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C、Y、W 135群脑膜炎球菌荚膜多糖化学结构核磁共振检测方法的建立被引量：5: 2015年; 目的建立基于核磁共振(nuclear magnetic resonance,NMR)技术检测C群脑膜炎球菌荚膜多糖(group C meningococcal capsular polysaccharide,GCMP)、Y群脑膜炎球菌荚膜多糖(GYMP)和W135群脑膜炎球菌荚膜多糖(GWMP)化学结构的方法。方法建立1H-NMR检测方法:使用布鲁克600 MHz超导傅里叶核磁共振谱仪,配置5 mm BBO正向宽带高分辨液体探头。脉冲程序为水峰压制(zgpr),温度为298 K(25℃)。具体参数设置如下:中心频率约为4.7 ppm;图谱宽度为7 211 Hz;采样时间为2.272 s;弛豫延迟时间为2 s;扫描次数为512次;信号经傅里叶转换后加入1.0 Hz的窗口函数,检测结果使用Topspin 3.0软件进行处理。验证该方法的专属性、重复性及中间精密性。结果 5批GCMP、GYMP和GWMP检测结果的CV值均小于0.35%;3个浓度GCMP、GYMP和GWMP在相同的操作条件下以及不同工作日间、不同实验员间的检测结果的CV值均小于0.35%。结论建立的1H-NMR检测方法简便、快速、准确,检测GCMP、GYMP和GWMP具有极高的专属性、重复性和中间精密性,适用于疫苗生产研究中GCMP、GYMP和GWMP样品的定性结构鉴定。; 李阿妮于旭博罗树权胡浩孔素娟袁菲杨英英刘方蕾吴兵陈作江赵志强谢贵林; 关键词：脑膜炎球菌荚膜多糖核磁共振

载体蛋白质破伤风类毒素两种精制方法的研究被引量：1: 2014年; 目的比较两种柱层析方法纯化破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT或TTd)化学特性和免疫原性。方法以硫酸铵盐析一步纯化TT原液,再分别以Superdex 200和Sephacryl S-300 HR柱层析进一步纯化,并对纯化TT进行各项化学特性及小鼠免疫原性检测。结果经硫酸铵盐析纯化,TT纯度可达85%左右,再经柱层析纯化后,两种方法测定(SDS-PAGE和HPLC)TT单体含量(纯度)均可达95%以上,盐析和柱层析两步纯化后,蛋白质回收率均在45%以上,各项检定指标均符合《中国药典》三部(2005年版)中《吸附破伤风疫苗制造及检定规程》的要求;纯化TT在小鼠体内产生了较好的免疫原性。结论经一步或多步纯化可显著提高TT的纯度,并最大限度地减少TT二聚体和多聚体含量;采用两种柱层析方法制备的纯化TT具有更好的化学特性和良好的免疫原性。本实验为多糖-蛋白质结合疫苗及其他以TT为联合疫苗组分的疫苗提供了更加安全有效的蛋白质。; 吴兵范锋锋刘方蕾于旭博王欣茹罗树权方红春李燕婷陈作江谢贵林赵志强; 关键词：破伤风类毒素柱层析免疫原性

A群脑膜炎球菌荚膜多糖化学结构核磁共振检测方法的建立被引量：4: 2013年; 目的:建立基于核磁共振技术检测A群脑膜炎球菌荚膜多糖化学结构的方法。方法:对A群脑膜炎球菌荚膜多糖样品进行溶解,离心,转移等处理步骤,采用核磁共振谱仪检测,结果应用Topspin 3.0软件进行数据处理和结果分析。验证其特异性、重复性及中间精密性,并对其O-乙酰化程度和杂质进行分析。结果:A群脑膜炎球菌荚膜多糖样品经本实验建立的方法检测,通过水峰压制,空白组及氯化乙酰胆碱等检测结果显示方法具有良好的特异性;同一批次检测3次的结果具有较高的重复性;不同时期检测的结果表明方法的中间精密性良好;O-乙酰基含量符合WHO规定的最低限度(≥61.5%),检测同一供试品的CV值均<1%。结论:本研究建立的核磁共振检测法简便、快速、准确,检测A群脑膜炎球菌荚膜多糖具有极高的灵敏性、特异性、重复性和中间精密性,适用于疫苗生产研究中A群脑膜炎球菌荚膜多糖样品的定性结构鉴定。; 李阿妮于旭博罗树权胡浩吴兵赵志强谢贵林; 关键词：A群脑膜炎球菌荚膜多糖核磁共振

NMR法测定A,C,Y和W135群脑膜炎球菌荚膜多糖氧乙酰基含量被引量：8: 2017年; 目的:采用核磁共振(nuclear magnetic resonance,NMR)技术检测A,C,Y和W135群脑膜炎球菌荚膜多糖(groups A,C,Y,W135 Neisseria meningococcal capsular polysaccharides,GAMP,GCMP,GYMP,GWMP)氧乙酰基含量。方法:对A,C,Y和W135群脑膜炎球菌荚膜多糖样品进行溶解,离心,转移等处理步骤,采用核磁共振谱仪检测,并对检测参数D1,NS和计算标准进行优化使其满足定量检测要求。结果:确定的检测条件:D1值GAMP为18,GCMP,GYMP和GWMP为20;NS值均为128次,计算标准GAMP采用H-3和H-4与H1积分面积之比,GCMP采用H-7和H-8与H-3e积分面积之比,GYMP和GWMP采用H-7和H-9与H-3e积分面积之比。结论:NMR法简便、快速、准确,可用于检测A,C,Y和W135群脑膜炎球菌荚膜多糖氧乙酰基含量。; 李阿妮袁菲马钰王晶孔素娟谢贵林; 关键词：荚膜多糖

比色法与核磁共振法测定A、C、Y、W135群脑膜炎球菌荚膜多糖氧乙酰基含量的比较: 2017年; 目的比较Hestrin比色法(简称比色法)和核磁共振(nuclear magnetic resonance,NMR)法在检测A、C、Y、W135群脑膜炎球菌荚膜多糖氧乙酰基(O-Acetyl,OAc)含量的相关性和精密度。方法用比色法和NMR法测定A、C、Y、W135群脑膜炎球菌荚膜多糖及其多糖衍生物,Y、W135群荚膜多糖水解物的OAc含量,比较分析两种方法的相关性及精密度。结果两种方法检测A、C、Y、W135群脑膜炎球菌荚膜多糖OAc含量的决定系数分别为R^2≥0.954、R^2≥0.960、R^2≥0.969、R^2≥0.972;比色法检测3批C群脑膜炎球菌荚膜多糖(PSC)OAc含量的精密度,SD值分别为0.21、0.21、0.18,对应CV值分别为9.03%、9.01%、8.70%(95%置信区间);NMR法检测3批A群脑膜炎球菌荚膜多糖(PSA)OAc含量的精密度,SD值分别为0.66、0.78、0.83,对应CV值分别为0.72%、0.85%、0.93%(95%置信区间);结论比色法和NMR法在检测A、C、Y、W135群脑膜炎球菌荚膜多糖OAc含量方面相关性良好,精密度良好,核磁法较比色法精密度更高。; 袁菲李阿妮罗树权孔素娟马钰王晶李燕婷刘方蕾; 关键词：核磁共振法比色法

脑膜炎球菌结合疫苗中细菌内毒素检查方法的建立及系统验证被引量：2: 2013年; 目的:建立用于脑膜炎球菌结合疫苗中细菌内毒素含量的检测方法,研究其在脑膜炎球菌结合疫苗不同生产阶段应用的可行性,并对方法进行系统验证,以确保检查结果的真实性和准确性。方法:参考《中华人民共和国药典》2010年版三部附录,建立动态浊度法测定细菌内毒素含量,并验证生产过程中相关原辅材料本身对方法可靠性的影响,参考相关指导原则完成方法的系统验证。结果:方法的线性符合验证要求,测定范围为0.03～10 EU·mL-1;相关原辅料中的细菌内毒素含量均低于0.01 EU·mL-1,方法的专属性符合验证要求;添加实验结果显示标准品回收率均在80%～130%,表明方法准确性良好,样品本身对方法检定无影响;方法精密度和耐用性验证实验结果均能达到方法验证要求;方法定量限度为0.03 EU·mL-1。多次检查疫苗原液和成品多批次结果差异较小,细菌内毒素含量检定准确可靠。结论:经方法验证显示方法的线性、特异性、灵敏度和准确性等技术参数达到了相关验证要求,结果稳定可靠;各种原辅材料对细菌内毒素检查无影响。本研究为该疫苗细菌内毒素检查提供了更为快捷有效的质量控制手段,验证结果为进一步方法再验证提供了数据和应用支持。; 吴兵刘方蕾宣俊文于旭博王轶峰孔素娟袁菲谢贵林赵志强; 关键词：细菌内毒素检查脑膜炎球菌结合疫苗

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国家科技重大专项(2013ZX09402-302-215)

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