国家自然科学基金(81370746)
- 作品数：9 被引量：23H指数：3
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- 高氧导致20S蛋白酶体活性降低诱导早产大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞凋亡
- 2016年
- 目的建立早产大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)原代培养高氧细胞损伤模型,研究高氧对泛素化蛋白的降解及AECⅡ凋亡的影响。方法早产大鼠原代AECⅡ体外培养,利用950 m L/L O2建立高氧细胞损伤模型并随机分为空气组和高氧组。空气或高氧暴露24、48、72 h后,采用异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双染色结合流式细胞术检测细胞凋亡,实时定量PCR检测泛素mRNA表达,Western blot法检测细胞内总泛素化蛋白及凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2比值和caspase-3表达,利用特异性荧光底物检测20S蛋白酶体活性。结果与同时间点空气组相比,各时间点高氧组AECⅡ凋亡增加,AECⅡ中20S蛋白酶体活性降低,泛素mRNA和总泛素化蛋白表达增加,同时Bax/Bcl-2比值和caspase-3表达明显上调。结论高氧暴露引起AECⅡ中20S蛋白酶体活性降低,泛素化蛋白降解减少,通过上调Bax/Bcl-2比值和caspase-3表达诱导AECⅡ凋亡。
- 张燕雨卢红艳鞠慧敏常明王秋霞张强
- 关键词：高氧凋亡
- 需肌醇酶1介导的内质网应激通路参与高氧所致早产大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡
- 2016年
- 目的探讨需肌醇酶1(IRE1)介导的内质网应激通路与高氧暴露肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)凋亡的关系。方法原代培养早产大鼠AECⅡ,随机分为空气组和高氧组,建立高氧细胞损伤模型。在24、48及72h收集细胞,倒置相差显微镜观察细胞形态变化;AnnexinV/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡;RT-PCR及Westernblot分别检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、IRE1、X盒结合蛋白1(XBP1)及C/EBP同源蛋白(CHOP)m RNA及蛋白表达;免疫荧光检测CHOP表达。结果随着给氧时间延长,高氧组AECⅡ伸展呈不规则形,出现空泡样改变;高氧组AECⅡ凋亡率与同时间点空气组比较明显增加(P<0.05);随着氧暴露时间延长,高氧组GRP78、IRE1、XBP1及CHOPm RNA及蛋白表达升高,且较同时间点空气组明显上升(P<0.05);高氧组CHOP荧光强度高于同时间点空气组。高氧组CHOP蛋白表达与AECⅡ凋亡率、IRE1及XBP1蛋白表达呈显著正相关(r=0.97、0.85、0.88,均P<0.05)。结论高氧所致AECⅡ凋亡可能是通过激活IRE1-XBP1-CHOP通路来实现。
- 鞠慧敏卢红艳张燕雨王秋霞张强
- 关键词：内质网应激C/EBP同源蛋白
- 尿半胱氨酸白三烯E4诊断支气管肺发育不良的临床评价被引量：7
- 2016年
- 目的 探讨新生儿尿液半胱氨酸白三烯E4（CysLTE4）水平与支气管肺发育不良（BPD）的关系.方法 收集2014年11月至2015年10月南京医科大学第一附属医院收治的新生儿158例,出院后根据出院诊断将其分为3组：无肺部疾病的足月儿61例（足月组）,不伴有BPD早产儿52例（早产组）,早产儿BPD 45例（BPD组）.采用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测新生儿生后3d内尿液CysLTE4水平.比较3组患儿生后早期的尿CysLTE4水平,分析尿CysLTE4水平的诊断效能及与胎龄、体重的相关性.采用相关性分析、方差分析及χ^2检验等进行统计分析.结果 BPD组患儿生后3d内尿CysLTE4水平（191.0 ±29.3） ng/L,与早产组[（164.1±22.7） ng/L]和足月组[（151.6±41.9） ng/L]患儿比较差异有统计学意义（F=18.70,P＜0.05）.胎龄、出生体重与新生儿生后3d尿CysLTE4水平成负相关,Pearson相关系数分别为-0.33和-0.38,P＜0.01.截断值为187.7 ng/L时诊断效能最大,约登指数0.59,灵敏度77.8％,特异度81.4％.受试者工作特征曲线（ROC）下面积0.78,95％ CI：0.70 ～0.86（P ＜0.01）.结论 BPD患儿生后早期尿CysLTE4即显著上升,尿CysLTE4是有早期诊断意义的生物学指标.
- 金蕊卢红艳罗妍妍许云仙胡毓华陈筱青
- 关键词：白三烯E4支气管肺发育不良LEUKOTRIENE
- 沉默葡萄糖调节蛋白78基因增强高氧诱导的肺泡上皮细胞凋亡被引量：2
- 2014年
- 目的探讨小干扰RNA(siRNA)干扰内质网应激相关因子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)基因表达对高氧诱导肺泡上皮细胞凋亡的影响及作用机制。方法培养人肺腺癌A549细胞,用构建的siRNA片段通过脂质体LipofectamineTM2000转染A549细胞,将细胞分为高氧空白组、阴性对照(阴性siRNA)组和实验(GRP78-siRNA)组3组,利用950 mL/L O2建立高氧细胞损伤模型。48 h后通过实时定量PCR检测C/EBP同源蛋白(CHOP)mRNA的表达,Western blot技术检测CHOP蛋白表达,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果应用siRNA抑制GRP78表达后,GRP78 mRNA和蛋白表达下调、CHOP mRNA和蛋白表达上调、A549细胞凋亡增加。结论下调GRP78基因可增强高氧活化的CHOP凋亡途径,诱导肺泡上皮细胞凋亡。
- 卢红艳高楚楚唐炜张婷
- 关键词：小干扰RNA葡萄糖调节蛋白78肺泡上皮细胞
- 高氧调节早产大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞CCAAT增强子结合蛋白α和肺泡表面活性蛋白的表达被引量：5
- 2017年
- 目的探讨高氧状态下早产大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AEC2)中CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)和肺泡表面活性蛋白A(SP-A)、SP-B、SP-C、SP-D的表达及两者相关性。方法原代培养早产大鼠AEC2,利用950 mL/LO_2建立高氧细胞损伤模型,随机分为空气对照组和高氧实验组。分别于空气及高氧暴露后24、48、72 h,收获各组细胞。采用倒置相差显微镜观察各组细胞形态变化,实时荧光定量PCR及Western blot法分别检测C/EBPα和SP-A、SP-B、SP-C、SP-D mRNA及蛋白水平;CCK-8法检测细胞增殖。结果随培养时间延长,空气组细胞C/EBPαmRNA及蛋白表达逐渐降低,SP-A、SP-B、SP-C、SP-D mRNA和蛋白水平及AEC2增殖逐渐升高。高氧组细胞C/EBPα、SP-A、SP-B、SP-C、SP-D mRNA和蛋白水平及AEC2增殖呈先递增后递减趋势。与空气组相比,高氧组细胞C/EBPα、SP-A、SP-B、SP-C、SP-D mRNA和蛋白水平及AEC2增殖在高氧48 h明显增加。高氧组细胞C/EBPα蛋白水平与SP-A、SP-B、SP-C、SP-D蛋白水平及AEC2增殖呈正相关(r=0.96、0.98、0.92、0.97、0.90)。结论高氧暴露早期,C/EBPα可促进肺泡表面活性蛋白分泌,参与机体保护性调节作用,但随高氧暴露时间延长,丧失代偿保护作用。
- 卢衍敏卢红艳刘姜艳常明王秋霞唐炜
- 关键词：高氧C/EBPΑ增殖
- 脂氧素A4对小鼠肺上皮细胞高体积分数氧损伤的保护作用被引量：2
- 2017年
- 目的探讨脂氧素A4（lipoxin A4，LXA4）在小鼠肺上皮细胞（MLE－12）高体积分数氧（高氧）损伤中的保护作用。方法体外培养MLE－12细胞，分为空气组、空气＋LXA4组、高氧组、高氧＋LXA4组。采用反转录PCR （RT－PCR）验证LXA4受体（ALX） 。设置终浓度为1 nmol/L、10 nmol/L、50 nmol/L的LXA4预处理MLE－12细胞1 h、6 h、12 h、24 h，将细胞置〉850 mL/L的高氧定制容器中培养12 h，采用实时荧光定量PCR（qRT－PCR）检测血红蛋白加氧酶1（HO－1）表达量的变化，以确定LXA4的最佳实验浓度和最佳预处理时间；采用倒置相差显微镜观察细胞形态学变化；台盼蓝染色检测细胞存活率；细胞增殖与毒性检测试剂盒（CCK－8）法检测细胞活力水平；羟胺法检测超氧化物歧化酶（SOD）水平；qRT－PCR检测HO－1 mRNA表达；免疫荧光、Western blot检测HO－1蛋白表达；酶联免疫吸附测定单核细胞趋化蛋白1（MCP－1）、白细胞介素6（IL－6）的表达。结果MLE－12细胞表达ALX；LXA4的最佳干预浓度为10 nmol/L，最佳干预时间为12 h；高氧组细胞的存活率、细胞活力和SOD水平[（66±8）%、0.67±0.21、（2.38±0.65） kU/L]明显低于空气组[（84±5）%、1.22±0.27、（5.33±1.16） kU/L]，差异均有统计学意义（t＝3.98、2.55、4.86, P＝0.01、0.03、0.00），高氧＋LXA4组[（88±5）%、1.43±0.05、（6.50±0.19） kU/L]明显高于高氧组，差异均有统计学意义（t＝4.83、3.52、6.78，P＝0.01、0.02、0.00）；高氧组HO－1 mRNA和蛋白表达（0.57±0.03、1.31±0.11）高于空气组（0.13±0.03、0.24±0.10），差异均有统计学意义（t＝8.00、10.10，均P＝0.00），高氧＋LXA4组（0.78±0.08、1.82±0.09）明显高于高氧组，差异均有统计学意义（t＝3.94、4.82，均P＝0.00）；高氧组炎性因子MCP－1和IL－6水平[（1 025.18±35.51） ng/L、（1 136.65±160.01） ng/L]高于空气组[（467.63±13.69） ng/L�
- 罗妍妍陈筱青吴升华李冰洁李淑君卢红艳
- 关键词：脂氧素A4支气管肺发育不良
- CCAAT增强子结合蛋白A在大鼠肺发育过程中的动态表达及意义被引量：2
- 2019年
- 目的通过分析CCAAT增强子结合蛋白A(C/EBPα)在大鼠肺发育中的动态表达及其与肺组织细胞分化成熟的关系,探讨C/EBPα在肺发育过程中的作用。方法根据大鼠肺发育分期,选取孕15.5 d(腺体末期)、17.5 d(小管期)和19.5 d(囊泡早期)肺组织和出生12 h(囊泡中期,肺发育膨胀期)、4 d(囊泡末期,肺发育膨胀期)、7 d(肺泡期,肺泡化阶段)和14 d(肺泡期,平衡生长阶段)肺组织。采用HE染色观察肺形态结构,Western blot法检测C/EBPα和表面活性物质蛋白(SP)-A、SP-B、SP-C、SP-D表达,磷脂酰胆碱(PC)检测试剂盒检测PC分泌情况,过碘酸-雪夫氏染色法(PAS)检测肺组织糖原含量。结果1.C/EBPα及SP-A于孕15.5 d开始表达(0.36±0.02、0.01±0.01),SP-B、SP-C和SP-D于孕17.5 d开始表达(0.33±0.06、0.01±0.01、0.11±0.08),以后随肺发育均逐渐升高,C/EBPα、SP-A、SP-C于出生12 h达高峰(3.48±0.05、3.24±0.19、1.26±0.21),SP-D于出生4 d达高峰(1.48±0.10),以后逐渐下降,SP-B出生后仍持续升高,C/EBPα及SPs于出生14 d表达均趋于平稳。C/EBPα表达在胎肺期(孕15.5 d、17.5 d、19.5 d)及出生12 h与SP表达呈正相关(r=0.999、0.991、0.982、0.951,均P<0.05)。2.腺体末期PC含量少[(60.50±1.30) μg/g],之后随肺发育,PC分泌逐渐增高,其含量与C/EBPα表达无明显相关性(均P>0.05)。3.糖原在孕15.5 d表达较高(585.50±2.20),随肺发育糖原含量逐渐下降,孕17.5 d及19.5 d降低幅度尤为显著,出生7 d维持在相对稳定水平,C/EBPα与糖原含量在胎肺期呈显著负相关(r=-1.000,P<0.01)。结论C/EBPα在大鼠肺发育关键期起重要作用,C/EBPα可能通过SPs和PC合成分泌,促进肺分化成熟。
- 刘姜艳卢红艳卢衍敏常明王秋霞唐炜
- 关键词：肺发育肺表面活性物质糖原
- SENP1在肺发育过程中的作用及其对AECⅡ分化的影响
- 目的 通过检测SUMO特异性蛋白酶1（SUMO-specificproteases1，SENP1）、小泛素样修饰蛋白（smallubiquitin-relatedmodifier-1，SUMO1）在肺发育过程中的表达变...
- 万雪晴
- 关键词：肺发育SUMO化修饰
- 文献传递
- 内窥镜下采集大隐静脉作为冠状动脉旁路移植手术序贯桥的近期疗效被引量：1
- 2014年
- 目的评价内窥镜下采集大隐静脉作为序贯桥血管的近期临床效果。方法回顾性分析应用静脉序贯桥行非体外循环冠状动脉旁路移植手术(OPCAB)并完成随访的241例患者的临床资料,根据大隐静脉取材方式将患者分为内窥镜静脉采集(EVH)组85例和开放静脉采集(OVH)组156例,比较2组术后1年时下肢水肿范围、患者满意程度评分、临床预后(死亡、新发心肌梗死、再血管化)、桥血管通畅率。结果 2组性别、年龄、左室射血分数(LVEF)、左室舒张末期内径(LVEDD)、陈旧心肌梗死、高血压、左主干病变等比较差异无统计学意义(P>0.05),而EVH组体质量指数、糖尿病比例高于OVH组,差异有统计学意义(P<0.05)。与OVH组比较,EVH组序贯桥血管支数、序贯桥主干流量、主干搏动指数、每支桥血管流量和每支桥搏动指数等差异无统计学意义(P>0.05)。EVH组手术下肢水肿比例和程度均降低、患者满意度提高(P<0.05)。2组术后1年新发心肌梗死、再血管化及桥血管通畅率差异无统计学意义(P>0.05)。结论 CABG术中采取EVH采集小腿大隐静脉作为序贯桥血管能有效降低下肢水肿,提高患者满意度,但并不影响序贯静脉桥1年通畅率。
- 李波顾承雄李海涛杨俊峰韦华李京倖刘锐黄信生宋伟李晖李琴
- 关键词：大隐静脉近期疗效
- 内质网应激相关的蛋白激酶R样内质网激酶-转录活化因子4-CCAAT／增强子结合蛋白同源蛋白通路参与支气管肺发育不良大鼠肺细胞凋亡被引量：4
- 2015年
- 目的 探讨内质网应激（ERS）相关的蛋白激酶R 样内质网激酶（PERK）-转录活化因子 4（ATF4）-CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）通路在支气管肺发育不良（BPD）大鼠肺细胞凋亡中的作用。方法 将48只新生早产SD大鼠按随机数字表法分为 BPD 组和对照组。BPD 组持续暴露于体积分数为850 mL/L的高体积分数氧（高氧）中，对照组置于空气中。在7 d、14 d和21 d取肺组织，采用DNA断裂的原位末端标记法（TUNEL）检测肺细胞凋亡，实时荧光定量反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、PERK、ATF4和CHOP mRNA表达，W esternblot技术检测GRP78、磷酸化PERK（pho-PERK）、ATF4和CHOP蛋白表达。结果 随高氧暴露时间延长，BPD组大鼠肺细胞凋亡指数（AI）逐渐增加，与同时间点对照组比较差异均有统计学意义（7 d：15.50±0.58比 1.25±0.50，14 d：27.75±1.71比 3.25±0.96，21 d：50.50±3.70比 4.00±1.15；t=57.00、20.58、25.16，P均 〈0.01）；GRP78、PERK、ATF4和 CHOP mRNA 表达较同时间点对照组明显上升［GRP78：7 d（33.88±3.73）比（11.65±1.00），14 d（54.50±2.18）比（12.84±1.41），21 d（95.34±7.61）比（12.43 ±0.59）；PERK：7 d（5.23 ±0.92）比（1.45 ±0.46），14 d（7.60 ±1.56）比（2.18 ±0.97），21 d（16.55±0.50）比（2.90±1.18）；ATF4：7 d（23.04±2.45）比（12.56±2.81），14 d（28.66±2.66）比（15.18±2.92），21 d（36.63 ±2.99）比（15.14 ±2.09）；CHOP：7 d（2.21 ±0.19）比（0.81 ±0.02），14 d（4.19±0.17）比（0.90±0.08），21 d（6.08±0.38）比（0.88±0.10）；P均 〈0.05］；GRP78、pho-PERK、ATF4和CHOP蛋白表达较对照组亦明显增高［GRP78：7 d（1.33 ±0.03）比（0.85 ±0.04），14 d（1.31 ±0.02）比（0.92±0.01），21 d（1.82 ±0.28）比（0.87 ±0.01）；pho-PERK：7 d（0.68 ±0.02）比（0.54 ±0.01），14 d（1.04±0.01）比（0.65±0.01），21 d（1.29 ±0.02）�
- 卢红艳张婷王秋霞唐炜
- 关键词：内质网应激支气管肺发育不良凋亡
