国家高技术研究发展计划(2001AA222251)
- 作品数：1 被引量：4H指数：1
- 相关作者：朱祯陈宛新孟昆常团结陈蕾更多>>
- 相关机构：中国科学院遗传与发育生物学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 棉铃虫幼虫中肠类胰蛋白酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达被引量：4
- 2002年
- 根据昆虫类胰蛋白酶序列的保守性设计了一对引物 ,以棉铃虫 (Helicoverpaarmigera)幼虫中肠总RNA反转录出cDNA第一链作为模板 ,利用RT PCR ,分离出了一种棉铃虫类胰蛋白酶 (HaT)基因的cDNA序列。分析表明该cDNA序列的开放阅读框为 6 96bp ,编码一个由 2 31个氨基酸残基组成的多肽 ,推测的氨基酸序列具有His57、Asp10 2 、Ser192 组成的电荷中继网 ,决定胰蛋白酶底物专一性的Asp189,底物结合部位的Gly2 16和Gly2 2 6残基 ,及其它胰蛋白酶结构上的保守区域。氨基酸序列同源性比较表明 :HaT同其它鳞翅目昆虫类胰蛋白酶有较高的同源性 ,同源性在 4 4 %～ 79%之间。为研究棉铃虫类胰蛋白酶基因 (hat)编码产物的活性 ,将其插入原核表达载体 pGEX4T 3和 pET2 3b中 ,并在大肠杆菌中进行了诱导表达 ,结果表明 ,GST HaT融合蛋白在大肠杆菌中进行了特异表达 ,非融合形式的表达产物HaT具有胰蛋白酶催化活性。
- 常团结陈蕾路子显陈宛新孟昆朱祯
- 关键词：棉铃虫幼虫中肠类胰蛋白酶酶活性
