福建省自然科学基金(C0610008)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 相关作者：慕容慎行陈万金苏峻峰王柠吴志英更多>>
- 相关机构：福建医科大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 脊髓性肌萎缩症单细胞巢式聚合酶链反应技术的建立及初步应用被引量：3
- 2008年
- 目的建立单细胞巢式聚合酶链反应技术,并探讨进行脊髓性肌萎缩症基因诊断的可行性,为植入前遗传学诊断奠定基础。方法应用显微操作技术从外周血中分离单个淋巴细胞,制备单细胞DNA模板。分别应用巢式聚合酶链反应和引物延伸预扩增两种方法扩增正常对照者外周血中单个淋巴细胞运动神经元生存(SMN)基因第7、8号外显子,计算其阳性率,建立SMN1基因的单细胞巢式聚合酶链反应技术。并应用该项技术及限制性酶切对1例脊髓性肌萎缩症患者进行基因诊断。结果正常对照者巢式聚合酶链反应共扩增60个外周血单个淋巴细胞SMN1基因第7号外显子,其中54个扩增成功,阳性率为90%;引物延伸预扩增共扩增10个外周血单个淋巴细胞,巢式聚合酶链反应分别扩增SMN1基因第7、8号外显子,在20个聚合酶链反应扩增中共有17个单个淋巴细胞扩增成功,阳性率为85%。应用巢式聚合酶链反应和引物延伸预扩增两种方法对1例脊髓性肌萎缩症患者单个淋巴细胞扩增后经限制性酶切显示SMN1基因缺失,结果与全血基因组聚合酶链反应-限制性酶切一致。结论巢式聚合酶链反应和引物延伸预扩增方法各有优缺点,巢式聚合酶链反应耗时短、操作简便,可作为脊髓性肌萎缩症患者单细胞基因诊断的首选方法。
- 苏峻峰陈万金吴志英王柠林宇林珉婷慕容慎行
- 关键词：DNA引物基因扩增
- 运动神经元生存蛋白多克隆抗体的制备及该蛋白在脊髓性肌萎缩症患者骨骼肌中的表达
- 2007年
- 目的制备运动神经元生存(SMN)蛋白多克隆抗体,探讨 SMN 蛋白在细胞内的定位及在脊髓性肌萎缩症(SMA)患者骨骼肌中的表达情况。方法构建 pET-28a(+)/SMN 原核表达质粒,诱导表达 SMN-His 融合蛋白,免疫新西兰大白兔制备 SMN 多克隆抗体。构建 pcDNA3.1/myc-HisB-SMN 真核表达质粒并转染中国仓鼠卵母(CHO)细胞。收集骨折患者以及Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型 SMA 患者的骨骼肌组织各3份。分别采用免疫印迹及免疫荧光染色技术进行 CHO 细胞及骨骼肌组织的 SMN蛋白表达研究。结果成功制备了兔抗人全长 SMN 多克隆抗体,经鉴定其特异性及敏感性均较高。免疫荧光染色显示 SMN 蛋白在细胞质及细胞核中呈斑片状或颗粒状分布,以核周较为明显。免疫印迹结果显示骨折患者骨骼肌组织 SMN 与内参照磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)条带密度比值(sMN/GAPDH)平均为0.619,Ⅲ、Ⅱ型 SMA 患者 SMN/GAPDH 比值较低,均值分别为0.347和0.540,而Ⅰ型 SMA 患者骨骼肌中 SMN/GAPDH 比值显著降低,均值仅为0.079。结论高质量的兔抗人全长 SMN 多克隆抗体的制备为 SMA 的蛋白功能及发病机制研究奠定了基础,SMA 患者骨骼肌中 SMN 蛋白表达量可能与疾病的严重程度相关。
- 陈万金吴志英王柠苏峻峰林珉婷慕容慎行
- 关键词：肌萎缩脊髓性神经组织蛋白质类
