入SalI酶切位点和终止密码子TAA。以日本血吸虫大陆株成虫总RNA为模板,经反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增SjcTrx基因。经双酶切并纯化的PCR产物与同样双酶切并纯化的pET28a质粒DNA片段用T4 DNA连接酶连接,构建重组质粒pET28a-SjcTrx,转化BL21感受态菌并大量扩增。重组质粒DNA经限制性内切酶双酶切、PCR、琼脂糖凝胶电泳和核苷酸序列测定进行鉴定。pET28a-SjcTrx/BL21用IPTG诱导表达。结果SjcTrx编码基因RT-PCR产物约334 bp,构建的重组pET28a-SjcTrx表达质粒DNA经限制性内切酶双酶切和PCR扩增产物于琼脂糖凝胶电泳均观察到相同大小基因片段。根据核苷酸序列测序结果推导的氨基酸序列与日本血吸虫菲律宾株和曼氏血吸虫Trx分别有97%和43%的同源性。表达的重组蛋白经SDS-PAGE分析,约14kDa。Western blotting显示该重组蛋白可被日本血吸虫感染兔血清和重组抗原免疫小鼠血清所识别。结论SjcTrx基因的表达获得成功,并获得纯化蛋白,为开展动物保护性免疫试验创造了条件。
韩海勃曹建平刘述先
关键词:日本血吸虫硫氧还蛋白克隆重组抗原
T载体的构建及日本血吸虫肌动蛋白基因PCR产物的快速克隆被引量:3
2004年
目的 构建快速高效克隆 PCR产物的克隆载体 (T载体 ) ,并对日本血吸虫肌动蛋白全长编码基因 PCR产物进行快速克隆。方法 日本血吸虫肌蛋白全长编码基因的扩增采用逆转录 -聚合酶链反应 (RT- PCR)方法。质粒 p GEM5 Zf (+)经限制性内切酶 Eco R V酶切 ,在仅含有脱氧胸苷三磷酸 (d TTP)的 PCR缓冲液中于 70℃作用 2 h,在每个片段的 3′端加上一个脱氧胸苷 (d T)碱基 ,构建成 T载体。根据 PCR扩增产物 3′端存在一个非模板依赖的脱氧腺苷 (d A)原理 ,将扩增产物直接克隆入 T载体并测序。结果 阳性克隆经琼脂糖凝胶电泳、限制性酶切分析、PCR及 DNA序列测定等均证实克隆获得成功 ,且效率很高。与曼氏血吸虫肌动蛋白比较 ,核苷酸和推断的氨基酸的同源性分别是 92 .5 %和 99.7%。结论 构建的 p GEM5 Zf- T载体对日本血吸虫肌动蛋白编码基因的PCR产物直接克隆既经济、简便 ,又快速、高效 ,所构建的 T载体由于在插入位点两侧具有 p UC/M13测序引物序列 ,可直接测定重组质粒中插入片段的核苷酸序列。所获得的日本血吸虫 (大陆株 )
沈玉娟曹建平刘述先徐馀信宋光承
关键词:日本血吸虫肌动蛋白T载体
日本血吸虫硫氧还蛋白编码基因的克隆表达及其免疫原性研究被引量:5
2006年
Schistosomiasis japonica remains a major public health problem in China despite the remarkable successes in schistosomiasis control achieved over the past four decades. The present strategy to control schistosomiasis relies primarily on diagnosis and targeted chemotherapy supplemented with Oncomelania control through mollusciciding and environmental modification. Praziquantel is an effective drug currently available for human treatment, but it cannot prevent re-infection, and the development of drug resistance by schistosomes and existence of numerous livestock for continued transmission of this parasitic disease to human being have mainly been in concerns. It seems that the most feasible long-term solution to the problem of schistosomiasis at present is a protective vaccine. Considerable efforts have been aimed at the identification of relevant schistosome antigens that may induce protective immune response. Many putative vaccine antigens for schistosome have been identified during the past decades, such as GST, TPI, paramyosin, myosin, membrane-associated antigen (23 kDa) FABP and so on. Unfortunately, only partial protection was reached with any of these candidate antigen formulations. Actually it is very common that the vaccines currently being tested in many laboratories have only shown limited efficacy in animal trials. There remains a urgent need for continuous search for new vaccine candidates. Thioredoxins (Trx) are a class of small 12 kDa redox proteins known to be present in all eukaryotic and prokaryotic organisms. It acts as electron carriers necessary for the catalytic cycles of biosynthetic enzymes, such as ribonucleotide reductases, methionine sulfoxide reductases and sulfate reductases. It generally protects cytosolic proteins from aggregation or inactivation via oxidative formation of intra- or inter-molecular disulfides and is able to reduce H2O2 and scavenge free radicals. It is associated with regulation of apoptosis, immunomodulation, etc. According to the results from our proteomics
韩海勃曹建平
关键词:日本血吸虫硫氧还蛋白克隆重组抗原核酸疫苗免疫
日本血吸虫DNA疫苗的研究进展被引量:10
2006年
血吸虫病是严重危害人类健康的人畜共患寄生虫病,疫苗是预防控制血吸虫病的重要手段。该文概述了日本血吸虫DNA疫苗的优点、候选抗原、联合免疫、免疫机制及DNA疫苗存在的问题和展望。
刁薇曹建平
关键词:日本血吸虫DNA疫苗候选抗原联合免疫免疫机制
RNA干扰及其在寄生虫学研究中的应用被引量:3
2005年
RNA干扰是一种在真核生物中普遍存在的自身防御反应,利用双链RNA可以引起细胞内有效的序列特异性的基因沉默。研究发现,这种基因沉默可以发生在3个不同的阶段:即转录水平,转录后及翻译。RNA干扰作为一种高效、特异、快捷的方法,已广泛应用于生物学的各个领域,在寄生虫研究中也发挥了巨大的作用,尤其是对寄生虫基因功能的研究、寄生虫疫苗及抗寄生虫药物有效靶点的筛选等方面已取得了一些成果。
曹建平成静刘述先
关键词:RNA干扰基因沉默寄生虫
东方田鼠实验动物模型的建立及其在日本血吸虫病研究中的应用
2010年
东方田鼠是我国非常有价值的野生动物资源之一。东方田鼠实验动物模型的建立已被列为国家的有关研究项目并得到了广泛全面的研究。日本血吸虫病是重要的人兽共患寄生虫病,仍是我国一个重要的公共卫生问题。而东方田鼠是迄今为止唯一发现具有天然抗血吸虫病的哺乳动物。目前,在东方田鼠生物学特性、实验动物化研究、分子遗传学研究方面均有一定的进展,以期为东方田鼠的抗日本血吸虫特性研究提供理想的动物模型。该文就东方田鼠实验动物模型的建立及其在血吸虫病研究中的进展作一综述。
费正弦袁忠英胡媛曹建平
关键词:东方田鼠抗血吸虫病动物模型
血吸虫硫氧还蛋白免疫原性研究 Ⅰ日本血吸虫硫氧还蛋白DNA疫苗的构建和鉴定被引量:3
2005年
目的构建日本血吸虫(大陆株)硫氧还蛋白(Trx)DNA疫苗(pcDNA3-SjcTrx),并进行分子生物学鉴定。方法根据日本血吸虫菲律宾株Trx基因序列设计一对引物,上游引物引入BamHI酶切位点和起始密码子ATG,下游引物引入EcoRI酶切位点和终止密码子TCA。以日本血吸虫大陆株成虫总RNA为模板,经反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增日本血吸虫大陆株Trx(SjcTrx)编码基因。经双酶切并纯化的PCR产物与经双酶切纯化的pcDNA3质粒DNA片段用T4DNA连接酶连接,克隆入真核表达载体pcDNA3,构建重组质粒pcDNA3-SjcTrx,并经限制性内切酶双酶切、琼脂糖凝胶电泳、PCR检测和核苷酸序列测定进行鉴定。结果SjcTrx编码基因RT-PCR产物约334bp,构建的pcDNA3-SjcTrx重组质粒DNA经限制性内切酶双酶切和PCR扩增产物于琼脂糖凝胶电泳均观察到相同大小基因片段,根据核苷酸序列测定结果推导的氨基酸序列与日本血吸虫菲律宾株和曼氏血吸虫Trx分别有97%和43%的同源性。结论日本血吸虫(大陆株)硫氧还蛋白DNA疫苗构建成功,为开展动物保护性免疫试验创造了条件。
曹建平韩海勃刘述先
关键词:日本血吸虫硫氧还蛋白真核表达载体核酸疫苗免疫
血吸虫硫氧还蛋白免疫原性研究 Ⅱ日本血吸虫硫氧还蛋白DNA疫苗小鼠保护性免疫研究被引量:9
2005年
目的观察日本血吸虫(大陆株)硫氧还蛋白DNA疫苗(pcDNA3-SjcTrx)在小鼠诱导抗血吸虫感染的免疫保护作用。方法制备pcDNA3-SjcTrx重组质粒,将30只雌性C57BL/6小鼠随机分为3组,每组10只:pcDNA3-SjcTrx核酸疫苗免疫组、pcDNA3空质粒对照组和攻击感染对照组。核酸疫苗免疫组每只小鼠经股四头肌注射100μg核酸疫苗,共注射3次,间隔2周。空质粒对照组每只小鼠在相应时间经股四头肌注射100μgpcDNA3空质粒,感染对照组则不注射任何质粒。于末次免疫后3周,每只小鼠经腹部感染(30±1)条日本血吸虫尾蚴。小鼠于攻击感染后42天剖杀,门脉灌注收集成虫,计数成虫数和肝内虫卵数。分别在免疫前、攻击感染前和小鼠剖杀前采血并分离血清,用ELISA检测血清中特异性IgG抗体。另取6只雌性C57BL/6小鼠经股四头肌注射核酸疫苗,分别于注射后24、48小时和72小时取肌肉注射部位局部组织制备冰冻切片,用免疫酶染色试验(IEST)检测注射局部组织抗原的表达情况,以注射pcDNA3空质粒者为对照。结果IEST结果表明该DNA疫苗在小鼠肌肉组织内表达,ELISA检测表明DNA疫苗免疫小鼠后产生明显的抗体(IgG)免疫应答,并诱导出对攻击感染的45.7%的减虫率和41.4%的肝组织减卵率(P<0.05)。结论日本血吸虫(大陆株)硫氧还蛋白DNA疫苗具有较好的免疫原性,在小鼠诱导出明显的免疫保护作用,可作为疫苗候选分子作进一步的研究。
曹建平徐馀信韩海勃宋光承李小红卢潍媛沈玉娟刘述先
关键词:日本血吸虫硫氧还蛋白DNA疫苗小鼠免疫
日本血吸虫嗜肌素样蛋白编码基因的克隆表达及其免疫原性研究被引量:2
2007年
目的克隆和表达日本血吸虫嗜肌素样蛋白(SjcMLP)编码基因,并研究其重组抗原的免疫原性。方法PCR扩增SjcMLP编码基因,并亚克隆入表达载体pQE30。将重组表达质粒pQE30-SjcMLP转入宿主菌E.coliM15,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,用金属Ni螯合物亲和层析柱(Ni-NTA)纯化SjcMLP重组蛋白(reSjcMLP)。纯化的reSjcMLP采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹试验(Western blot)作进一步分析。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定用reSjcMLP免疫C57BL/6小鼠血清中的抗体水平。结果SDS-PAGE分析表明获得的重组抗原的大小约24.8kDa,与预计的融合蛋白大小相符。Westernblot显示该重组抗原能被日本血吸虫尾蚴感染兔血清识别。用该重组抗原包被进行ELISA检测,免疫血清滴度高达1∶12800。但动物免疫试验结果减虫效果不明显。结论SjcMLP编码基因以可溶性融合蛋白的形式得到表达,动物免疫试验未诱导出明显的保护力。
童群波刘述先李小红徐馀信沈玉娟曹建平
关键词:日本血吸虫克隆免疫
血吸虫分子诊断抗原的研究被引量:1
2006年
血吸虫病仍然是我国严重的公共卫生问题之一。诊断抗原一直是血吸虫病诊断研究的热点。随着分子生物学技术的发展,血吸虫病的诊断抗原已由最初采用的粗抗原发展为组分抗原以及由基因重组的方法生产合成的重组抗原。该文综述了近年来血吸虫分子诊断抗原的研究进展。
周玮李小红曹建平
关键词:血吸虫病抗原分子
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