广东省社会发展领域科技计划项目(63005)
- 作品数：5 被引量：19H指数：3
- 相关作者：郭文熊英李霆郑欣王继德更多>>
- 相关机构：南方医科大学南方医院中国人民解放军第252医院更多>>
- 发文基金：广东省社会发展领域科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 靶向survivin基因的shRNA质粒表达载体的构建被引量：1
- 2009年
- 目的:利用pGenesil-1质粒构建靶向survivin基因的2个短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达载体。方法:设计2对shRNA,GC比在40%～55%之间,进而应用BLAST软件进行同源性剔除,保证所得shRNA序列靶向survivin基因,分别克隆至带有U6启动子的质粒pGenesil-1中,构建质粒表达载体,转化大肠杆菌DH5α菌株扩增,提取质粒,酶切鉴定后测序分析。双酶切重组质粒进行酶切鉴定。结果:成功构建靶向survivin基因的2个shRNA质粒表达载体,经双酶切鉴定及质粒测序结果完全符合设计要求。结论:经鉴定设计的2条shRNA已成功连接于质粒上,可以应用于进一步RNA干扰试验。
- 熊英郭文
- 关键词：RNA干扰质粒SURVIVINSHRNA
- 导入靶向survivin基因的shRNA质粒表达载体对大肠癌细胞生物学行为的影响被引量：3
- 2009年
- 目的:合成靶向survivin基因的shRNA并构建pGenesil-1-shRNA质粒表达载体,研究其对大肠癌Lovo细胞生物学效应的影响。方法:设计2条特异性靶向survivin基因的shRNA,与pGenesil-1质粒载体连接,导入大肠癌Lovo细胞、筛选稳定细胞株,Western Blot检测蛋白表达,流式细胞技术检测细胞生长周期,MTT法描绘细胞生长曲线。结果:筛选的稳定表达细胞内survivin蛋白的表达水平降低,survivin基因低表达的Lovo细胞停滞于G2/M期从而导致细胞生长速度减慢。结论:靶向survivin基因的shRNA能有效降低survivin基因在体内的表达,抑制大肠癌细胞的生长,为大肠癌基因治疗的可行性提供了有力的证据。
- 熊英王爱民郭文
- 关键词：大肠癌SURVIVINRNAI
- Smac/DIABLO和Survivin shRNA联合转染对大肠癌Lovo细胞凋亡的影响被引量：5
- 2008年
- 背景与目的:Smac/DIABLO是一种新发现的促凋亡蛋白,通过阻滞凋亡抑制蛋白(包括Survivin),激活caspase-9和caspase-3而发挥作用。本实验研究线粒体促凋亡蛋白Smac/DIABLO和沉默凋亡抑制基因Survivin联合应用对大肠癌细胞凋亡的影响及其促凋亡机制。方法:构建Survivin的shRNA-EGFP质粒和Smac-pcDNA3.1质粒,将其用脂质体单、共转染至大肠癌Lovo细胞;Western blot检测survivin基因和Smac基因的蛋白表达;Ho-chest33258染色观察凋亡核形态学变化,并粗略计数凋亡率;流式细胞仪PI单染测凋亡周期;caspase-3活性检测试剂盒检测caspase-3活性。结果:转染48h后单、共转染组的Smac蛋白水平增加而Survivin蛋白水平下降;单、共转染组Hochest33258染色可见明显的凋亡核形态学变化,凋亡率高于各对照组,且共转染组凋亡率(18.5±1.7)%高于单转染组(9.6±1.8)%、(15.0±0.3)%;Smac组G0/G1期增多为(51.0±6.2)%,而Survivin shRNA组S期细胞增多为(53.3±1.3)%(P<0.05);caspase-3活性比Smac和Survivin shRNA共转组为(169±3)%,高于Smac组(143±5)%、Survivin shRNA组(152±6)%,且都高于各对照组(P<0.05)。结论:Smac/DIABLO和Sur-vivin shRNA协同作用激活caspase-3途径,抑制大肠癌Lovo细胞生长而促进细胞凋亡,Smac阻滞细胞周期于G0/G1期而RNA干扰Survivin后细胞周期阻滞于S期。
- 高飞郭文王继德熊英
- 关键词：SMAC/DIABLOSURVIVINSHRNA大肠癌凋亡
- 靶向survivin基因的siRNA对大肠癌细胞生物学特性的影响被引量：6
- 2007年
- 目的向大肠癌细胞Lovo中导入靶向survivin基因的siRNA,研究其对Lovo细胞生物学效应影响。方法设计2条特异性靶向survivin基因的siRNA,体外转录法合成,通过脂质体导入Lovo细胞并检测转染后细胞内survivin基因表达水平及凋亡、增殖情况。结果细胞内survivin mRNA表达水平降低,细胞凋亡率升高,增殖能力减弱。结论所设计的靶向survivin基因的siRNA能有效降低目的基因的mRNA表达,诱导细胞凋亡,抑制细胞生长。为大肠癌基因治疗的可行性提供了有力的证据。
- 熊英郭文李霆
- 关键词：SURVIVINRNA干扰细胞生物学特性
- RNA干扰沉默survivin基因提高大肠癌LOVO细胞对5-FU敏感性的研究被引量：5
- 2008年
- 目的研究以survivin为靶标的小干扰RNA(siRNA)与化疗药5-氟尿嘧啶(5-FU)联合应用抑制LOVO细胞增殖的作用。方法利用筛选出的有效siRNA干扰survivin基因的靶序列,以脂质体为载体,将survivin siRNA转染至人大肠癌LOVO细胞中,用cell countingkit-8(CCK-8)法染色并计算5-FU及siRNA联用5-FU对LOVO细胞的抑制率。结果单用5-FU处理细胞,其IC50为0.56μg/mL,而加入5pmol siRNA后,其IC50降为0.28μg/mL,siRNA与5-FU联用对LOVO细胞的抑制作用较单用5-FU明显增强(F=28.4,P<0.01);Q值分析表明survivin siRNA与中低浓度的5-FU联用,有较好的协同作用(Q≥1.15)。结论survivin siRNA可显著增强5-FU对LOVO细胞增殖的抑制,提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性,克服耐药性的产生。
- 郑欣郭文
- 关键词：RNA干扰化学疗法LOVO细胞大肠癌
