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国家自然科学基金(30671556): 作品数：16 被引量：89H指数：3; 相关作者：张训海路振香胡元庆王珏王旋更多>>; 相关机构：安徽科技学院家禽疫病防控监测安徽省重点实验室南京农业大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金安徽省高校省级自然科学研究项目安徽省重点科研计划项目更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>

抗NDVWF_(00)C株单克隆抗体的制备及其异同性与识别表位分析被引量：1: 2011年; 为分析不同禽源NDV毒株间囊膜蛋白抗原性的差异,作者以超滤纯化的鸡源NDV强毒WF00C株全病毒为免疫原制备NDV特异性单抗,并在其一般生物学特性研究和差异性比较的基础上,通过对其抗体可变区同源性比较及其基因家族中的归属性分析,进一步分析各株单抗的异同性;通过差异性作用位点区域氨基酸序列的分析与融合表达短肽反应性的验证,确定其差异表位关键性氨基酸位点。本研究中共鉴定筛选出了6株单抗:1B6、4B4、4E6、4E11、5H4和5H9,除4B4和5H4外,其余均具有血凝抑制(HI)活性和对WF00C株NDV的中和活性,但能够识别线性表位的1B6和4E11却对2株鸽源NDV无HI活性;单抗的异同性分析显示,1B6与4E11、4B4与5H4的抗体轻重链可变区基因家族来源均相同,1B6与4E11轻重链互补决定区氨基酸分别仅5个和1个氨基酸不同,而4B4与5H4则完全相同,4E6和5H9的基因来源和互补决定区氨基酸序列均差异较大;在NDV HN 14线性中和表位上的aa347位有6种氨基酸变化,鸽源毒株在此位点主要为甘氨酸(26/27),而aa349位有3种变化,其中谷氨酸是鸽源毒株的特有指征;1B6和4E11所识别的差异性氨基酸E347和D349同为该表位关键性氨基酸。本研究所获得的3组生物学特性不同的6株抗NDV单抗,可归属为不同质的4种单抗;NDV HN aa349为E是鸽源毒株的特有指征,同时该位点也是线性中和表位上又一新的关键性氨基酸位点。; 赵磊张训海王旋孙涛龚争鲍春晖; 关键词：新城疫病毒单克隆抗体表位

信鸽新城疫病毒P/Anhui/1/09株囊膜糖蛋白基因的遗传进化及氨基酸差异性位点分析: 2013年; 为分析流行于信鸽群中新城疫病毒致病株P/Anhui/1/09的分子遗传特性及其囊膜糖蛋白的差异性,采用RT-PCR法扩增其F和HN基因开放阅读框(ORF),并与已公布的主要代表性毒株序列进行遗传进化分析及615个全长F基因和480个全长HN基因推导氨基酸序列比对分析,同时对P/Anhui/1/09株进行型内遗传关系分析。结果显示:P/Anhui/1/09株F和HN基因开放阅读框长度分别为1 662 bp和1 716 bp,GenBank登录号分别为JQ290284和JQ305097,其F基因与NDV05-029、PG/CH/JS/1/06、CH/98-1鸽源毒株亲缘关系最近,同源率在98.2%～99.5%,同属基因VIb亚型,但与传统疫苗株LaSota、V4、B1和Mukteswar的遗传距离较远,同源率仅在84%～86.3%。HN基因ORF进化树分支拓扑结构与F基因相似。型内遗传关系分析显示,VIb亚型可进一步为VIb1～VIb5 5个进化分支,其中我国分离株都位于VIb1和VIb4进化分支中。氨基酸序列比对及糖基化位点分析显示,P/Anhui/1/09的F蛋白裂解位点氨基酸序列为112K-R-Q-K-R-F117,与NDV强毒株分子特征相符,并发现在七肽重复区旁497位新增一个潜在N-糖基化位点,除2个基因III型日本分离株(Miyadera和MIY/51)外,所有含497位新增糖基化位点的毒株都位于VIb1分支。包含P/Anhui/1/09株在内的大部分鸽源毒株在F蛋白aa132S(融合肽区)、aa259H和HN蛋白aa3H(胞质区)、aa122R、aa347G、aa349E存在一定特征性。; 赵磊张训海王旋龚争张怀康陶裴裴王栋李尚德; 关键词：信鸽新城疫遗传进化

鸡源NDV WF00C株F基因的测序与蛋白特性分析: 2009年; 用鸡源新城疫病毒凤阳分离株WF00C对9-10日龄SPF鸡胚的尿囊腔接种,成功增殖了该病毒,采用一步法RT-PCR技术扩增WF00C病毒的F基因,获得了1条1.7kb的特异性条带。用PCR产物直接测序。测序结果表明,扩增片段大小为1782bp,含有1个1662bp的开放性阅读框,编码554个氨基酸。核苷酸同源性分析表明：WF00C株与国内外其他NDV F基因的同源性为84.8%-97.5%,其中与国内标准强毒株F48E9的同源性为87.1%,说明WF00C与国内外的传统毒株有较大变异。与Taiwan95株和J株的同源性为94.1%和97.5%,说明WF00C与Taiwan95株和J株亲缘关系较近,具有较高的相似性。F蛋白裂解位点的氨基酸顺序为112Arg-Arg-Gln-Lys-Arg-Phe117,表明为NDV的强毒株。蛋白疏水性和抗原性分析表明与标准强毒株相比没有太大的变异。; 胡元庆路振香张训海金光明陈会良; 关键词：F基因病毒毒力同源性分析

鸡鸭鹅新城疫病毒毒力及生物学特性的研究被引量：2: 2016年; 为了测定鸡、鸭、鹅新城疫病毒的毒力强弱。测定其血凝价、血凝素热稳定性试验、血凝解脱试验、氯仿敏感性试验、耐酸性试验,并对3株病毒进行理化特性测定;测定其1日龄雏鸭脑内接种致病指数、6周龄鸭静脉接种致病指数和对13日龄非免疫鸭胚的半数感染量(EID_(50))。结果鸡、鸭、鹅新城疫病毒的血凝价依次为2~9、2~8、2~8;血凝素热稳定性指数分别为5、15、15 min;血凝均为快速解脱型;对氯仿敏感;对p H值3.0、p H值5.0均敏感;1日龄雏鸭脑内致病指数分别为0.59、0.84、1.04;6周龄静脉接种致病指数均为0;对13日龄鸭胚的半数感染量(EID_(50))分别为:10^(-5.31)/0.1 m L、10^(-6.5)/0.1 m L,10^(-7.79)/0.1 m L。表明鸡新城疫为中等偏弱毒力毒株,而鸭、鹅新城疫病毒均为中等毒力毒株。; 路振香张训海郭伟娜杨平徐义巧刘畅; 关键词：新城疫病毒生物学特性毒力测定

鹅副粘病毒WF_(01)G株F基因的测序与蛋白特性分析被引量：2: 2009年; 用鹅副粘病毒WF01G分离株进行9-10日龄SPF鸡胚尿囊腔接种,成功增殖了该病毒,采用一步法RT-PCR技术扩增WF01G病毒的F基因,获得了1条长约1.7 kb的特异性条带。对PCR扩增产物测序。结果表明,扩增片段大小为1782 bp,含有1个1662 bp的开放性阅读框,编码554个氨基酸。核苷酸同源性分析表明：WF01G株与其他7株鹅副粘病毒的同源性为84.8%-98.8%,与国内外其他NDV F基因的同源性为84.7%-93.8%,其中与国内标准强毒株F48E9的同源性为86.8%,说明WF01G与国内外的传统毒株有较大变异。与Tai-wan95株的同源性为93.8%,说明WF01G与Taiwan95株亲缘关系较近,具有较高的相似性。F蛋白裂解位点的氨基酸顺序为112Arg-Arg-G ln-Lys-Arg-Phe117,表明为副粘病毒强毒株。蛋白疏水性和抗原性分析表明与标准强毒F48E9株相比没有太大的变异。; 胡元庆张训海路振香金光明; 关键词：鹅副粘病毒 F基因病毒毒力同源性分析

鹅新城疫病毒P基因的RNA编辑及其相关蛋白的分子特征: 2009年; 应用RT-PCR方法对鹅新城疫病毒安徽分离株WF00GP基因进行了RNA编辑分析,发现WF00GP基因在保守的编辑位点上插入一个G,使得P基因增加编码V蛋白,而且它的最大ORF的长度为1188 bp,编码395个氨基酸的P蛋白。WF00G株和参考毒株的P基因的同源性和系统发育分析表明,WF00G株与水禽源毒株NA-1、ZJ1、FP1/02、PX2/03、Duck/1/05和SF02等亲缘关系较近,与传统疫苗株或弱毒株HB92、LaSota和Clone30以及F48E9等的亲缘关系相对较远。进一步对其V蛋白羧基端序列分析发现,虽然编辑位点氨基酸序列(132KKG134)和羧基端的5个Cys残基位点是高度保守的,但是V蛋白C末端氨基酸存在较大变异,APMV-1毒株V蛋白羧基端氨基酸的突变呈现"基因型一致性"。; 钟登科魏建超张训海黄兵于可响路振香王立克; 关键词：P基因 RNA编辑

鸭副粘病毒人工感染鸭的病理组织学研究被引量：3: 2010年; 为研究鸭副粘病毒致病机理及病理组织变化。本研究将20日龄非免疫健康建湖麻鸭60羽,随机均分为试验组和对照组。试验组鸭皮下接种1:5稀释的鸭副粘病毒WF00D株SPF鸡胚绒尿液0.5mL/羽,对照组鸭皮下注射等量灭菌生理盐水,并分别置于25℃隔离环境下饲养与观察。于接种后第4d、8d、12d、16d和第20d,两组均随机取4羽鸭进行剖检,观察各器官的大体病变,同时,观察病理组织学变化。结果显示:试验组鸭除个体发育呈明显差异外,内脏器官在观察期间均有较轻微的炎性水肿或出血;病理组织学变化主要为器官充血或出血、炎性细胞浸润、细胞颗粒变性;超微病理学变化主要为细胞器变性,胞浆局灶性坏死、线粒体空泡化、粗面内质网脱颗粒。研究表明其病理演变过程具有一定的规律性。本研究为鸭副粘病毒流行规律的探究及致病机理的深入研究提供了依据。; 张训海王珏李升和龚争王旋钟登科胡元庆张伟; 关键词：病理组织学

异源新城疫病毒感染对雏鸭组织抗氧化酶活性的影响被引量：1: 2008年; 选择隔离饲养至20日龄的健康雏鸭120只,随机分为4组,Ⅰ组为对照组,皮下注射0.5mL/只灭菌生理盐水,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组分别皮下注射0.5mL/只1∶5稀释的鸡源、鹅源和鸭源新城疫病毒SPF胚液,并分别置于25℃隔离环境下饲养与观察。分别于感染后4、8、12、16d每组随机抽取雏鸭7只颈静脉放血致死,采集心、肝、脾、肺及肾组织,制成10%的组织匀浆液,测定超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性或含量,探讨异源新城疫病毒感染对雏鸭组织自由基代谢的影响。结果表明,感染异源新城疫病毒的雏鸭组织SOD、CAT、GSH-Px活性和MDA含量变化不同,感染鸭源和鹅源新城疫病毒的雏鸭组织抗氧化酶的活性变化明显,而感染鸡源新城疫病毒的则变化不明显。这说明不同来源的新城疫病毒对雏鸭的感染性有一定差异。; 顾有方操志锋陈会良王珏路振香李文超胡元庆张训海; 关键词：新城疫病毒抗氧化酶雏鸭

异源副粘病毒感染对雏鸭血清抗氧化酶活性的影响被引量：1: 2018年; 以雏鸭为试验对象,研究不同来源的副粘病毒感染对雏鸭血清中抗氧化酶活性的影响。选择20日龄健康雏鸭100只,随机分成Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组,Ⅰ组为对照组,皮下注射0.5 mL/只生理盐水,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组分别皮下注射0.5 mL/只稀释的鸡源、鹅源及鸭源副粘病毒SPF胚液。分别在攻毒后7、14、21、28 d时,随机抽取Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组雏鸭各5只进行血液采集与血清分离,测定雏鸭血清中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)及丙二醛(MDA)的活性与含量,研究异源副粘病毒感染对雏鸭血清中抗氧化酶活性的影响,以及脂质过氧化程度与抗氧化酶活性的变化趋势。结果表明,在攻毒后不同时间内,感染异源副粘病毒的雏鸭血清中的SOD、CAT、GSH-Px活性和MDA活性与含量变化显著不同,揭示异源副粘病毒对雏鸭血清自由基代谢产生了不同程度影响,脂质过氧化程度与SOD、GSH-Px活性密切相关。; 周明辉顾有方; 关键词：副粘病毒抗氧化酶雏鸭

不同禽源副黏病毒分离株F基因的克隆与序列分析被引量：1: 2010年; 分别对鸡源、鸭源、鹅源新城疫病毒（NDV）强毒分离株（WF00C、WF00D、WF00G）的F基因进行RT-PCR扩增、克隆和序列测定,并对其核苷酸和推导氨基酸序列进行分析。结果表明,各分离株F基因均含1个完整的开放阅读框（ORF）,全长为1 662 bp,编码553个氨基酸,有6个潜在的糖基化位点,裂解位点区的氨基酸序列均为112R-R-Q-K-R-F117,与强毒株特征相符,具有第101位的K（赖氨酸）和121位的V（缬氨酸）,符合基因Ⅶ型NDV特征;WF00C株有13个半胱氨酸（Cys）残基,WF00D株和WF00G株各有12个Cys残基;在限制性内切酶（RE）位点（nt334~1 682）的分布上,3个毒株均存在多数鹅源分离株特有的973 nt和1 249 nt RsaⅠ位点;WF00D株与WF00C株、WF00G株以及GenBank的15株各基因型代表株的F基因编码区同源性进行比较,其核苷酸序列同源性为84.7%~99.3%,推导的氨基酸序列同源性为88.4%~98.9%;3个分离株间的同源性较高,其与ZJ1、SF02和NA_1等鹅源毒株之间差异较小,而与LaSota、F48E9等毒株之间差异明显。根据NDV系统发育进化树、酶切位点分析以及基因分型结果,证明它们的基因型均为Ⅶd亚型。; 王旋黄兵张训海于可响钟登科宋敏训龚争赵磊; 关键词：新城疫病毒 F基因

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