国家自然科学基金(81070385)
- 作品数：5 被引量：19H指数：1
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- 相关机构：广州医科大学广州医学院广州市第一人民医院更多>>
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- 应用Gateway技术构建过表达β-catenin基因的慢病毒载体
- 2013年
- 目的应用Gateway技术构建靶向过表达β-catenin基因的慢病毒载体，验证该载体的功能。方法利用多位点Gateway克隆技术，通过BP重组反应，构建穿梭载体pDown—Ctnnb1；再通过LR重组反应，将pUp—EF1A、pDown—Ctnnb1、pTail-IRES／DsRed—Express2和母载体pLV．Des3d．P／puro4个质粒构建成表达载体pLV．EX3d．P／puro—EF1A〉Ctnnb1〉IRES／DsRed-Express2；再转化到感受态细胞stbl3，经PCR筛选菌落阳性克隆测序鉴定。将成功构建的慢病毒表达载体转染293T细胞，用实时荧光定量PCR法验证重组载体对β—catenin基因mRNA水平的影响。结果菌落PCR筛选和DNA测序鉴定显示入门克隆和表达载体插入片段序列正确，实时荧光定量PCR证实β-catenin基因mRNA水平显著上调（P〈0．01）。结论成功构建能显著上调β-catenin基因mRNA表达的慢病毒载体。
- 吴倩魏亚明李瑜元曹燕雯陈其慧
- 关键词：过表达慢病毒载体293T细胞
- 脊髓损伤神经源性肠道功能障碍的护理干预效果研究被引量：17
- 2014年
- 目的探讨护理干预对脊髓损伤神经源性肠道功能障碍的影响。方法选择2011年6月～2013年6月北京武警总医院收治的脊髓损伤神经源性肠道功能障碍患者875例，按照随机数字表法分为干预组和对照组，对照组给予常规护理，干预组在常规护理基础上给予综合护理干预。对两组患者肠道功能的恢复情况、生活质量的改善情况及患者的满意度进行比较。结果①干预组经护理干预后，各项肠功能指标均较对照组有所提高（P〈0．05）。②干预组经护理干预后，患者的生存质量总分[（60．72±11．24）分]及躯体功能[（14．12±2．79）分]、心理功能[（12.48±2．03）分]、角色功能[（15．98±2．58）分]均较对照组的生存质量总分[（48．53±12．18）分]及躯体功能[（12．96±2．28）分1、心理功能【（11．23±1．47）分】、角色功能[（13．54±2．08）分】有所提高，组间差异有统计学意义（P〈0．05），干预组经护理干预后患者的社会功能[（13．75±2．46）分】与对照组[（12．81±2．12）分】比较差异无统计学意义（P〉0．05）。③经干预后干预组患者的满意度为95．2％，明显高于对照组患者的满意度（66．6％），组间差异有统计学意义（P〈0．05）。结论实施护理干预能够尽早恢复肠道功能，对改善患者的生活质量具有一定的临床意义。
- 肖晓芬史晶滑蓉蓉吴春燕刘玉芬严向芳闫秀杰魏亚明
- 关键词：脊髓损伤护理干预
- 慢病毒介导稳定过表达β-catenin可促进间充质干细胞的增殖和迁移被引量：1
- 2013年
- 背景:β-catenin是wnt/β-catenin信号通路中最关键的信号分子,参与调控细胞增殖、分化以及组织自我修复的平衡。目的:建立慢病毒介导的过表达β-catenin基因的大鼠间充质干细胞株,观察β-catenin基因对间充质干细胞增殖和迁移的影响。方法:构建靶向过表达β-catenin基因的慢病毒载体pLV-catenin-RFP,采用人胚肾上皮细胞293T进行包装,收集、浓缩病毒,感染间充质干细胞株,经过嘌呤霉素加压筛选,建立稳定过表达β-catenin基因的间充质干细胞。通过实时荧光定量PCR、细胞生长曲线、MTT实验、Transwell体外细胞迁移实验研究稳定过表达β-catenin基因对间充质干细胞增殖和迁移的影响。结果与结论:成功包装靶向过表达β-catenin基因的慢病毒载体pLV-catenin-RFP,建立稳定过表达β-catenin基因的间充质干细胞。与空载对照pLV-RFP组和正常间充质干细胞组相比,实时荧光定量PCR证实,慢病毒pLV-catenin-RFP组mRNA表达明显增高(P<0.05);MTT和生长曲线显示pLV-catenin-RFP组使细胞倍增时间缩短(P<0.05),增殖能力增加;细胞迁移实验显示pLV-catenin-RFP组使细胞迁移能力增加(P<0.01)。结果可见慢病毒介导稳定过表达β-catenin基因能使间充质干细胞的增殖能力及迁移能力增强。
- 吴倩魏亚明李瑜元聂玉强曹燕雯
- 关键词：干细胞过表达Β-CATENIN基因间充质干细胞增殖迁移
- 骨髓间充质干细胞移植炎症性肠上皮组织中Wnt/β-catenin信号分子的表达被引量：1
- 2015年
- 背景:Wnt/β-catenin信号通路是干细胞调控中最关键的信号通路之一,参与调控细胞的增殖与分化。目的:观察Wnt/β-catenin信号通路中主要信号分子在骨髓间充质干细胞移植修复炎性肠疾病过程中的表达状况。方法:采用三硝基苯磺酸灌肠法制作SD大鼠炎症性肠病模型,并将绿色荧光蛋白标记的骨髓间充质干细胞经尾静脉注入体内,以注射生理盐水为移植正常对照,于移植第14和28天处死大鼠,取其大肠组织,采用q RT-PCR的方法进行检测Wnt/β-catenin信号通路中信号分子的表达情况。结果与结论:q RT-PCR检测结果显示,wnt3a和β-catenin在炎症性肠组织中相对表达量明显增加(P<0.05),而c-myc的表达量没有明显变化(P>0.05)。骨髓间充质干细胞移植修复后,wnt3a、β-catenin和c-myc的表达量都显著下降(P<0.05)。结果表明Wnt/β-catenin信号通路在炎症性肠病以及移植骨髓间充质干细胞后的修复过程中起着重要的作用,协助骨髓间充质干细胞向肠上皮细胞分化,促进肠炎症的好转,并修复炎症区域,恢复肠组织的稳态。
- 邢艳粉解绪红苑召虎崔业佳李瑜元聂玉强魏亚明
- 关键词：骨髓间质干细胞移植干细胞骨髓间充质干细胞WNT/Β-CATENIN信号通路
- 间充质干细胞移植修复炎性肠组织过程中的主导基因筛选
- 2014年
- 背景:前期研究已证明间充质干细胞可定植于炎症性肠黏膜修复炎症性肠组织。目的:应用表达谱芯片技术研究间充质干细胞移植修复前后大鼠炎症性大肠组织的差异基因表达情况,初步揭示与间充质干细胞定植、分化、修复炎症性肠组织过程相关的主导基因。方法:健康SD大鼠随机分为2组:移植实验组用三硝基苯磺酸灌肠制作炎症性肠病模型,造模后24 h经尾静脉注入绿色荧光蛋白标记的间充质干细胞;对照组以生理盐水代替三硝基苯磺酸同法灌肠处理。于移植后28 d取移植实验组和对照组大肠组织,利用基因芯片技术筛选移植实验组和对照组的差异表达基因。结果与结论:对照组和移植实验组大肠组织全基因组表达谱芯片结果有差异性表达的基因共388个(P<0.05,FC>2),其中表达上调基因191个、表达下调基因197个,主要与炎症反应、免疫反应和细胞分化3个方面有关。前10位显著上调和下调的差异基因(共20条)中,与炎症反应相关的有3个,与免疫反应相关的有3个,与干细胞分化相关的有2个。388个差异基因主要涉及33条信号通路(P<0.05),其中与炎症反应相关的有6条,与免疫反应相关的有8条,与干细胞分化相关的有5条。结果可见利用全基因组表达谱基因芯片的方法初步筛选了间充质干细胞修复炎症性肠组织的主要相关基因。
- 曹燕雯魏亚明李瑜元聂玉强吴倩
- 关键词：干细胞炎症性肠病间充质干细胞国家自然科学基金
