山西省青年科技研究基金(2011021032-3)
- 作品数：3 被引量：16H指数：3
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- 大豆两个C2H2型转录因子基因序列特征及表达分析被引量：4
- 2014年
- 干旱气候已严重影响需水作物大豆的产量,而植物中C2H2型转录因子在应答非生物逆境中起到重要作用,因此充分挖掘优异抗旱大豆种质的基因资源及功能研究,为利用基因工程手段获得抗旱大豆种质奠定理论基础。本研究从大豆叶片中克隆到2个基因,分别命名为GmZAT9-like和GmZAT5-like。序列特征分析表明二者都属于C2H2型转录因子,均包含典型双锌指结构域和EAR保守基序,且氨基酸同源性低于其他物种同源基因。分子进化树分析表明,2个基因分别与拟南芥AtZAT9和ATZAT5基因划分为一类。基于荧光实时定量PCR技术检测到2个基因分别在叶片和根部组织特异性表达。通过半定量RT-PCR和荧光定量PCR分析大豆幼苗在PEG、SA、ABA、NaCl和4℃胁迫处理条件下2个基因的表达模式。结果表明,在PEG和SA胁迫条件下,叶片中GmZAT9-like基因表达在处理后期有升高趋势,而根部GmZAT5-like基因在处理早期受到诱导表达;ABA胁迫条件下,2个基因均在处理初期呈现表达升高趋势而后下降;盐和冷胁迫条件下,叶片中GmZAT9-like基因表达受到抑制,而根部GmZAT5-like基因表达在冷胁迫处理初期呈现升高趋势。因此推测这两个基因与大豆非生物胁迫响应相关。
- 侯思宇孙朝霞郭彬王玉国李贵全韩渊怀
- 关键词：非生物胁迫转录因子基因表达分析
- 苯丙氨酸与UV-C对苦荞芦丁含量影响及相关基因表达分析被引量：6
- 2011年
- 【目的】克隆与苦荞芦丁生物合成相关基因序列,探讨外源前体物质及UV-C辐射条件下芦丁含量及基因表达水平的影响,为分子选育高芦丁含量荞麦品种奠定基础。【方法】基于简并引物结合3′RACE的方法,克隆苦荞芦丁合成途径相关基因;高效液相色谱(HPLC)测定持续添加外源苯丙氨酸(L-phenylalanine,Phe)前体(1、2、4 mg.L-1)1—5 d和辐射时间(1、3、5、7 h)UV-C处理条件下叶片芦丁含量的变化,qRT-PCR分析相关基因表达水平。【结果】Phe(4 mg.L-1)处理1 d,芦丁含量(26.15 mg.gFW-1)为未处理对照(12.55 mg.gFW-1)的2倍;UV-C辐射3 h,芦丁含量(17.36 mg.gFW-1)明显高于对照;克隆到3个基因FtCHS,FtF3H和FtFLS-like,qRT-PCR分析表明Phe(1 mg.L-1)处理4 d,FtCHS相对表达量为对照的4.84倍,Phe(4 mg.L-1)处理5 d,FtF3H相对表达量为对照的1.06倍,Phe(2 mg.L-1)处理5 d,FtFLS-like相对表达量为对照的3.90倍;UV-C辐射1—3 h,FtCHS、FtF3H和FtFLS-like相对表达量分别高于对照。而FtFLS-like基因,仅在UV-C辐射1 h,相对表达量升高为对照的127.71倍。【结论】添加不同浓度Phe前体及不同时间UV-C辐射,芦丁含量变化及与芦丁合成相关基因表达量存在差异,为进一步探讨芦丁生物合成途径及影响因素奠定基础。
- 孙朝霞侯思宇杨武德
- 关键词：苦荞芦丁苯丙氨酸UV-C基因表达
- 大豆总RNA提取方法比较及其在基因克隆和表达分析中的应用被引量：6
- 2013年
- 为确立大豆叶、花组织提取总RNA的最佳方法,比较了植物总RNA提取试盒剂法、改良的CTAB-LiCL法和改良的热硼酸法的提取效果。通过RNA产量、纯度、凝胶电泳及后续的基因克隆和荧光定量PCR等分析,结果表明:热硼酸法所提取的叶、花总RNA含量约为其他两种方法的6倍;总RNAOD260/OD280值介于1.98～2.1;电泳条带完整清晰;应用获得的总RNA所克隆ZAT9-like基因,经测序获得885bp的核酸序列与ZAT9-like(登录号:XM_003517371.1)基因同源率达99%;荧光定量分析HistoneH3基因的扩增曲线与融解曲线峰型良好。说明该方法能够满足一般分子生物学下游实验的要求,是一种理想的针对大豆叶、花总RNA的的提取方法。
- 郭彬侯思宇黄可盛路阳韩渊怀王玉国
- 关键词：大豆总RNA
