“十五”国家科技攻关计划(2004BA519A19)
- 作品数：4 被引量：40H指数：3
- 相关作者：孙蕾刘秀梵陈素娟刘武杰孙学辉更多>>
- 相关机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所扬州大学内蒙古农业大学更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家重点基础研究发展计划黑龙江省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 禽流感病毒H5亚型主要保护性抗原在禽痘病毒中的高效表达被引量：2
- 2007年
- 将H5亚型禽流感病毒血凝素HA基因克隆入插入载体p11S中获得重组转移质粒p11SH5A,通过酶切鉴定获得了预期的转移质粒p11SH5A,将质粒p11SH5A和野生禽痘病毒(wtFPV)共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),通过蓝白斑筛选纯化得到重组病毒rFPV-11SH5A。以间接免疫荧光法证实,HA基因得到了表达。将该重组病毒rFPV-11SH5A以105PFU/只免疫7日龄SPF鸡,于7、10、14、18、21d分别采血分离血清检测HI抗体,于免疫21d后用105ELD50的野生病毒进行肌肉注射观察疫苗保护率。结果表明,该疫苗能提供100%的保护。
- 陈素娟孙蕾石火英彭大新刘秀梵
- 关键词：H5亚型禽流感病毒重组鸡痘病毒免疫效力
- 表达传染性法氏囊病毒超强毒流行株VP2基因重组新城疫病毒LaSota疫苗株的构建被引量：13
- 2008年
- 【目的】重组新城疫病毒(newcastle disease virus,NDV)作为新型的活病毒载体疫苗具有巨大的优势和应用前景,本研究旨在探讨新城疫病毒作为防制传染性法氏囊病超强毒(very virulent infectious bursal disease virus,vvIBDV)及新城疫重组二联活病毒载体疫苗的可行性。【方法】采用单股负链RNA病毒反向遗传操作技术,救获野生型NDV LaSota疫苗株rLaSota及表达vvIBDV Gx株VP2基因的重组疫苗株rLaSota-VP2,分别经滴鼻点眼途径免疫SPF雏鸡,免疫后21d分别以vvIBDVGx超强毒和新城疫强毒进行攻击。【结果】rLaSota及表达vvIBDV-VP2基因平均鸡胚致死时间均大于120h,脑内致病指数(ICPI)分别为0.4和0.36,静脉内致病指数(IVPI)均为0;接种后72～96h每毫升尿囊液EID50则分别达到109.0以上。rLaSota-VP2以106.0EID50一次免疫7日龄SPF鸡雏,免疫后3周对新城疫强毒致死攻击100%保护,对vvIBDV攻击免疫保护率达90%以上。【结论】重组病毒rLaSota-VP2保持了LaSota亲本疫苗株高滴度的鸡胚生长特性和低致病性及遗传稳定性,免疫雏鸡对新城疫强毒和传染性法氏囊病毒超强毒株的致死均形成有效免疫保护。本研究为研制传染性法氏囊病-新城疫重组二联活载体疫苗奠定了基础。
- 葛金英温志远高宏雷王永胡森鲍恩东王笑梅步志高
- 关键词：重组新城疫病毒反向遗传操作VP2基因
- 禽流感病毒A/Turkey/Canada/63毒株HA和NA基因的克隆及序列分析被引量：8
- 2006年
- 用SPF鸡胚增殖禽流感病毒(AIV)A/Turkey/Canada/63毒株,提取病毒基因组总RNA,应用RT-PCR技术分别扩增该病毒分离株的HA和NA基因全片段,并克隆到pMD18-T载体上。测序结果表明,该毒株的HA基因全长为1745bp,含有完整的阅读框架,编码566个氨基酸；NA基因全长1467bp,编码469个氨基酸。BLAST序列比较结果显示,该毒株HA基因属于H6亚型,NA基因属于N2亚型。将获得的HA和NA基因与AIV数据库中H6和N2基因进行遗传演化分析,表明该毒株HA基因与其他H6基因核苷酸的同源性为80.5%～87.3%,氨基酸的同源性为88.0%～93.1%；NA基因与其他N2基因核苷酸的同源性为86.0%～93.5%,氨基酸的同源性为90.6%～96.3%。
- 潘蔚绮刘明刘春国张云杨涛
- 关键词：HA基因NA基因
- 共表达H5亚型禽流感病毒HA和NA基因的重组鸡痘病毒及其免疫效力被引量：17
- 2006年
- 为了构建更为安全有效地抵抗高致病性H5亚型禽流感病毒的基因工程疫苗,将H5亚型禽流感病毒分离株的血凝素(HA)基因和神经氨酸酶(NA)基因定向插入鸡痘病毒转移载体p11S中,H5A和NA基因的启动子分别为PS和PE/L,获得用不同的启动子启动不同的外源基因且两基因盒方向为背向串联的重组转移载体p11SH5ANA。将p11SH5ANA转染至已感染鸡痘病毒282E4疫苗株(wt-FPV)的鸡胚成纤维细胞(CEF)中。p11SH5ANA与wt-FPV基因组DNA之间的同源重组产生了重组鸡痘病毒rFPV-11SH5ANA。通过在含X-Gal的营养琼脂上连续挑选蓝色病毒蚀斑,获得纯化的重组病毒。经传代证实该重组病毒具有良好的遗传稳定性。用105PFU的rFPV-11SH5NA免疫无特定病原体(SPF)鸡,能激发机体产生有效的血凝抑制(HI)抗体。初步的动物试验表明,该重组病毒能使经肌肉注射攻毒的SPF鸡抵抗H5亚型AIV的致死性攻击,保护率为100%,显示出一定的应用前景。
- 陈素娟孙蕾刘武杰孙学辉刘秀梵
- 关键词：H5亚型禽流感病毒重组鸡痘病毒血凝素神经氨酸酶
- H5N1亚型禽流感病毒NS1基因在昆虫细胞中的表达
- 将H5N1亚型禽流感病毒NS1基因插入到杆状病毒转移载体pFastBacl中,获得重组转移载体pFastBacl-NS1。将pFastBacl-NS1转化到DH10Bac感受态细胞中,筛选到重组转座子rBacmid-NS...
- 刘春国刘明杨涛张云
- 关键词：禽流感病毒H5N1亚型NS1基因杆状病毒表达
- 文献传递
