国家自然科学基金(30940066)
- 作品数：5 被引量：5H指数：1
- 相关作者：戚峰李川刘彤李富新朱理玮更多>>
- 相关机构：天津医科大学总医院天津医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 靶向慢病毒载体RNA干扰小鼠血管内皮细胞异种抗原的研究
- 2010年
- 目的 使用慢病毒介导的RNA干扰（RNAi）方法抑制小鼠血管内皮细胞异种抗原半乳糖α1,3-半乳糖（Galα1,3-Gal）的表达.方法 经体外设计合成针对α1,3-半乳糖基转移酶（α1,3-GT）mRNA的序列特异性小发夹RNA（shRNA）,并构建携带α1,3-GT shRNA的重组慢病毒载体,以慢病毒感染小鼠血管瘤内皮细胞系EOMA细胞.采用荧光实时定量聚合酶链反应检测转染后的EOMA细胞α1,3-GT mRNA表达水平的变化;免疫荧光法和流式细胞术检测转染后的EOMA细胞异种抗原Galα1,3-Gal表达水平的变化.并将转染后的EOMA细胞与人血清混合培养,用四甲基偶氮唑盐比色法测定细胞存活率.结果 成功获得携带α1,3-GT shRNA的成熟重组慢病毒颗粒,转染EOMA细胞效率可达75%.与空白对照组、空转染组以及阴性siRNA对照组比较,重组慢病毒转染EOMA细胞后,能有效抑制α1,3-GT的表达,抑制率为88%（P＜0.05）;Galα1,3-Gal抗原表达水平明显降低（P＜0.05）;而空白对照组、空转染组和阴性siRNA对照组间的差异无统计学意义（P＞0.05）.重组慢病毒转染后的EOMA细胞与人血清混合培养后的存活率较各对照组明显提高（P＜0.05）.结论 成功构建靶向α1,3-GT基因的重组慢病毒载体,通过RNAi沉默α1,3-GT基因,抑制EOMA细胞异种抗原Galα1,3-Gal的表达,在体外实验中可减轻异种超急性排斥反应.
- 戚峰谷雅川吕承育章志翔何向辉朱理玮
- 关键词：异种移植RNA干扰慢病毒超急性排斥反应
- 颈部袖套法建立小鼠-大鼠异种心脏移植模型被引量：5
- 2013年
- 背景:小动物心脏移植模型是器官移植基础与临床研究的常用模型和重要手段,移植部位多为颈部和腹部。其中颈部异位移植最大的优点在于移植心位于颈部皮下,有利于对供心搏动情况进行直接观察,进而早期预判排斥反应的发生。目的:对小鼠-大鼠颈部异种心脏移植模型的麻醉方式、手术操作、围手术期处理等方面进行改进,以期建立更加稳定的动物模型。方法:采用改良袖套法建立异位异种心脏移植模型,将小鼠供心移植到受体大鼠的右侧颈部,主要改进了摘取供心的方法,并使用小动物麻醉机进行异氟烷吸入性麻醉。模型建立分为练习、稳定和定型3个阶段。取部分实验标本做组织病理学检查。结果与结论:模型建立练习阶段、稳定阶段和定型阶段手术成功率分别为53.33%,85.71%和96.15%,稳定及定型阶段手术成功率明显高于练习阶段(P<0.05);稳定和定型阶段手术总操作时间明显短于练习阶段(P<0.05)。组织病理学结果显示,异种心脏移植后出现供心血管内皮损伤、血栓形成、心肌实质损伤、间质出血和炎症细胞浸润等现象,较正常心脏和同系移植均有明显改变,并且有随移植术后时间延长而逐渐加重的趋势,证实了模型的可靠性。提示小鼠-大鼠颈部异种心脏移植模型操作简便、稳定可靠,短时间内即可熟练掌握,成功率高,是研究异种移植排斥反应的理想动物模型。
- 李川戚峰刘彤李富新王鹏志
- 关键词：心脏移植模型小鼠颈部袖套法异种
- 鼠异种心脏移植miRNA表达谱分析
- 2013年
- 目的研究小鼠-大鼠异种异位心脏移植后供心miRNA表达谱的变化,为有效控制异种移植排斥反应奠定实验基础。方法采用改良Cuff袖套法建立小鼠-大鼠异位心脏移植模型,分为同系对照组、异种24h组和异种停跳组。通过miRNA芯片杂交筛选出异种心脏移植排斥反应中显著差异表达的miRNA,选取芯片结果中差异表达显著的miR-146a和miR-451进行相对定量研究,通过TaqMan miRNA Assays技术验证芯片结果。结果异种24h组与同系对照组比较有24个miRNA差异表达显著,其中11个下调,13个上调。异种停跳组与同系对照组比较有25个miRNA差异表达显著,其中12个下调,13个上调。异种组的miR-146a表达水平高于同系对照组,miR-451表达水平低于同系对照组(F分别为15.530、13431.6,均P<0.05)。结论在小鼠-大鼠异种心脏移植排斥反应中出现多个miRNA显著差异表达,其中miR-146a高表达,miR-451低表达,提示miRNA在异种心脏移植排斥反应中发挥着重要的调控作用。
- 李川戚峰李富新刘彤
- 关键词：心脏移植异种微RNAS芯片分析技术排斥反应
- 微小RNA在移植免疫中的研究进展
- 2015年
- 器官移植已成为终末期器官功能衰竭的有效治疗手段，但移植后面临的免疫排斥反应尚未有效解决。微小RNA（miRNA）是近年发现的一类内源性非编码小分子RNA，其在病毒防御、器官形成、细胞增殖和凋亡等过程中发挥重要作用。近年来的研究表明，miRNA在器官移植排斥反应中也发挥着重要的调控作用，但其具体作用机制目前仍不完全清楚。如能进一步研究miRNA在移植免疫中的调控机制并确定其靶基因，则有可能成功诱导免疫耐受，进而对器官移植的发展起到巨大的推动作用。
- 李川戚峰
- 关键词：微小RNA器官移植排斥反应免疫耐受
- 中华眼镜蛇毒结合免疫抑制剂控制异种移植排斥反应
- 2010年
- 目的:探讨协调性和非协调性异种移植免疫排斥不同机理,寻找中华眼镜蛇毒结合免疫抑制药物的最佳治疗方案。方法:采用改良的Heron颈部套袖法分别建立小鼠对大鼠,豚鼠对大鼠异种异位心脏移植模型,受体大鼠各分为4组:1组仅行异种移植不给药;2组联合应用中华眼镜蛇蛇毒因子、环磷酰胺、FK506;3组将2组中华眼镜蛇毒剂量加倍;4组在2组用药组合基础上再加用前列腺素E1。结果:给药组移植供心存活时间明显延长,尤其在小鼠对大鼠模型给予PGE1后(小鼠4组6.92d)及豚鼠对大鼠模型蛇毒因子剂量加倍后(豚鼠3组27.33h)。两类模型给药后CH50,异种抗体IgM明显降低,并逐渐出现急性血管排斥反应改变。结论:异种移植后的超急性排斥反应和急性血管排斥反应存在着密切的相互关联,是统一的排斥过程中具有不同特点的两个阶段。中华眼镜蛇毒联合多种免疫抑制药物可控制异种排斥,尤其对非协调性异种移植有更大的作用。
- 戚峰朱理玮何向辉邱宇杰王鹏志
- 关键词：异种移植心脏超急性排斥
