国家自然科学基金(81171959)
- 作品数：3 被引量：10H指数：3
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- 构建稳定干扰RN181的RKO细胞系并研究其生长现象被引量：8
- 2014年
- 目的构建稳定干扰RN181的重组RKO细胞系,并研究下调RN181水平后,重组细胞系在体内外生长的规律。方法 RN181干扰慢病毒感染RKO细胞系,荧光与Western blotting鉴定该重组细胞系,CCK-8法、平板克隆实验研究该重组细胞系在体外增殖规律,裸鼠成瘤实验研究其在体内增殖情况。结果重组细胞系荧光良好,Western blotting证实重组细胞干扰组与对照组的RN181表达量差异有统计学意义(P<0.05)。体外细胞生长曲线实验与平板克隆结果显示,干扰组与对照组之间增殖能力差异无统计学意义(P>0.05)。干扰组的瘤体生长速度明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建稳定干扰RN181的肠癌细胞系,并证实了下调RN181对RKO细胞在体外生长无影响但在体内能显著抑制细胞生长。
- 张贤王穗海彭迎霞高彦君张雪峰孙政李纪良
- 关键词：结直肠癌
- 稳定过表达、干扰RN181的MHCC97L细胞系建立及RN181功能的初步研究被引量：5
- 2013年
- 目的构建过表达和干扰RN181基因的肝癌MHCC97L重组细胞系,并研究RN181对该细胞体外增殖的影响。方法基于基因克隆技术,构建plncx2-GFP-IRES/RN181重组载体,常规鉴定后,与pVSV-G共转染GP2-293细胞包装逆转录病毒。该病毒与RN181干扰慢病毒分别感染MHCC97L细胞,流式分选表达绿色荧光的细胞,RT-PCR、Western blotting鉴定后,CCK-8实验和软琼脂克隆形成实验检测细胞增殖情况。结果重组载体构建成功,重组细胞荧光良好,RT-PCR、Western blotting分别证实重组细胞中RN181的mRNA和蛋白表达水平在重组细胞系间均出现差异有统计学意义(P<0.05)。增殖实验显示RN181上调后细胞生长减慢,克隆数也显著少于对照组(P<0.05),而RN181干扰后上述现象可得到逆转。结论成功构建了过表达和干扰RN181的MHCC97L重组细胞系,初步证实了RN181在体外对MHCC97L细胞增殖的抑制作用。
- 王小波彭迎霞张贤尹江丽李明
- 关键词：基因克隆
- RN181过表达影响SMMC7721肝癌细胞凋亡的初步研究被引量：6
- 2014年
- 目的构建过表达RN181基因的SMMC7721重组细胞株,研究RN181对顺铂诱导肝癌细胞凋亡的影响,并初步探讨其凋亡机制。方法构建高表达RN181逆转录病毒感染SMMC7721细胞,显微镜观察其细胞株荧光强弱,Western blot鉴定RN181蛋白表达水平;采用DAPI染色法、Western blot检测RN181对顺铂诱导SMMC7721细胞株凋亡的变化情况。结果重组细胞株荧光表达良好,7721RN181细胞中RN181蛋白表达量高于其对照,差异有统计学意义(P<0.05)。DAPI染色法观察到在顺铂作用下,7721RN181的细胞凋亡阳性率高于其对照,差异有统计学意义(P<0.05);Western blot检测到7721RN181的activated caspase-3、cleaved PARP的表达量高于对照组,procaspase-6,pro-caspase-8的表达量低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 RN181表达能促进肝癌细胞的凋亡,其可能通过参与死亡受体凋亡途径来促进肝癌细胞凋亡。进而推测RN181基因可能成为肝癌靶向治疗的一个新靶点。
- 彭迎霞张贤张雪峰高彦君王穗海李纪良
- 关键词：顺铂细胞凋亡
