国家自然科学基金(30671447)
- 作品数：5 被引量：16H指数：3
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- 相关机构：西北农林科技大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金陕西省科学技术研究发展计划项目更多>>
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- 苹果PGIP基因植物表达载体的构建及转化番茄的研究被引量：6
- 2010年
- 为了验证苹果多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(PGIP)基因表达产物对植物病原真菌的作用,获得转基因植株,培育抗病新品种,本研究用限制性内切酶SalⅠ、BamHⅠ将已克隆的苹果PGIP基因从克隆载体pMD-18T上切下,定向插入到植物表达载体pWR306的ED35s启动子和TNOS终止子中间,成功构建了苹果PGIP基因植物表达载体pWR306-PGIP及工程农杆菌,以番茄中蔬四号叶片及茎段为受体,通过农杆菌介导法转化,获得了8株PCR检测阳性的番茄植株。
- 石玉张军科张毅洪晓娟马锋旺
- 关键词：植物表达载体根癌农杆菌番茄
- SA诱导对苹果叶片中PGIP基因表达的影响被引量：2
- 2013年
- 以抗病性不同的两个苹果品种秦冠和礼泉短富为材料,研究在叶面喷施不同浓度的SA对苹果叶片中PGIP基因表达水平的影响。结果表明,0.1和0.01mmol/L的SA叶面喷施处理对苹果叶片PGIP基因表达在0～96h、0～129d均有影响。在SA诱导处理后0～96h内,两种浓度的SA处理均可以促进秦冠叶片PGIP基因的表达,低浓度处理后,PGIP基因表达上调达到峰值的时间较长,峰值较高;高浓度的SA处理能提高礼泉短富叶片PGIP基因的表达水平,低浓度的SA处理抑制其表达。在SA诱导处理后0～129d内,前期(13～27d)秦冠叶片PGIP基因的表达维持在较高水平且低浓度SA处理促进效应大,后期(27～129d)表达量下降,促进效应不明显;高浓度的SA处理促进礼泉短富叶片PGIP基因表达,处理后第40天达到峰值,而低浓度的SA处理抑制其表达。
- 瞿振芳符聪慧杨婷斐张军科
- 关键词：苹果PGIP基因水杨酸荧光实时定量PCR
- 苹果多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白的分离纯化被引量：4
- 2008年
- 以膨大期的富士苹果果皮为材料,通过匀浆、硫酸铵沉淀、透析、聚乙二醇6000浓缩、CM-SephadexC-50离子交换柱和Sephadex G-100分子筛凝胶过滤层析分离纯化出苹果多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白。用还原糖法测定其具有抑制多聚半乳糖醛酸酶活性,bradford法进行定量,经非连续SDS-PAGE分析为电泳纯,根据标准蛋白鉴定其亚基的分子量为41 kD。为苹果PGIP的纯化建立了一种有效的方法。
- 王晓利张军科汪勇杜敬
- 关键词：苹果纯化多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白
- 低浓度SA诱导桃叶片PGIP基因的表达变化被引量：1
- 2011年
- 通过改良的CTAB方法提取桃叶片总RNA,根据桃PGIP基因开放阅读框设计特异引物,以荧光实时定量PCR技术分析低浓度SA诱导处理后桃叶片PGIP基因的表达水平变化。结果表明:0.002mmol/L SA诱导处理桃叶片后引起PGIP基因表达水平上升,在2h出现峰值,表达峰值时(2h)的表达量是最低点(8h)表达量的2.4倍。清水对照在0～8h内PGIP基因的表达几乎没有变化,由此可见,0.002mmol/L的SA对桃叶片PGIP基因的表达有促进作用。
- 魏平张军科
- 关键词：定量PCRPGIP基因水杨酸
- 苹果PGIP基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达被引量：8
- 2010年
- 【目的】从富士苹果幼果果实中克隆多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(PGIP)基因,并进行原核表达,为进一步研究PGIP的生物学功能奠定基础。【方法】根据Genbank中已经发表的苹果PGIP基因序列设计引物,采用RT-PCR从苹果果实中扩增PGIP基因cDNA,回收目的基因片段并连接到pMD18-T载体,鉴定后进行测序。然后将PGIP全长cDNA和去信号肽的cDNA导入到pET-32a(+)表达载体中,分别获得融合表达质粒pET-PGIP和pET-PGIP-X,将其分别转化大肠杆菌BL21感受态细胞,用不同终浓度IPTG进行诱导表达,收集表达产物并进行SDS-PAGE电泳。对pET-PGIP-X基因工程菌表达产物的可溶性进行检测。【结果】苹果PGIP cDNA序列长为1 091 bp,编码区为993 bp,可编码330个氨基酸残基,将其命名为MdPGIP;重组表达质粒pET-PGIP和pET-PGIP-X在宿主大肠杆菌中分别表达出分子质量约49.6和46.1 ku的融合蛋白,pET-PGIP-X表达产物以包涵体的形式存在。【结论】成功克隆了苹果PGIP基因,并在大肠杆菌中获得高效表达。
- 熊帅张军科谌悦
- 关键词：苹果多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白基因克隆
