“十五”国家科技攻关计划(2001BA705805)
- 作品数：4 被引量：10H指数：2
- 相关作者：田拥军龚劲松陆蒙吉杨东亮刘慎沛更多>>
- 相关机构：华中科技大学更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项湖北省科技攻关计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 重组G145R HBsAg亲和纯化方法的建立及其应用被引量：4
- 2007年
- 目的建立重组乙型肝炎病毒G145R变异HBsAg抗体亲和纯化方法。方法用抗-HBs单克隆抗体(D12- McAb)制备亲和层析胶,对2A8细胞(分泌G145R变异HBsAg)培养上清盐析物进行亲和纯化。采用SDS-PAGE、Western blot及ELISA,对纯化产物的纯度、特异性、含量和回收率进行鉴定,并与同法纯化的HBsAg阳性血清及r-wHBsAg提取物进行比较。结果D12-McAb对重组真核表达G145R变异HBsAg、HBsAg阳性血清及r-wHBsAS三者具有相似的亲和性,产物纯度分别为90.3%、95.2%和93.1%,回收率分别为43.3%、72.0%和66.4%。结论已成功地建立了重组G145R变异HBsAg抗体亲和纯化方法,为G145R变异以及其他HBV免疫逃逸变异感染的深入研究奠定了重要的技术基础。
- 张波李方和龚劲松田拥军张春燕李时君陈妍黄永国杨东亮
- 关键词：乙型肝炎表面抗原单克隆抗体
- 土拨鼠肝炎病毒和乙型肝炎病毒的核心蛋白存在共同线性B淋巴细胞表位
- 2007年
- 目的寻找并证实土拨鼠肝炎病毒核心抗原（WHcAg）和HBcAg存在共同的B淋巴细胞表位。方法用变性重组WHcAg和HBcAg免疫Balb/c小鼠以制备单克隆抗体；用单克隆抗体对WHcAg和HBcAg进行ELISA、Western blot及免疫组织化学对比分析,同时用该抗体对WHcAg和HBcAg进行表位分析,并在氨基酸水平进行比对。结果经过ELISA、Western blot、免疫组织化学对比分析,制备的单克隆抗体中有2株与HBcAg和WHcAg有交叉反应,而且灵敏度和特异性相似；针对的抗原表位分别位于HBcAg和WHcAg的1～8位氨基酸和125～140位氨基酸。结论WHcAg和HBcAg存在2个共同的线性B淋巴细胞表位,分别位于1～8位和125～140位氨基酸。
- 张振华王蓉田拥军李磊夏剑波龚劲松陆蒙吉龚非力杨东亮
- 关键词：肝炎核心抗原乙型肝炎病毒B淋巴细胞土拨鼠
- 乙型肝炎表面抗原主要亲水区Ⅱ的抗原性被引量：2
- 2007年
- 目的研究HBsAg主要亲水区Ⅱ的4个氨基酸变异对HBsAg抗原性的影响。方法定点突变HBsAg主要亲水区Ⅱ的4个氨基酸对应的s基因（P120T、C121S、K122I和T123N），构建4个真核表达重组质粒。用重组质粒和表达G145RHBsAg质粒体外瞬时转染HepG2细胞。4种抗体和7种国产HBsAgELISA诊断试剂盒检测转染细胞上清液和细胞裂解液中变异HBsAg的免疫反应性，免疫荧光检测单克隆抗体与转染细胞内变异HBsAg的免疫反应性。结果成功构建了表达HBsAg主要亲水区Ⅱ的4个氨基酸变异的重组质粒，P120T、C121S、K122I和T123N变异HBsAg的免疫反应性比野生HBsAg低，T123N变异导致HBsAg存在分泌障碍。结论HBsAg主要亲水区Ⅱ的4个氨基酸对维持HBsAg的空间构象和抗原性具有重要作用。
- 田拥军张正茂夏昶刘慎沛余源黄红平杨燕陆蒙吉杨东亮
- 关键词：乙型抗原性
- 15种变异体乙型肝炎表面抗原的抗原性被引量：4
- 2007年
- HBV s基因突变可引起HBsAg氨基酸变异，并导致抗原性改变。流行病学研究表明其最常见的变异位点是Gly145Arg。此位点的变异株可以逃避乙型肝炎疫苗的免疫预防，而且用目前针对野生株“a”决定簇的单克隆抗体制备的诊断试剂不能测及，造成漏检。我们选8种HBsAg诊断试剂及5种华中科技大学同济医学院附属同济医院临床免疫研究室制备的抗-HBs单克隆抗体检测15种HBsAg变异体的抗原性，了解不同变异体对其抗原性的影响。
- 田拥军张振华覃莉刘慎沛龚劲松张正茂陆蒙吉杨东亮
- 关键词：肝炎病毒乙型抗原单克隆
