国家自然科学基金(30671446)
- 作品数：4 被引量：24H指数：3
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- 发文基金：国家自然科学基金陕西省自然科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”更多>>
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- 中国野生毛葡萄钙调蛋白基因克隆及序列分析(英文)被引量：4
- 2010年
- 于葡萄黑痘病发病盛期,用病叶压片法对高抗黑痘病的中国野生毛葡萄商-24接种黑痘病病原菌,采用mRNA差异显示技术进行抗黑痘病基因表达差异的研究.结果显示：（1）获得了T11GG/B0304-400、T11CC/S428-350、T11GG/S424-700、T11AG/S432-350、T11GG/S433-250、T11GG/S433-300、T11AG/S432-300、T11GG/S438-353和T11AG/S424-300等9个基因表达差异cDNA片段.其中T11GG/S438-353 mRNA片段表达在接种后3 d被诱导显著降低,并在之后2 d几乎检测不到.（2）采用RACE技术克隆了T11GG/S438-353 mRNA片段的cDNA全长序列;序列分析表明,该cDNA包含一个607 bp完整的开放阅读框架,编码149个氨基酸;其编码氨基酸序列与拟南芥、欧洲葡萄、柳杉、党参、无梗花栎、欧洲栗及寄生草钙调蛋白的一致性分别为99%、97%、94%、91%、90%、88%和77%.（3）本实验克隆到了负向调控中国野生毛葡萄抗黑痘病的钙调蛋白基因,并命名为VqCaM,其GenBank登录号为EU694099;实时荧光定量PCR结果再次验证VqCaM表达受葡萄黑痘病侵染下调,
- 李慧娥王西平王跃进杨亚州王倩
- 关键词：黑痘病毛葡萄MRNA差异显示钙调蛋白
- 华东葡萄抗逆相关基因VpSBP16原核表达及功能初步分析
- 2022年
- SBP-box基因在植物响应逆境胁迫中起着非常重要的作用,通过制备华东葡萄(V.pseudoreticulata)转录因子VpSBP16基因抗血清,为深入探究葡萄抗逆相关基因VpSBP16的功能试验提供基础。将已构建的pGEX-VpSBP16原核表达载体转入大肠杆菌中,利用IPTG诱导表达的蛋白作为抗原注射新西兰兔,从而获得VpSBP16基因抗血清,利用Western blot检测手段,以所获得的VpSBP16基因抗血清作为一抗检测毛葡萄‘商-24’叶、茎、花序、卷须和果实不同发育时期的VpSBP16蛋白表达情况。结果表明,原核表达载体pGEX-VpSBP16在大肠杆菌菌株DE3中高效表达,Western blot检测出与预期结果一致的分子量约为87kD的GST-VpSBP16融合蛋白。在新西兰兔的背部及腹股沟注射纯化后的目的融合蛋白获得了免疫-抗原反应良的多克隆抗血清。提取葡萄总蛋白后检测到VpSBP16蛋白表达量在花序中含量最低,而在果实发育的绿果期表达量较高。大肠杆菌表达系统中,pGEX-VpSBP16融合蛋白可以在27℃、0.6 mmol/L IPTG诱导条件下获得高表达。因此,笔者研究制备的多克隆抗血清具备效价高、特异性强的特点。VpSBP16基因不仅增强植物非生物胁迫的抗性,也可能会影响葡萄花发育和葡萄果实成熟,参与调节葡萄从营养生长到生殖生长的转变。
- 柴生樾王浩王西平
- 关键词：葡萄抗血清蛋白表达
- 葡萄属植物种质资源遗传多样性的RAPD分析被引量：10
- 2010年
- 以起源于中国的野葡萄12个种23个株系、欧美杂种6个品种、河岸葡萄3份、15个欧洲葡萄品种共47份材料为试材,采用RAPD技术对葡萄属植物种质资源遗传多样性进行研究。从520个随机引物中获得16个多态性好的引物用于RAPD分析,共获得DNA条带258个,其中多态性条带186个,DNA条带大小介于100~3 500 bp之间。应用STATISTICA获得了47份葡萄材料树谱图,供试材料可分为6类。欧洲葡萄、欧美葡萄杂种、河岸葡萄与中国野葡萄亲缘关系较远。在中国野葡萄中,山葡萄与其他种亲缘关系较远,刺葡萄次之。
- 侯鸿敏李慧娥肖欢王西平
- 关键词：葡萄RAPD种质资源
- 毛葡萄芪合成酶基因的克隆及序列分析被引量：12
- 2007年
- 芪合成酶是白藜芦醇生物合成过程中起关键作用的酶.通过RT-PCR,从高抗葡萄黑痘病的中国野葡萄毛葡萄商-24克隆了芪合成酶基因家族的2个成员VqSTS1和VqSTS2,其cDNA全长均为1 179 bp,编码392个氨基酸.氨基酸序列分析表明,VqSTS1和VqSTS2编码氨基酸247-257位点的IPN（S/F）AGAIAGN ＂是芪合成酶家族固有的氨基酸保守结构域,368-378位点的GVLFGFGPGLT＂是芪合成酶与查尔酮合成酶家族固有的保守序列特征.在编码的392个氨基酸中,VqSTS1和VqSTS2仅有12个氨基酸不同,氨基酸一致性达97%.多重比较分析显示,VqSTS1与VqSTS2与五针松、河岸葡萄、白粉藤、华东葡萄及欧洲葡萄等STS在氨基酸水平的一致性分别为65%、96%、97%和98%.将VqSTS1和VqSTS2登录GenBank,登录号分别为EF158856和EF158857.
- 王西平刘斌王跃进
- 关键词：毛葡萄基因克隆
