福建省自然科学基金(2001F003)
- 作品数：11 被引量：49H指数：3
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- 相关机构：福建医科大学武汉大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 球形与螺旋形幽门螺杆菌基因表达差异的研究被引量：18
- 2003年
- 目的 :从基因转录水平了解球形幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,Hp)基因表达的变化。 方法 :幽门螺杆菌标准株NCTC 116 37和 2株临床分离株 ,经抗生素—灭滴灵诱导球变。提取等菌量螺旋形和球形Hp的RNA ,RT PCR扩增Hp 2 5种基因 ,这些基因包括毒力基因 (kat、aphA、rdxA、frxA、cysS、ureB、glmM、cagA、vacA、fldA、iceA1、hpaA、fliD、napA、oipA、alpAB、babB、hopZ) ;看家基因 (scoB、atpD、glnA、recA)和功能不明的外膜蛋白基因 (hopW、hopX)。扩增产物经分子定量成像系统进行扫描定量。 结果和结论 :等菌量的球形HpRNA量比螺旋形Hp减少。NCTC 116 37、F4 4和F4 9菌株的螺旋菌分别有 2 5、2 0、19个基因RT PCR阳性 ,对应的球形菌相应的基因RT PCR也为阳性。定量分析结果表明 :被检测的基因在球形菌中的表达均比螺旋菌降低。提示球形菌致病性的降低与基因的低表达有关。 3株球形菌不同基因表达的变化并不完全一致 ,表达量变化较小且各菌间较一致的是glmM、oipA、glnA ;表达量变化较大且菌间较一致的基因是 :napA、sodB、recA、fliD。
- 佘菲菲丁惠林建银刘君炎陈月秀
- 关键词：球形幽门螺杆菌基因表达
- 幽门螺杆菌致病因子OipA及其研究进展
- 2006年
- 李妮佘菲菲
- 关键词：OIPA基因表达
- 球形幽门螺杆菌对SGC-7901细胞增殖的影响被引量：8
- 2004年
- 目的 :了解球形幽门螺杆菌对体外培养细胞增殖的影响。方法 :采用抗生素诱导幽门螺杆菌标准菌株NCTC 116 37球变 ,将弯曲形和球形菌的菌悬液 (1× 10 8个 /ml )作 5倍梯度稀释 ,而后分别加入胃癌上皮细胞SGC 790 1,共孵育 3d后 ,用MTT法检测SGC 790 1细胞增殖的情况。结果 :高浓度的弯曲形和球形幽门螺杆菌 (>8× 10 7个 /ml )可明显抑制细胞的增殖 (P <0 .0 5 ) ;低浓度的球形幽门螺杆菌 (<1 2 8× 10 5个 /ml )可明显促进细胞的增殖 (P <0 .0 5 )。结论 :球形幽门螺杆菌在体外可影响SGC 790 1细胞的增殖。
- 陈豪张静佘菲菲陈月秀
- 关键词：球形幽门螺杆菌SGC-7901细胞增殖
- OipA DNA疫苗抗螺旋形和球形幽门螺杆菌免疫保护作用及其机制被引量：2
- 2006年
- 目的探讨pcDNA3．1-oipA DNA疫苗在抗螺旋形与球形幽门螺杆菌(Hp)感染中的作用及其机制。方法抽提并纯化可表达OipA蛋白的重组质粒pcDNA3．1-oipA,以金粉包裹后,用基因枪接种BALB／c小鼠,5μg/只,接种2次,以pcDNA3．1(空载组)作对照。对免疫小鼠进行:(1)免疫保护实验: 于末次免疫后8周,分别给予螺旋形及球形HpSS1攻击4次,于末次攻击4周后取胃组织做细菌学(组织尿素酶试验、细菌培养)及病理学检测。(2)小鼠免疫指标检测:分别于末次免疫后2、8、12周采集小鼠血清,用ELISA法检测其抗Hp OipA IgA、IgG、IgG1抗体。于末次免疫后12周,取脾细胞,用ELISA法检测 IFN-γ、IL-2的含量;用流式细胞术检测CD4^+／CD8^+T淋巴细胞的比值。结果以螺旋形及球形Hp攻击的免疫小鼠,快速尿素酶实验阳性率分别为20％和10％;细菌培养阳性率分别为60％和50％,与空载组比较P<0．05。空载组小鼠胃黏膜均出现轻度或重度糜烂,而以螺旋形Hp攻击的实验组小鼠50％胃黏膜正常,以球形Hp攻击的实验组小鼠60％胃黏膜正常,与空载组比较P<0．050小鼠免疫指标检测结果:免疫后8周,产生了抗OipA的特异性IgA、IgG、IgG1抗体,抗体滴度比对照组高2倍以上;脾细胞中 CD4^+／CD8^+T淋巴细胞的比值升高;脾细胞培养上清液IFN-γ、IL-2的含量明显高于对照组(P<0．05)。结论pcDNA3．1-oipA DNA疫苗能有效诱导免疫小鼠产生体液与细胞免疫并使小鼠兼具一定的抗螺旋形及球形Hp感染的能力。
- 佘菲菲吴小茜陈豪陈月秀
- 关键词：幽门螺杆菌OIPADNA疫苗免疫保护
- 幽门螺杆菌cagA、oipA、iceA1基因的检测及其意义被引量：20
- 2004年
- 〔目的〕检测分离自胃炎、胃溃疡患者的幽门螺杆菌 (Hp)cagA、oipA、iceA1基因 ,了解这些基因与消化性疾病的关系。〔方法〕取 163份临床胃活检标本 ,用布氏平板分离培养Hp ,分离培养出来的细菌 ,用聚合酶链反应 (PCR)方法扩增cagA、oipA、iceA1基因片段 ,用卡方检验进行统计学分析。〔结果〕163份标本中检出Hp 5 8株 ,检出率为 3 5 .6%。ca gA基因的阳性率为 75 .9%(4 4 5 8) ,其中胃炎 66.7%(2 8 42 ) ,胃溃疡 10 0 %(16 16) ;oipA基因的阳性率为 46.6%(2 7 5 8) ,其中胃炎 2 6.2 %(11 42 ) ,胃溃疡 10 0 %(16 16) ;iceA1基因的阳性率为 3 1.0 %(18 5 8) ,其中胃炎 2 1.4%(9 42 ) ,胃溃疡 3 3 .3 %(9 16)。卡方检验分析表明胃溃疡患者HpcagA、oipA、iceA1阳性率均显著高于胃炎患者。〔结论〕HpcagA、oipA、iceA1毒力基因在胃溃疡患者的检出显著高于胃炎患者。
- 张静佘菲菲陈月秀陈豪
- 关键词：幽门螺杆菌CAGAOIPA基因检测HP
- 幽门螺杆菌glmM DNA重组质粒的构建及体外表达
- 2006年
- 目的构建幽门螺杆菌(Hp)pVAX1-glmMDNA重组质粒,体外转染SGC-7901细胞并鉴定其表达蛋白的抗原性。方法RT-PCR方法从国际标准株NCTC11637中获取glmM全长基因,克隆插入T载体。测序后经酶切、连接反应将glmM的开放读码框架定向克隆入真核表达载体pVAX1,酶切初步鉴定后测序确认。通过脂质体法将pVAX1-glmMDNA重组质粒转染SGC-7901细胞,检测其转染效率,确定转染成功后RT-PCR法检测glmM在转录水平的表达,ELISA法鉴定表达蛋白的抗原性。结果DNA测序结果显示扩增出的glmM全长基因与GenBank公布的HpglmM序列有96%的同源性。PCR、酶切和测序结果证实glmM目的基因成功克隆入真核表达载体pVAX1。重组质粒转染的细胞经RT-PCR扩增获得1.4kb片段,与目的基因大小相符。ELISA结果显示重组质粒转染细胞的超声破碎物及培养上清液中抗原的滴度比对照组高2倍以上。结论成功构建了pVAX1-glmMDNA重组质粒,其表达蛋白具有良好的抗原性,为进一步研究其抗Hp感染的效果及制备相应有效DNA疫苗奠定基础。
- 吴小茜佘菲菲丁惠张静陈月秀
- 关键词：幽门螺杆菌
- 在真核细胞中表达的幽门螺杆菌UreC,OipA抗原性的检测及其对细胞的作用被引量：1
- 2005年
- 目的:研究幽门螺杆菌(Hp)UreC、OipA基因重组子转染胃上皮细胞后表达产物的抗原性及其对胃上皮细胞的作用,为两种毒力因子DNA疫苗的研制提供可行性依据及安全性指标。方法:用RTPCR方法从国际标准株NCTC11637中获取UreC、OipA全长基因,克隆入pGEMTEasy载体并测序,以重组T载体为模板,将两种基因的开放读码框架分别定向克隆入pcDNA3.1载体;获得的重组子转染SGC7901细胞,筛选耐潮霉素的细胞克隆,用RTPCR及Immunoblot方法检测细胞内UreC、OipA蛋白的表达和抗原性;用荧光染色技术、MTT、流式细胞术分别检测UreC、OipA对细胞表型、增殖及凋亡的影响。结果:SoipA、SureC细胞(分别转染OipA、UreC重组子)表达相应的产物且具有抗原性。荧光显微镜下观察SoipA、SureC细胞未见明显形态学改变;用MTT法检测细胞增殖:SoipA、SureC细胞与SpcDNA3.1细胞(转染pcDNA3.1)比较,生长增殖无显著性差异(P>0.05),流式细胞技术检测细胞凋亡结果:SoipA和SureC的凋亡率与SpcDNA3.1比较无显著性差异(P>0.05)。结论:OipA、UreC在培养细胞内的表达产物具有抗原性且对细胞的功能无影响,可考虑用于制备DNA疫苗。
- 张静佘菲菲陈豪陈月秀
- 关键词：幽门螺杆菌OIPA细胞增殖基因转染
- 幽门螺杆菌oipA DNA重组质粒的构建及免疫保护作用被引量：3
- 2006年
- 目的:探讨幽门螺杆菌(Hp)oipADNA重组质粒在防御Hp感染中的作用。方法:将HpoipA基因的开放读码框架定向克隆入pVAX1载体,获得的重组子pVAX1oipA转染SGC7901细胞,用RTPCR及ELISA方法检测细胞oipA转录及翻译水平的表达。抽提纯化重组质粒pVAX1oipA,经肌肉注射免疫BALB/c小鼠(100μg/只)每周1次,共3次,以质粒pVAX1(空载组)和生理盐水(空白组)做对照,分别于末次注射1个月和2个月后ELISA法检测血清中相应抗体。在证实有免疫应答的基础上,以HpSS1攻击小鼠(0.5×1090.5ml/只)3次,于末次攻击4周后,取胃黏膜组织作细菌学(包括胃黏膜快速尿素酶试验、细菌培养鉴定)和组织学检测。结果:pVAX1oipA转染的SGC7901细胞在转录水平和翻译水平均有相应的表达;免疫小鼠产生抗oipA抗体。免疫小鼠经细菌攻击后,实验组、空载组和空白组胃黏膜组织快速尿素酶实验阳性率分别为0(0/10)、90%(9/10)和100%(5/5),细菌培养阳性率分别为20%(2/10)、90%(9/10)和100%(5/5),组织学检测结果:空载组和空白组小鼠胃黏膜均出现轻度或重度糜烂,而实验组小鼠胃黏膜80%(8/10)正常,显示oipADNA重组子具有免疫保护作用。结论:oipADNA重组子能有效诱导抗Hp保护性免疫反应。
- 吴小茜佘菲菲丁惠张静陈月秀
- 关键词：幽门螺杆菌OIPADNA免疫保护
- 幽门螺杆菌ureB基因转染胃上皮细胞及其对细胞的作用被引量：1
- 2005年
- 研究幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,Hp)ureB基因重组子转染胃上皮细胞后对胃上皮细胞的作用。用PCR方法从Hp标准株NCTC116 37中获取ureB全长基因 ,将其开放读码框架定向克隆入真核表达载体pcDNA3 1;获得的重组子转染SGC 790 1细胞 ,筛选耐潮霉素的细胞克隆 ,用RT PCR方法检测细胞内ureB基因在转录水平的表达 ;分别用荧光染色技术、MTT、流式细胞术检测UreB对细胞表型、增殖、凋亡及细胞周期的影响。UreB阳性表达的细胞 (SureB)胞膜出芽、细胞皱缩 ;用MTT法检测细胞增殖 ,结果表明 ,SureB细胞与SpcDNA3 1细胞比较 (pcDNA3 1转染的细胞 ) ,生长增殖无显著性差异 (P >0 0 5 ) ,流式细胞术检测细胞凋亡结果显示 ,SureB的凋亡率显著高于SpcDNA3 1(P值为 0 0 0 7) ;细胞周期分析显示 ,SureB细胞有S期比率增高、G2 M、G0 G1 期比率下降的趋势。
- 张静佘菲菲陈月秀陈豪
- 关键词：幽门螺杆菌UREB细胞增殖细胞凋亡基因转染
- 球形幽门螺杆菌感染BALB/c小鼠动物实验研究被引量：2
- 2006年
- 目的建立球形幽门螺杆菌(Hp)感染BALB/c小鼠的疾病模型并进行初步研究。方法禁食12 h后,分别于第0,3,6,9 d共4次以抗生素诱变后的球形Hp对SPF级BALB/c小鼠给予灌胃处理。于末次灌胃4周后禁食36 h取胃组织作细菌学(组织尿素酶试验、细菌培养)和病理学检测。结果球形Hp灌胃4周后,实验组BALB/c小鼠组织尿素酶试验阳性率达80%、Hp培养阳性率达100%,病理学检测结果显示70%实验组小鼠胃黏膜出现糜烂,与生理盐水对照组比较均有显著意义(P<0.05)。结论成功建立了球形Hp-BALB/c小鼠感染的疾病模型,证实了其在实验动物体内的可致病性。
- 吴小茜佘菲菲陈豪
- 关键词：螺杆菌感染小鼠
