黑龙江省教育厅科学技术研究项目(10551158)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 相关作者：武正华唐晓波朱大岭王志刚纪宏宇更多>>
- 相关机构：哈尔滨医科大学附属第二医院哈尔滨医科大学更多>>
- 发文基金：黑龙江省教育厅科学技术研究项目黑龙江省科技攻关计划国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 抗人肝微粒体蛋白单克隆抗体细胞系的建立及鉴定
- 2006年
- 目的初步建立抗人肝微粒体蛋白单克隆抗体规模化制备技术平台,为制备抗人细胞色素P450(CYP450)亚型蛋白的单克隆抗体奠定基础。方法按常规方法进行细胞融合,以酶联免疫吸附测定法(ELISA)筛选杂交瘤,以ELISA、免疫组化(IH)、免疫印迹(Western Blot)、免疫沉淀(IP)对单克隆抗体加以鉴定。结果进行6次融合,共筛出216株杂交瘤,其分泌抗体类型为IgG1I、gG2aI、gG2b、及IgM。免疫组化(IH)图片上,人肝细胞浆内均可见阳性颗粒。免疫沉淀(IP)和免疫印迹(Western Blot)结果显示,所制备抗体与人肝微粒体蛋白有特异性结合。结论筛选制备的单克隆抗体杂交瘤能分泌抗人肝微粒体蛋白单克隆抗体,并且有较强特异性,为下一步研究提供了基础与技术平台。
- 赵振营朱大岭武正华王志刚纪宏宇于磊戴丽娟刘艳丽唐晓波
- 关键词：细胞色素P450单克隆抗体杂交瘤
- 抗人羧酸酯酶-Ⅱ单克隆抗体的制备与鉴定
- 目的:制备鼠抗人羧酸酯酶-Ⅱ（human carboxylesterases-Ⅱ,hCE-Ⅱ）单克隆抗体（mAb）并对其特性进行鉴定。方法:以含hCE-Ⅱ的人肝脏微粒体蛋白混合抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备...
- 武正华唐晓波王志刚纪宏宇于磊刘慧文朱大岭
- 关键词：单克隆抗体基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱
- 文献传递
- 抗人羧酸酯酶-Ⅱ单克隆抗体的制备与鉴定被引量：3
- 2007年
- 目的制备鼠抗人羧酸酯酶-Ⅱ(humancarboxyles-terases-Ⅱ,hCE-Ⅱ)单克隆抗体(mAb)并对其特性进行鉴定。方法以含hCE-Ⅱ的人肝脏微粒体蛋白混合抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备鼠抗hCE-Ⅱ的mAb,并用Protein-G亲和层析法纯化mAb。用间接ELISA法测定mAb的效价,以Westernblot鉴定mAb的特异性、免疫组化染色法对mAb相应的抗原进行组织定位。用免疫沉淀和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assistedlaserdesorption/ionizationtime-of-flightmassspectrometry,MALDI-TOF-MS)得到相应的肽质量指纹谱(peptidemassfingerprint,PMF),再通过Mascot在人类蛋白质数据库中分析比对鉴定mAb对应的抗原。结果获得1株可持续、稳定分泌抗hCE-Ⅱ的mAb的杂交瘤细胞系。杂交瘤细胞分泌的mAbIg的亚类(型)为IgG1(κ),腹水mAb的效价达1×10-7。Westernblot分析显示,在Mr为62000处有1条清晰的带。免疫组化染色显示,该mAb可与肝细胞的浆蛋白结合(hCE-Ⅱ存在于肝细胞浆内微粒体),而不与血管平滑肌细胞内的蛋白结合。该mAb免疫沉淀物的Mr为62000,与hCE-Ⅱ的Mr相符。对免疫沉淀的蛋白质进行质谱鉴定证实,该mAb对应的抗原为hCE-Ⅱ。结论制备出的鼠抗hCE-Ⅱ的mAb效价高、特异性良好,为进一步研究hCE-Ⅱ的功能及其在肝癌等癌症的诊断和治疗中的作用提供了工具。
- 武正华唐晓波王志刚纪宏宇于磊刘慧文朱大岭
- 关键词：单克隆抗体基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱
