广东省自然科学基金(7005213)
- 作品数：7 被引量：20H指数：2
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- 海马神经干细胞体外诱导分化过程中延迟整流钾通道的电生理特性被引量：1
- 2008年
- 目的研究大鼠海马源神经干细胞（NSC）分化前及其体外诱导分化的神经元样细胞在不同发育阶段延迟整流钾电流（IDR）的电生理特性。方法利用无血清培养、单细胞克隆技术，体外培养SD大鼠海马组织源NSC。应用膜片钳技术全细胞模式记录IDR的电生理特性。结果IDR的电流密度在NSC分化前和体外分化（DIV）0—6d分别为45pA／pF±4pA／pF和56pA／pF±10pA／pF（＋50mV，标本数=9），而在DIV〉6d的发育过程中保持稳定；InR的半数最大激活膜电位（V1/2）在NSC分化前和DIV0—6d分别为9mV±3mV和12mV±3mV（标本数=9，P〈0．05），激活曲线右移，斜率参数K值无明显改变，但IDR激活特性在DIV〉6d的发育过程中无明显改变；IDR的失活特性NSC分化前后及不同发育阶段的神经元样细胞中均无改变。结论NSC分化／发育过程中，IDR的特性改变均发生在DIV0—6d，提示IDR通道在神经发育过程中发挥作用，且发育初始阶段对于细胞功能的成熟尤为重要。
- 郭洪波邹飞
- 关键词：干细胞延迟整流钾通道膜片钳术海马
- 胚胎肝细胞修复大鼠脑组织辐射损伤的研究
- 2010年
- 目的 研究胚胎肝细胞对脑组织辐射损伤的修复作用.方法 24只雌性SD大鼠按随机数字表法分为对照组、模型组和治疗组,每组8只.后2组大鼠行一次性全脑照射20GyX线制备脑辐射损伤模型,造模后1、7、14、21 d治疗组大鼠后尾静脉注射雄性大鼠胚胎肝细胞1 mL（3×106个/mL）,模型组大鼠尾静脉注射等量生理盐水.于每次输注后12h取各组大鼠血清,分光光度计测定丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）的水平,ELISA法测定肿瘤坏死因子α（TNFα）、白介素-1（IL-1）和白介素-6（IL-6）的含量.造模28 d后处死大鼠,RT-PCR检测治疗组大鼠脑组织Y染色体mRNA的表达,HE染色观察海马区脑组织的病理变化.结果 造模后1、7、14、21、28 d,与对照组比较,模型组和治疗组大鼠血清SOD水平较低,而MDA、TNFα、IL-1和IL6水平较高,差异有统计学意义（P＜0.05）;与模型组比较,治疗组大鼠血清SOD水平较高,而MDA、TNFα、IL-1和IL6水平较低,差异有统计学意义（P＜0.05）;RT-PCR结果显示治疗组大鼠脑组织有Y染色体mRNA表达;HE染色显示治疗组大鼠海马区虽可见凋亡状态的尼氏小体,但大脑皮质较模型组大鼠明显增厚,可见再生的海马神经元.结论 胚胎肝细胞能够修复脑组织的辐射损伤.
- 叶昇胡海燕孟伟郭洪波
- 关键词：肝细胞细胞修复
- 恶性胶质瘤耐药细胞通过Beclin1上调自噬抵抗替莫唑胺化疗被引量：8
- 2013年
- 目的 分析Beclin 1与临床胶质瘤病理等级和胶质瘤复发间的关系,探讨其在胶质瘤耐药中的作用和机制. 方法 收集南方医科大学珠江医院和南方医院神经外科自2012年4月至2013年4月手术切除的胶质瘤标本53例（WHO分级Ⅰ级7例,复发2例；Ⅱ级9例,复发4例；Ⅲ级11例,复发6例；Ⅳ级9例,复发5例）,免疫组化和Western blotting检测胶质瘤标本中Beclin1的表达；体外培养胶质瘤耐药细胞系U251AR和非耐药U251细胞,Western blotting检测细胞中Beclin 1和耐药蛋白P-gP的表达；Western blotting检测双链小分子Beclin 1干扰RNA（siBeclin l）转染U251AR细胞48h后Beclin 1蛋白的表达;CCK8法检测不同浓度替莫唑胺（TMZ）作用U251、U251AR和U251AR-siBeclin 1后细胞活性；Western blotting检测200μmol/L TMZ作用U251、U251AR和U251AR-siBeclin 1 48 h后Capase-3的表达；吖啶橙染色和Western blotting分别检测干扰Beclin 1表达和HCQ对U251AR细胞自噬小体数量和Capase-3表达的影响. 结果 免疫组化染色结果显示Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤中Beclin 1阳性细胞数明显高于Ⅰ、Ⅱ级胶质瘤.Western blotting结果显示Ⅳ级、Ⅱ和Ⅲ级、Ⅰ级中Beclin 1的表达依次降低,Ⅲ、Ⅳ级复发肿瘤Beclin 1的表达量明显高于原发肿瘤,差异有统计学意义（P＜0.05）; U251AR中Beclin 1和耐药蛋白P-gP的表达量均高于U251细胞.与干扰对照组和空白对照组比较,转染siBeclin 1 48 h后干扰组Beclin 1蛋白的水平明显下降；在含TMZ（50,100,500和1000 μmol/L）培养基中培养24 h后,U251AR细胞存活率明显高于U251和si-Bec1-U251AR细胞,差异有统计学意义（P＜0.05）.200 μmol/L TMZ作用48 h后,U251细胞凋亡蛋白Caspase-3的表达量明显高于U251AR和si-Bec l-U251AR细胞.吖啶橙染色显示在TMZ培养U251AR 48 h后,HCQ和Beclin 1干扰都导致自噬小体形成明显减少,Caspase-3的表达增高,差异有统计学意义（P＜0.05）. 结论 Beclin 1与胶质瘤恶性程度、复发和�
- 汪鑫刘天助郭洪波宁瑜廖奕宏钟文宏黄洁棱颜晓慧
- 关键词：BECLIN自噬耐药替莫唑胺
- 大鼠海马神经干细胞外向电压门控性钾通道的电生理特性被引量：1
- 2008年
- 目的研究大鼠海马源神经干细胞（NSC）外向电压门控性钾通道（Kv）的电生理特性。方法利用无血清培养、单细胞克隆技术，体外培养SD大鼠海马组织源NSC。以免疫细胞化学方法对NSC及其分化后的子代神经细胞进行鉴定。应用膜片钳技术全细胞模式记录不同外向Kv通道的电生理特性。结果体外培养SD大鼠海马组织源NSC表达巢蛋白（nestin），在体外可诱导分化产生分别表达Tuj1和GFAP的细胞。全细胞膜片钳可记录到三种外向Kv通道：一种缓慢激活的、对四乙基胺（TEA）敏感的延迟整流钾电流（IDR）；一种快速激活和失活、可被4-氨基吡啶（4-AP）阻断的外向瞬时钾电流（IA），其在＋20mV和＋50mV的电流密度分别为11pA／pF±3pA／pF和29pA／pF±7pA／pF（标本数=11）；一种可被iberiotoxin（IbIX）抑制的大电导钙激活钾通道（BKCa），钳制电位＋80mV时，加入100nM IbTX前后的电流密度分别为56pA／pF±4pA／pF和45pA／pF±4pA／pF（标本数=6，P〈0．05）。结论体外培养的未分化状态下SD大鼠海马源NSC至少含有IDR、IA和BKCa三种外向Kv通道。
- 郭洪波邹飞
- 关键词：干细胞钾通道膜片钳技术海马
- 自噬与肿瘤：细胞的自我保护机制被引量：7
- 2013年
- 自噬是一个细胞自我消化的过程，是细胞自我清除受损蛋白和细胞器，降解细胞毒性物质，并为其提供能量的有效方式．是一种单纯应对各种生存压力的细胞自我保护机制。自噬与肿瘤关系非常密切，当前大多国内外文献支持自噬是既抑制肿瘤。又促进肿瘤的双刃剑。本文按肿瘤的发生、发展、治疗和预后的顺序，从细胞学角度对自噬的功能综述如下。
- 刘天助颜晓慧汪鑫宁瑜廖奕宏钟文宏黄洁棱周芳芳郭洪波
- 关键词：自噬肿瘤化学疗法放射疗法预后
- 一种新的肿瘤干细胞球囊研究技术——蛋清包埋技术被引量：2
- 2012年
- 目的探索一种新的能长期、高效保存并研究肿瘤于细胞球囊的技术。方法从恶性胶质瘤原代肿瘤细胞中培养出肿瘤干细胞。将第5代肿瘤干细胞球囊经蛋清石蜡两次包埋、切片后，行HE染色、免疫组织化学染色和免疫组织荧光染色，并与传统的肿瘤干细胞球囊包埋技术及球囊免疫组织荧光染色实验进行比较。结果应用蛋清石蜡两次包埋处理的球囊切片经HE染色后，球囊分布均匀、结构完整，胞核、胞浆颜色鲜艳、对比度高。球囊切片的免疫组织化学染色和免疫组织荧光染色能准确定位球囊中阳性细胞和阳性蛋白表达位点，可进行阳性细胞及蛋白的半定量分析。结论肿瘤干细胞球囊蛋清石蜡两次包埋切片技术能提高实验效率，减少实验误差，节省成本，优于传统球囊包埋技术及传统球囊免疫荧光技术。
- 刘天助颜晓慧汪鑫白义凤廖红展苑召虎吴炳义邱胜聪
- 关键词：肿瘤干细胞球囊
- 人脑胶质瘤多药耐药细胞株的构建及生物学特性鉴定被引量：1
- 2011年
- 目的体外构建胶质瘤耐甲磺酸伊玛替尼多药耐药细胞株，并研究其生物学特性。方法采用逐渐增加培养基中伊玛替尼药物浓度的方法诱导构建耐甲磺酸伊玛替尼的人脑胶质瘤U251细胞株（命名为U251AR）；CCK8法检测U25IAR、U251对多种化疗药物的IC50和耐药指数；QRT-PCR法检测耐药相关基因ABCC1、ABCB1、ABCB4、ABCG2mRNA的表达，流式细胞术检测ABCG2蛋白的表达。结果体外培养12个月后建立了稳定耐药的细胞株U251AR，与亲代细胞相比异形性不显著。U251和U251AR对化疗药物的IC50相比较差异均有统计学意义（P〈0．05），U251AR对甲磺酸伊玛替尼、阿霉素、顺铂的耐药指数分别为20．41、5．06、10．28，表现出多药耐药特征。QRT-PCR检测结果显示耐药细胞株U251AR中ABCC1、ABCB1、ABCB4、ABCG2mRNA的表达明显高于亲代U251细胞，流式细胞术检测结果显示U251AR中ABCG2蛋白的表达强于亲代U251细胞，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论成功建立多药耐药的胶质瘤细胞株U251AR，其多药耐药与ABCCl、ABCB1、ABCB4、ABCG2mRNA及ABCG2蛋白的表达上调相关。
- 白义凤廖红展刘天助郭洪波
- 关键词：神经胶质瘤多药耐药性细胞株
