国家自然科学基金(30371272)
- 作品数：6 被引量：27H指数：4
- 相关作者：王峰牛俊奇丁艳华胡玉琳张凯宇更多>>
- 相关机构：吉林大学第一医院北京地坛医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 锁核酸与锁核酸核酶研究进展被引量：2
- 2005年
- 锁核酸(lockednucleicacid,LNA)是一种新型、特殊的双环状寡核苷酸衍生物,结构中核酸的2′-0,4′-C位通过不同的缩水作用形成氧亚甲基桥、硫亚甲基桥或胺亚甲基桥,形成了刚性的缩合结构,增加了磷酸盐骨架的局部结构的稳定性。LNA作为一种新的反义核酸,具有与DNA/RNA强大的杂交亲和力、反义活性、抗核酸酶能力、水溶性好和体内无毒性等特点。锁核酸核酶(LNAzyme)是脱氧核酶(DNAzyme)的一种衍生物,是一种经LNA修饰的DNAzyme,即在DNAzyme的两个结合臂上引入一个或几个LNA单体。LNA的引入大大增加了LNAzyme与底物的杂交亲和力,增强了切割反应的酶促活力,使LNAzyme较相应的DNAzyme切割效率明显提高,而且切割的底物既可以是短的RNA,也可以是较长的和结构较复杂的RNA。目前研究表明,作为以寡核苷酸为基础的基因治疗,LNA及LNAzyme最有希望成为以后的发展方向。
- 胡玉琳牛俊奇王峰
- 关键词：LNA反义核酸脱氧核酶DNAZYME寡核苷酸
- 特异性脱氧核酶对丙型肝炎病毒的体外消化作用被引量：2
- 2005年
- 目的 研究特异性脱氧核酶对丙型肝炎病毒(HCV)的体外消化作用。方法 设计3个分别 作用于 HCV RNA 5′-非编码区(5′-NCR)上157、168、173位点的脱氧核酶(DRz)，分别命名为 DRzl， DRz2，DRz3，均以5′-GGCTAGCTACAAcGA-3′为脱氧核酶的催化活性中心。用内切酶 Xba Ⅰ将含有 HCV 病毒序列的质粒 pCMV/T7-NCRC-△Luc 消化成线性，以此为模板体外转录出用[α-^(32)p]UTP 进行标 记的靶 HCV RNA。在37℃、pH 7．5、Mg^(2+)10 mmol/L 等条件下，将 HCV RNA(10 nmol/L)与3个脱 氧核酶(1 μmol/L)分别混合进行切割反应，并进一步比较不同 Mg^(2+)浓度下 DRz3的切割反应效率，反应 产物在8%变性聚丙烯酰胺凝胶上电泳分离并行放射自显影，应用凝胶成像分析仪评价脱氧核酶的切割效率。 结果 在设定反应条件下，3个脱氧核酶对 HCV 病毒均有切割活性。随着 Mg^(2+)浓度的增加，DRz3的切割 活性增强。结论 特异性的脱氧核酶可有效切割 HCV RNA 5′NCR 的 RNA，且切割效率与 Mg^(2+)浓度呈 正相关。
- 温晓玉鲍万国杨秀云田梅梅王峰牛俊奇
- 关键词：基因疗法脱氧核酶
- 乙型肝炎病毒前-C区1896和基本C区启动子区1762、1764双突变及YMDD变异对拉米呋啶治疗的影响被引量：11
- 2005年
- 目的 :研究乙型肝炎病毒前 - C区 G1896 A突变和基本 C区启动子区 A176 2 T、 G176 4 A双突变对拉米呋啶治疗的影响。方法 :采用直接测序法对服药前、中、后的血清标本的逆转录多聚酶区及前 - C、基本 C区启动子区进行检测。结果 :1前 - C区 G1896 A和基本 C区启动子区 A176 2 T、G176 4 A双突变在出现治疗中病毒学反弹与未出现治疗中病毒学反弹患者间及发生血清学转移与未发生血清学转换患者间差异无显著性 (P>0 .0 5 ) ;2 G1896 A突变在发生 YMDD变异和未发生 YMDD变异的患者间差异有显著性 (P<0 .0 5 ) ,发生 YMDD变异的患者很少伴有 G1896 A突变率低 (9% ) ;3出现治疗中病毒学反弹的患者 YMDD变异增加 ,与未出现治疗中病毒学反弹的患者比较差异有显著性 (P<0 .0 5 )。结论 :前 - C区 G1896 A和基本 C区启动子区 A176 2 T、 G176 4 A双突变对拉米呋啶治疗后出现的治疗中病毒学反弹和血清学转换没有影响 ;在 G1896 A突变株 YMDD变异减少 ;YMDD变异株的出现对治疗后出现的治疗中病毒学反弹有影响 ;YMDD变异可能是加剧肝细胞损伤引起治疗中病毒学反弹的因素之一。
- 张凯宇牛俊奇王王月丁艳华李玉香王峰
- 关键词：乙型肝炎病毒拉米呋啶
- 牛磺酸在大鼠肝星状细胞中的抗氧化作用被引量：4
- 2005年
- 目的 :探讨牛磺酸在体外培养的大鼠肝星状细胞 (HSC)的抗氧化作用。方法 :将新鲜分离的大鼠 HSC分别在普通培养基、含 2 5及 5 0 mm ol· L- 1 牛磺酸的培养基中孵育培养 ,检测三种培养基上清中脂质过氧化物(L PO)、羟脯氨酸的表达水平及三种培养基培养的 HSC表达转化生长因子 β1(TGF- β1)的水平。利用 Brd U法检测牛磺酸对 HSC增殖的影响。结果 :HSC活化后 ,各培养液上清中 L PO浓度均较活化前明显上升 (P<0 .0 5 ) ;在含 2 5及 5 0 m mol· L- 1 牛磺酸培养基中培养的 HSC与普通培养基培养的 HSC相比 ,L PO及羟脯氨酸的分泌水平明显下降 (P<0 .0 5 ) ;与普通培养基相比 ,两组牛磺酸培养基培养的 HSC表达 TGF- β1明显减少 (P<0 .0 5 ) ;5 0 m mol· L- 1牛磺酸可以明显抑制 HSC的增殖 (P<0 .0 5 )。结论 :牛磺酸在体外实验中可以有效抑制大鼠肝星状细胞的 L PO及羟脯氨酸的合成 ,并显示出显著的抑制 HSC增殖的作用 ,提示牛磺酸可能在抗肝纤维化治疗中作为抗氧化剂具有重要的治疗价值。
- 张一宁牛俊奇丁艳华王峰
- 关键词：牛磺酸转化生长因子Β羟脯氨酸肝星状细胞抗氧化作用
- 10-23脱氧核酶抑制乙型肝炎病毒基因表达的实验研究被引量：7
- 2005年
- 目的在细胞水平上探讨10-23脱氧核酶(10-23DRz)成为新型乙型肝炎基因治疗药物的可能性。方法设计合成针对乙型肝炎病毒(HBV) ayw1亚型前C/C区的2031位点的10-23DRz,并对其进行硫代磷酸化修饰,同时针对该位点设计一条未硫代化修饰的10-23DRz,经脂质体转染HepG22.2.15细胞(简称2.2.15细胞)中观察其对HBV基因表达的抑制效应。结果修饰与未修饰的10-23DRz作用于2.2.15 细胞后均可显著抑制乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎e抗原(HBeAg)的表达,最高抑制率分别可达93.75%和90.26%,有效抑制持续时间可达96 h,修饰后的脱氧核酶在细胞内对HBsAg和HBeAg表达的抑制作用时间长于未修饰的DRz,其抑制率的最高值低于未修饰的DRz,但两者明显高于作为对照的反义脱氧寡核苷酸。对2.2.15细胞内HBV DNA复制无明显影响,未见明显的细胞毒性作用。结论经过硫代化修饰的10-23DRz和未修饰的10-23DRz在2.2.15细胞模型中能高效阻断HBV DNA的表达,是一种高度特异性的、高效的基因治疗剂。
- 任娜王峰牛俊奇
- 关键词：基因疗法脱氧核酶HEPG2病毒基因表达
- 脱氧核酶及锁核酸核酶对2.2.15细胞中HBsAg和HBeAg表达的抑制作用被引量：4
- 2006年
- 目的:观察针对HBV前C/C区的脱氧核酶(DNAzyme)及锁核酸核酶(LNAzyme)对2.2.15细胞中HBsAg、HBeAg表达的抑制作用。方法:设计合成针对HBV前C/C区2031位点的10-23DNAzyme、点硫代修饰的10-23DNAzyme及LNAzyme。本实验设对照组和10-23DNAzyme组、点硫代修饰的10-23DNAzyme组、LNAzyme实验组。对照组包括空白对照组、单纯脂质体对照组、单纯10-23DNAzyme对照组、无关10-23DNAzyme对照组。观察在0.16、0.64、1.28、1.60及1.92μmol.L-1浓度下及12、24、36、48、60、72、84及96 h时间段对2.2.15细胞的HBsAg、HBeAg表达的抑制效应。结果:10-23DNAzyme及LNAzyme作用于2.2.15细胞后,可明显抑制HBsAg、HBeAg的表达,且抑制率LNAzyme明显高于点硫代修饰的10-23DNAzyme,而后者又明显高于未进行任何修饰的10-23DNAzyme组。LNAzyme及点硫代修饰的10-23DNAzyme对HBsAg的最高抑制率分别是(91.6±8.4)%和(78.4±2.0)%,对HBeAg的最高抑制率分别是(90.1±5.2)%和(76.4±4.8)%;在给药后12 h就表现出抑制效应,48 h达高峰,LNAzymes、点硫代修饰的10-23DNAzyme有效抑制时间分别是为84及72 h。其对2.2.15细胞未见明显的细胞毒性作用。结论:10-23DNAzyme及LNAzyme对2.2.15细胞具有明显的高效阻断HBV的HBsAg、HBeAg表达的作用,且LNAzyme优于DNAzyme,是一类特异的高效的抗HBV治疗剂。
- 胡玉琳牛俊奇王峰
- 关键词：2.2.15细胞
