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人髌腱干细胞的分离培养与鉴定被引量：6: 2014年; [目的]研究从人的髌腱组织中分离出肌腱干细胞,并进行体外培养扩增鉴定。[方法]通过胶原酶消化法和低密度接种培养法从人的髌腱组织中分离出肌腱干细胞。通过三期分化鉴定,分离出的肌腱干细胞具有向骨细胞、脂肪细胞和软骨细胞方向分化的能力。通过流式细胞术,鉴定分离出细胞的干细胞表面标记因子的表达。通过免疫组织化学检测其肌腱细胞和软骨细胞相关蛋白的表达。[结果]从人的髌腱组织中成功分离出肌腱干细胞,大约有1.2%-1.4%分离出的细胞形成单细胞克隆。分离出的细胞表达CD44＋,CD105＋,CD29＋,CD45-,和CD14-,并具有向不同细胞分化的能力;另外,肌腱干细胞不仅表达肌腱细胞相关蛋白,如Ⅰ型胶原和tenascin C,也同时会表达软骨细胞相关的蛋白,如Sox 9和Ⅱ型胶原,但其并不表达糖氨多糖。[结论]成功分离鉴定人髌腱干细胞,虽然与间充质干细胞有相同的干细胞特性,是不同于其他间充质干细胞的一种特殊的间充质干细胞。肌腱干细胞的成功分离鉴定有利于以后干细胞相关的肌腱组织修复的研究,并有助于更好的理解肌腱干细胞在肌腱相关疾病和修复的作用。; 秦胜男王文傅世铨陈鸿辉董飞李爱国沈雁程玉姗陈启明; 关键词：髌腱

褪黑素对人增生性瘢痕成纤维细胞结缔组织生长因子表达的影响被引量：8: 2015年; 目的观察褪黑素对人增生性瘢痕成纤维细胞结缔组织生长因子（CTGF）表达的影响.方法组织块法分离培养原代人增生性瘢痕成纤维细胞（HSFB）,取第4代细胞分成4组：对照组、褪黑素（Melatonin） 10^-3mmol/L组、褪黑素受体拮抗剂（Luzindole）1mmol/L组、Luzindole1 mmol/L＋ Melatonin 10^-3 mmol/L组,分组培养48 h,采用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR,SYBR Green）检测细胞裂解液CTGF、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA） mRNA表达;细胞爬片免疫荧光细胞化学方法分析CTGF、Ⅰ型胶原（COL-Ⅰ）含量;酶联免疫吸咐试验（ELISA）法检测细胞培养液CTGF、COL-Ⅰ、Ⅲ型胶原（COL-Ⅲ）含量.结果 10-3 mmol/L褪黑素降低增生性瘢痕成纤维细胞CTGF、α-SMA mRNA表达及CTGF、COL-Ⅰ的含量（P＜0.05）,但COL-Ⅲ没影响.对照组、褪黑素组、Luzindole组、Luzindole＋褪黑素组CTGF和α-SMA mRNA分别为0.1294±0.006 1、0.086 9±0.003 1、0.1235±0.008 1、0.123 2±0.0094（F=30.130,P ＜0.01）和0.1347 ±0.0042、0.0847±0.003 1、0.128 9±0.002 6、0.128 2±0.004 1 （F=168.500,P＜0.01）;CTGF和COL-Ⅰ荧光细胞化学相对表达量为0.0135±0.0003、0.0084±0.0003、0.0126±0.0005、0.012 5±0.0004 （F=140.750,P ＜0.01）和0.0127±0.0008、0.0086±0.0004、0.0120±0.0009、0.0120±0.000 8（F=24.240,P＜0.01）;CTGF和COL-Ⅰ细胞培养液浓度（ng/L）为30.0569±1.2869、19.4254±0.924 5、26.673 8±0.9405、25.398 0±0.8478 （F=76.490,P＜ 0.01）和30.0445±1.1575、21.798 5±1.1260、26.5168±1.2923、25.459 4±1.705 7 （F=25.650,P＜ 0.01）;COL-Ⅲ细胞培养液浓度（ng/L）为47.141 4±3.532 6、53.498 2±4.589 9、52.532 5±5.239 8、46.427 1±4.204 2（F=2.680,P＜0.01）.结论褪黑素通过与受体结合,下调增生性瘢痕成纤维细胞CTGF、α-SMA mRNA表达,从而降低CTGF、COL-Ⅰ的含量.; 戴丽冰谢有富姚依村刘思隽徐家科刘志河沈雁; 关键词：褪黑素人增生性瘢痕成纤维细胞结缔组织生长因子

白藜芦醇通过抑制β-catenin表达诱导并促进人肌腱干细胞的成骨分化被引量：5: 2015年; [目的]观察白藜芦醇对人肌腱干细胞成骨分化的作用及其细胞信号通路。[方法]低密度接种法和胶原酶消化法分离培养人肌腱干细胞,结晶紫染色观察分离出的细胞形成的单克隆,体外诱导检测分离细胞的多向分化能力;在/无成骨诱导因子下,不同浓度白藜芦醇刺激人肌腱干细胞荧光定量PCR检测骨相关基因(Run x2和OCN)表达,免疫印迹检测Run x2蛋白表达,茜素红S染色观察钙盐沉积,免疫印迹检测β-catenin和NK-KB表达以检测相关细胞信号通路。[结果]成功从人髌腱组织中分离培养出肌腱干细胞,体外可被诱导成骨细胞和脂肪细胞;在/无成骨诱导因子影响下,白藜芦醇均促进骨相关因子Run x2和其下游因子OCN表达,且随着白藜芦醇的浓度升高而上调;无成骨诱导因子影响下,Run x2蛋白表达随着白藜芦醇浓度升高而增多,而在成骨诱导因子存在下,其蛋白表达变化不明显。在/无成骨诱导因子影响下,茜素红S染色显示白藜芦醇促进人肌腱干细胞的钙盐沉积。随着白藜芦醇浓度的提高,β-catenin表达减少,而NF-KB表达无明显变化。[结论]白藜芦醇可以体外诱导并促进人肌腱干细胞的成骨分化,可能通过调节β-catenin信号通路来调控。; 王文秦胜男陈鸿辉董飞李爱国沈雁; 关键词：白藜芦醇 Β-CATENIN 成骨分化

三种麻醉方法在骨科动物实验中效果比较被引量：7: 2012年; 目的比较3种麻醉方法在骨科动物实验中的效果,从而得出最佳方法。方法将80只实验动物随机分为3组,A组(速眠新II肌肉注射组),B组(0.6%戊巴比妥钠静脉注射组),C组(速眠新II肌肉注射+0.6%戊巴比妥钠静脉注射联合用药组),在骨科动物实验中分别进行麻醉、手术,比较3组的麻醉效果,观察其诱导期、麻醉期(麻醉维持时间)、苏醒期、麻醉效果、死亡率等。结果 A组麻醉的诱导期长,效果不好;B组麻醉的诱导期短,但麻醉效果不理想,死亡率高;C组麻醉的诱导期短,麻醉效果好,安全。结论 C组诱导期短,麻醉效果好,安全。无论在实验动物的伦理道德方面,还是在保证动物实验质量方面都是最佳选择。; 梁佩红江斌陈居铕谭见容杨小红; 关键词：戊巴比妥钠实验动物麻醉

维生素C对TNF-α及血清剥夺诱导的人髓核细胞凋亡的作用被引量：3: 2015年; 目的探讨维生素C(Vitamin C,Vit C)在TNF-α及血清剥夺诱导人椎间盘髓核细胞凋亡中的作用及机制。方法取脊柱矫形手术患者的髓核组织,消化法获得正常髓核细胞,取第3代细胞按不同处理因素分为Vit C作用组(A组)、TNF-α诱导组(B组)和血清剥夺组(C组),每组再分为以下亚组:A组分为A1组(基础培养液)、A2组(100μg/m L Vit C)、A3组(200μg/m L Vit C);B组分为B0组(对照组)、B1组(100 ng/m L TNF-α)、B2组(100μg/m L Vit C+100 ng/m L TNF-α)、B3组(200μg/m L Vit C+100 ng/m L TNF-α);C组分为C0组(对照组)、C1组(FBS浓度由8%降低为2%)、C2组(2%FBS+100μg/m L Vit C)、C3组(2%FBS+200μg/m L Vit C)。各组作用24 h后,采用流式细胞术检测各组膜联蛋白V、碘化丙啶双染后髓核细胞凋亡率;实时荧光定量PCR检测p53(基因编码相对分子质量为53×103的蛋白质)、脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase3)、Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原、Sox9和糖胺多糖(Aggrecan)m RNA表达。结果 A组:与A1组比较,A2、A3组的Vit C均能降低髓核细胞凋亡及p53、FAS、Caspase 3 m RNA表达(P<0.05),但A2、A3组间比较差异无统计学意义(P>0.05);A2、A3组的Vit C可促进髓核细胞Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原、Aggrecan、Sox9 m RNA表达,且A3组促进作用显著大于A2组(P<0.05)。B组:与B0组比较,B1组TNF-α促进了髓核细胞凋亡,增加了髓核细胞p53、FAS、Caspase 3 m RNA表达(P<0.05);与B1组比较,B3组的Vit C能降低髓核细胞凋亡及p53、FAS、Caspase 3 m RNA表达,而B2组的Vit C则增加其凋亡及p53、FAS、Caspase 3 m RNA表达,差异均有统计学意义(P<0.05)。C组:与C0组比较,C1组2%FBS能诱导髓核细胞凋亡,但降低了髓核细胞p53、FAS、Caspase 3 m RNA表达(P<0.05);与C1组比较,C3组的Vit C能降低髓核细胞凋亡及p53、FAS、Caspase 3 m RNA表达,而C2组的Vit C则增加其凋亡及p53、FAS m RNA表达,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Vit C能延缓或降�; 戴丽冰刘志河梁伟国姚依村徐家科叶冬平邹隆强沈雁; 关键词：维生素C 髓核细胞 TNF-Α 血清剥夺细胞凋亡椎间盘退变

单轴拉力刺激对人股薄肌腱干细胞炎性因子表达的影响: 2015年; 目的观察单轴拉力刺激对肌腱干细胞（TDSCs）炎性因子表达的影响.方法通过胶原酶法和低密度接种法,从人的股薄肌腱中分离TDSCs;流式细胞术检测分离出的TDSCs的表面标记因子;体外诱导检测其多向分化能力.将细胞接种在体外细胞力学加载仪上,分别施加4％、8％和10％的单轴拉力.显微镜观察拉力刺激后的排列情况.荧光定量PCR和Western blot 观察拉力后TDSCs环氧合酶-2（COX-2）和基质金属蛋白酶-1（MMP-1）的基因和蛋白表达情况.结果从人股薄肌腱中分离出TDSCs,表达CD29、CD44和CD105阳性,CD45和CD14阴性.拉力刺激4h,TDSCs未发生重新排列.4％拉力强度下MMP-1基因表达为0.090±0.007,与0％的0.247±0.032比较显著降低（P ＜0.05）;COX-2基因表达为0.005±0.001,与0％的0.005±0.001比较差异无统计学意义（P＞0.05）.与0％拉力强度比较,8％拉力强度下MMP-1和COX-2基因表达差异均无统计学意义（8％分别为0.168±0.040和0.007±0.001,而0％分别为0.134±0.075和0.006±0.003）（P＞0.05）.10％拉力强度下MMP-1和COX-2基因表达较0％拉力强度比较差异均显著升高（10％分别为0.047±0.003和0.496±0.036,而0％分别为0.011±0.003和0.005±0.003）（P＜0.05）.蛋白表达与基因表达相一致,与0％拉力强度比较,4％拉力强度下COX-2和MMP-1蛋白表达均降低,8％拉力强度下COX-2和MMP-1蛋白表达均无明显变化,10％拉力强度下COX-2蛋白表达升高,MMP-1有微弱升高.结论不同强度单轴拉力引起炎性因子的表达不同,低强度拉力降低炎性因子表达,高强度拉力升高炎性因子表达.; 秦胜男王文傅世铨程玉姗陈启明陈鸿辉; 关键词：间质干细胞炎症

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国家自然科学基金(81228013)

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