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粉防己碱对人鼻咽癌细胞株CNE增殖抑制和凋亡作用的研究被引量：19: 2007年; 目的:探讨粉防己碱(Tet)对人鼻咽癌细胞株CNE增殖抑制和凋亡的影响。方法:将人鼻咽癌细胞株CNE分为不同浓度Tet处理组,并设立对照组。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察Tet对人鼻咽癌细胞株CNE体外生长的抑制作用;采用透射电镜、琼脂糖凝胶电泳技术、流式细胞术Annenxin V/PI EGFP观察Tet对人鼻咽癌细胞株CNE凋亡的影响;采用逆转录-多聚酶链反应技术(RT-PCR)观察Tet对人鼻咽癌细胞株CNE凋亡相关基因mRNA表达的影响。结果:Tet呈浓度依赖性抑制癌细胞体外生长(P<0.05)。Tet处理细胞72 h后,电镜下可见细胞缩小,核裂解,凋亡小体形成;随着Tet浓度的提高,各Tet处理组DNA凝胶电泳梯形条带和细胞凋亡率渐趋明显。与对照组相比较,Bcl-2 mRNA的表达渐减弱,Bax基因mRNA表达渐增强(P<0.05)。结论:Tet可抑制癌细胞生长,促进癌细胞凋亡,其抗癌作用机制可能与下调Bcl-2基因表达和上调Bax基因表达有密切联系。; 邓雨霞孙新臣; 关键词：粉防己碱细胞凋亡基因调控

人高迁移率族蛋白组A1基因RNA干扰慢病毒载体的构建与鉴定被引量：6: 2008年; 目的:构建和鉴定人高迁移率族蛋白组A1(HMGA1)基因RNA干扰慢病毒表达载体。方法:针对已经筛选确定的HMGA1基因RNA干扰有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经HpaⅠ和XhoⅠ酶切后的pGCL-GFP载体(含U6启动子和绿色荧光蛋白)连接产生LV-sh HMGA1慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。用LV-sh HMGA1慢病毒载体、pHelper 1.0和pHelper 2.0等3种质粒共转染包装293T细胞,包装产生慢病毒,以293T细胞GFP蛋白的表达水平测定病毒滴度。结果:PCR和测序证实,成功构建LV-shHMGA1的慢病毒载体,病毒滴度达5×107TU/ml。结论:人HMGA1基因RNA干扰慢病毒载体的成功构建为进一步应用RNAi技术研究HMGA1基因的功能打下了基础。; 金志良孙新臣成红艳魏青何少忠; 关键词：RNA干扰慢病毒

粉防己碱对人肝癌细胞株7402的放射增敏作用被引量：1: 2007年; 目的:观察粉防己碱(Tet)对人肝癌细胞株7402的放射增敏作用。方法:以人肝癌细胞株7402为研究对象,应用MTT比色法、克隆形成实验检测Tet的细胞抑制效应;应用克隆形成实验观察Tet对7402细胞株的放射敏感性的影响;流式细胞术测定照射后7402细胞株细胞周期的再分布并观察Tet能否去除放射引起的细胞周期阻滞;Western blot检测CyclinB1、Cdc2和Cdc25C磷酸化形式的表达水平;细胞分裂指数实验观察Tet对照射后细胞分裂指数的影响。结果:不同浓度的Tet作用于人肝癌7402细胞株24h后,其细胞毒性呈剂量依赖性。Tet(0.5μg/ml)能明显降低放射后7402细胞的克隆形成率,其放射增敏比(SERDq)为1.76。流式细胞术结果显示,照射明显导致7402细胞株G2期阻滞,Tet能够去除放射引起的7402细胞G2期阻滞。Western blot显示细胞在受到X射线照射后,CyclinB1表达水平明显降低,Cdc2和Cdc25磷酸化形式的表达水平明显增加,分裂指数也明显降低;经Tet处理后,CyclinB1表达水平明显增高,Cdc2和Cdc25磷酸化形式的表达水平明显下降,分裂指数则增高。结论:Tet对7402细胞株有放射增敏作用,其作用机制可能与Tet去除放射引起的G2/M期阻滞有关。; 孙新臣邓文英李苏宜邓雨霞喻伟高恒东; 关键词：粉防己碱放射增敏 G2/M期阻滞

粉防己碱对人肝癌7402细胞株增殖与凋亡的影响被引量：10: 2007年; 目的:通过观察粉防己碱(Tetrandrine)对人肝癌7402细胞株增殖与凋亡的影响,初步探讨粉防己碱对肝癌的体外抗肿瘤效应。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、集落形成实验观察粉防己碱对人肝癌7402细胞株增殖的抑制效应,利用细胞DNA琼脂糖凝胶电泳、细胞凋亡荧光染色法及流式细胞术检测粉防己碱诱导肿瘤细胞凋亡的作用,以免疫细胞化学法检测粉防己碱对Bcl-2和Bax蛋白表达水平的影响。结果:MTT比色法、集落形成实验显示,粉防己碱对人肝癌7402细胞株增殖有抑制作用,其抑制效应具有剂量依赖的特点,细胞凋亡荧光染色法、琼脂糖凝胶电泳及流式细胞术表明,粉防己碱可诱导7402细胞凋亡,免疫细胞化学法显示,粉防己碱上调Bax蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达。结论:粉防己碱对人肝癌7402细胞株增殖的抑制效应具有剂量依赖性,并可诱导细胞凋亡,其抗肿瘤效应可能与凋亡相关基因表达的调控有关。; 邓文英孙新臣李苏宜; 关键词：粉防己碱凋亡肝癌

慢病毒介导RNA干扰抑制脑胶质瘤细胞HMGA1表达对洛铂化疗敏感性的影响被引量：3: 2009年; 目的:建立逆转录病毒介导入高迁移率族蛋白组A1(HMGA1)基因RNA干扰体外表达体系,并观察洛铂对脑胶质瘤细胞株SHG-44化疗敏感性的影响。方法:制备HMGA1 siRNA慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定;转染脑胶质瘤细胞株SHG-44后,RT-PCR检测其对细胞HMGA1基因表达的影响;MTT和克隆集落实验检测洛铂对阳性组和阴性组细胞生长、增殖的影响。结果:PCR和测序证实,成功构建HMGA1 siRNA的慢病毒载体;RT-PCR证实阳性组细胞存在HMGA1基因表达下调;分别用不同浓度的洛铂处理两组细胞24h后,MTT法和克隆集落实验显示阳性组细胞生长抑制率较阴性组细胞明显降低。结论:HMGA1 siRNA能特异性下调脑胶质瘤细胞SHG-44中HMGA1的表达并抑制了其对洛铂的敏感性。; 李帆孙新臣秦叔逵成红艳肖伟张伟孟庆红; 关键词：RNA干扰洛铂脑胶质瘤

基因多态性影响肿瘤化疗药物疗效或毒性作用的研究进展被引量：10: 2007年; 所谓基因多态性即基因组序列上单核苷酸的差异,它造成对肿瘤化疗药物的疗效或毒性因人而异。临床研究发现,以化疗药物氟尿嘧啶、伊立替康、铂类药物等为基础的化疗过程中,由于单核苷酸的多态性,患者出现临床疗效或药物毒性作用不同。作者就基因多态与化疗药物的临床疗效或药物毒性作用关系的研究进展作一综述。; 邓雨霞孙新臣; 关键词：基因多态性化疗药物肿瘤

DNA修复基因单核苷酸多态性在肿瘤化疗敏感性预测的应用进展被引量：4: 2008年; 孙宁陈宝安孙新臣; 关键词：单核苷酸多态性 DNA损伤修复肿瘤化疗敏感性

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南京市医学科技发展项目(ZKX0427)